Mikropipeta je vjerojatno najčešće korišten alat u laboratoriju. Koriste je znanstvenici u širokom rasponu sektora, uključujući akademsku zajednicu, bolnice i forenzičke laboratorije, kao i razvoj lijekova i cjepiva za prijenos preciznih, vrlo malih količina tekućine.
Iako može biti dosadno i frustrirajuće uočiti mjehuriće zraka u vrhu pipete za jednokratnu upotrebu, ako se ne uoče ili ignoriraju, to može imati ogroman utjecaj na pouzdanost i ponovljivost rezultata.
Dobra je vijest da postoje neke jednostavne mjere koje možete poduzeti kako biste spriječili stvaranje mjehurića zraka i poboljšali učinkovitost laboratorija, zadovoljstvo operatera, kao i točnost i preciznost rezultata.
U nastavku istražujemo posljedice ulaska mjehurića zraka u vrh pipete i što biste trebali učiniti sljedeće.
Posljedica mjehurića uVrh pipete
Čak i ako koristite najtočnije, vrhunske, dobro održavane, servisirane i kalibrirane pipete, pouzdanost vaših rezultata može biti pogođena laboratorijskim pogreškama. Kada mjehurići uđu usavjetmože imati nekoliko ishoda.
● Kada korisnik uoči mjehurić zraka, mora provesti neko vrijeme pravilno istiskujući usisanu tekućinu, izbaciti vrh i ponovno započeti postupak.
● Neotkriveni mjehurići zraka mogu rezultirati prijenosom malog volumena, mijenjajući tako koncentraciju reakcijskih smjesa, što dovodi do neuspjelih eksperimenata i upitnih ili nepouzdanih rezultata.
Ovi ishodi mogu imati nekoliko posljedica (1).
● Smanjena učinkovitost laboratorija – Testovi i analize morat će se ponavljati, što uzrokuje troškove rada i materijala, koji mogu biti prilično značajni.
● Sumnjivi ili netočni rezultati testova – Objavljivanje netočnih rezultata može imati ozbiljnije posljedice, uključujući pogrešnu dijagnozu i loše ishode liječenja pacijenata.
● Povlačenje rukopisa iz časopisa – Ako kolege ne uspiju replicirati vaše rezultate zbog mjehurića zraka koji uzrokuju netočne rezultate, radovi mogu biti povučeni.
Najbolje prakse za sprječavanje mjehurića zraka
U većini slučajeva mjehurići zraka u vrhovima pipeta uzrokovani su pogreškom operatera. Loša tehnika zbog nedovoljne obuke ili umora obično je temeljni problem.
Pipetiranje je vješt postupak koji zahtijeva 110% pažnje, odgovarajuću obuku i praksu kako bi se postigli dosljedni i točni rezultati.
Iako postoji nekoliko stvari koje možete učiniti kako biste smanjili općenite pogreške pipetiranja, u nastavku smo istaknuli neke najbolje prakse koje se mogu primijeniti kako biste izbjegli mjehuriće zraka uvrhovi pipeta.
Poboljšajte korisničku tehniku
Polako pipetirajte
Ako se klip prebrzo otpusti prilikom usisavanja, mjehurići zraka mogu ući u vrh. To može biti posebno problematično pri prijenosu viskoznih tekućina. Sličan učinak može se pojaviti ako se klip prebrzo otpusti nakon točenja.
Kako biste izbjegli stvaranje mjehurića zraka prilikom aspiracije, pazite da klip ručnih pipeta pomičete glatko i ravnomjerno, primjenjujući dosljednu silu.
Koristite ispravnu dubinu uranjanja
Ako se vrh pipete ne uroni dovoljno duboko ispod meniskusa spremnika tekućine, to može dovesti do usisavanja zraka i time stvaranja mjehurića.
Međutim, previše duboko uranjanje vrha može usisati više tekućine zbog povećanog tlaka ili se kapljice mogu pojaviti na vanjskoj strani vrha, stoga je važno uronitivrh pipetedo ispravne dubine.
Preporučena dubina varira ovisno o veličini, vrsti i marki pipete. Iako treba slijediti preporuke proizvođača, evo općeg vodiča Nacionalnog fizikalnog laboratorija.
Vodič za dubinu uranjanja vrha
Volumen pipete (µl) i dubina uranjanja (mm)
- 1 – 100: 2 – 3
- 100 – 1000: 2 – 4
- 1.000 – 5.000: 2 – 5
Prethodno mokroVrhovi pipete
Prilikom pipetiranja volumena većih od 10 µlvrhovi pipetaobično se prethodno navlaže tako da se nekoliko puta napune tekućinom koja se ispušta i istisnu u otpad radi poboljšanja točnosti.
Ako ih prethodno ne navlažite, može doći do stvaranja mjehurića zraka, posebno pri korištenju viskoznih ili hidrofobnih tekućina. Kako biste izbjegli stvaranje mjehurića zraka, obavezno prethodno navlažite vrhove prilikom pipetiranja volumena većeg od 10 µl.
Koristite tehnike obrnutog pipetiranja ako je prikladno
Viskozne tvari: Uobičajeni problem pri pipetiranju viskoznih tvari poput otopina proteina ili nukleinskih kiselina, glicerola i Tween 20/40/60/80 je često stvaranje mjehurića kada se koristi tehnika pipetiranja naprijed.
Polagano pipetiranje, korištenjem tehnike obrnutog pipetiranja, smanjuje rizik od stvaranja mjehurića pri prijenosu viskoznih otopina.
ELISA tehnika
Obrnuto pipetiranje se također preporučuje pri pipetiranju malih volumena uMikrotitracijske ploče s 96 jažicaza ELISA tehnike. Kada se mjehurići zraka uvlače u pipetu ili ispuštaju u jažice prilikom dodavanja reagensa, to može utjecati na vrijednosti optičke gustoće i rezultate. Preporučuje se obrnuto pipetiranje kako bi se ovaj problem smanjio ili uklonio.
Koristite ergonomske pipete
Stare pipete koje nisu dizajnirane s obzirom na ergonomiju zahtijevaju više fizičkog napora, umarate se, a vaša tehnika pipetiranja postaje neuredna i loša. Gore spomenute pogreške, poput brzog otpuštanja klipa, mogu se češće pojavljivati.
Ulaganjem u ergonomskije rješenje moći ćete održavati izvrsnu tehniku i spriječiti stvaranje mjehurića zraka zbog loše tehnike.
Odvojite vrijeme za obuku osoblja
Redovita obuka i procjena osoblja u tehnikama pipetiranja može osigurati smanjenje pogrešaka operatera i stvaranja mjehurića zraka.
Razmotrite više automatiziranih rješenja
Kao što je gore navedeno, većinu mjehurića zraka uzrokuje operater. Moguće je smanjiti pogreške operatera i povećati udobnost korištenjem elektroničkih pipeta ili fleksibilne platforme za rukovanje tekućinama kao što jeAgilent Bravo robot za rukovanje tekućinama.
Koristite dobru kvalitetuVrhovi pipete
Mikropipete se obično kupuju s oprezom, ali često se malo razmišlja o kvaliteti vrha pipete za jednokratnu upotrebu. Zbog utjecaja koji vrh ima na rezultate pipetiranja, standard ISO 8655 zahtijeva dodatnu kalibraciju ako se koriste pipete i vrhovi različitih proizvođača.
To bi moglo biti zato što mnogi jeftini vrhovi mogu u početku izgledati dobro, ali kada ih pažljivo proučite, mogu imati izbočine, ogrebotine i mjehuriće zraka ili biti savijeni ili sadržavati nečistoće.
Kupnja kvalitetnih nastavaka izrađenih od visokokvalitetnog polipropilena može smanjiti pojavu mjehurića zraka.
Zaključno
Ulazak mjehurića zraka u vrh pipete utječe na učinkovitost laboratorija, kao i na netočnost i nepreciznost rezultata. Naveli smo nekoliko stvari koje možete učiniti kako biste spriječili ulazak mjehurića zraka uvrh pipete.
Međutim, ako je loše kvalitetevrhovi pipetauzrokuju ulazak mjehurića zraka u vrh vaše pipete, bit će vam drago znati da naša univerzalna veličina odgovaravrhovi pipetaizrađeni su prema najvišim standardima i izrađeni su od vrhunskog čistog polipropilena.
Biomedicinska tvrtka Suzhou AceProizvode visokokvalitetne univerzalne vrhove za pipete volumena 10, 20, 50, 100, 200, 300, 1000 i 1250 µL, 96 vrhova/stalak. Iznimna izdržljivost – svi ACE nosači vrhova ispunjavaju zahtjeve korištenja s višekanalnim pipetorima. Sterilni, s filterom, bez RNase/DNase i apirogeni.
Dobrodošli da nas pitate za više detalja.
Vrijeme objave: 29. prosinca 2022.