Como selar unha placa de PCR

Introdución

Placas de PCR, un elemento básico do laboratorio durante moitos anos, están a gañar aínda máis presenza no entorno moderno a medida que os laboratorios aumentan o seu rendemento e empregan cada vez máis a automatización nos seus fluxos de traballo. Conseguir estes obxectivos preservando a precisión e a integridade dos experimentos pode ser difícil. Unha das áreas comúns onde se poden producir erros é co selado dePlacas de PCR, cunha técnica deficiente que permite a evaporación das mostras, altera o pH e, polo tanto, interrompe as funcións encimáticas, e fomenta a contaminación. Aprender a selar unPlaca de PCRelimina correctamente estes riscos e garante resultados reproducibles.

Atopa o selo axeitado para a túa placa de PCR

Tapas de placa vs. selos de película vs. tapas
Gorrasson unha boa forma de selar o prato cun selo hermético, ao tempo que che dan a flexibilidade de desselar e volver selar o prato con moita facilidade segundo o precises sen ningún desperdicio. Non obstante, as tapas teñen un par de inconvenientes clave.

En primeiro lugar, terás que mercar a tapa específica que sexa compatible, o que as fai pouco versátiles. Terás que asegurarte de que a tapa que escollas se axuste á placa, o que depende do seu fabricante, e escoller entre abovedada ou plana segundo o termociclador que esteas a usar.

En segundo lugar, aplicar as tapas á placa pode ser moi repetitivo e tedioso, co risco de contaminación cruzada se se coloca a tapa incorrecta no pozo incorrecto.

Aínda que os selos de película son menos flexibles en termos de extracción e substitución, son moi versátiles xa que se adaptan a calquera tipo de placa de PCR, independentemente de quen sexa o fabricante. Pódense cortar simplemente á medida, o que os fai moi eficaces.

Outra opción é unha tapa de chapa. Estas ofrecen menos protección que as tapas e os selos, e só se usan principalmente para coberturas a curto prazo para evitar a contaminación.

Sellos ópticos vs. sellos de película de lámina

Tanto se precisa un selo óptico, transparente ou unpelícula de folla de aluminiopara selar a túa placa depende do teu formato experimental.Películas de selado ópticoson transparentes para permitir observar as mostras, protexéndoas e evitando a evaporación. Tamén son especialmente útiles en experimentos de qPCR que implican realizar medicións moi precisas da fluorescencia directamente da placa, nese caso necesitarás unha película de selado que filtre a menor cantidade posible de fluorescencia. É importante asegurarse de que o selo ou a tapa que estás a usar teña un nivel de claridade óptica suficientemente alto para garantir que as lecturas sexan precisas.

As películas de aluminio son axeitadas para calquera mostra sensible á luz ou que se vaia almacenar a menos de 80 °C. Por este motivo, a maioría das mostras destinadas a un almacenamento a longo prazo requiren unha película de aluminio. As películas de aluminio tamén son perforables, o que resulta útil para examinar pozos individuais ou para a transferencia de mostras mediante agullas. Isto pode ocorrer manualmente ou como parte dunha plataforma robótica.

Ten en conta tamén que as substancias agresivas que inclúen ácidos, bases ou solventes requirirán un selo que poida soportalas, nese caso un selo de lámina é probablemente máis axeitado.

Adhesivo vs. película de selado térmico
Sellos de película adhesivason moi sinxelos e fáciles de aplicar. O único que precisa é que o usuario aplique o selo á placa e use unha ferramenta aplicadora sinxela para premer e formar un selo hermético.

Os selos térmicos son máis avanzados, xa que proporcionan un selo máis duradeiro que reduce as taxas de evaporación en comparación cun selo adhesivo convencional. Esta opción é axeitada se se quere almacenar mostras a longo prazo, aínda que isto supón un requisito adicional para o equipo de selado de placas.

Como selar unha placa de PCR

Método de selado de placas

Autoadhesivo

1. Asegúrate de traballar nunha superficie de traballo plana e estable

2. Retire a película da súa embalaxe e retire o soporte

3. Coloque con coidado o selo na placa, asegurándose de que todos os pozos estean cubertos.

4. Usa unha ferramenta aplicadora para aplicar presión sobre a placa. Comeza por un extremo e continúa ata o outro, presionando uniformemente.

5. Repite isto numerosas veces

6. Pase o aplicador polos pozos exteriores para asegurarse de que estes tamén estean debidamente selados.

Selladores térmicos

Os selos térmicos funcionan fundindo a película ata o bordo de cada pozo, coa axuda dun selador de placas. Para operar un selador térmico, consulte as instrucións proporcionadas polo fabricante do equipo. Asegúrese de que o fabricante ao que lle compra o equipo teña boa reputación, xa que é moi importante que o selo sexa axeitado, eficaz e hermético.

Consellos principais para selar placas

a. Ao aplicar presión ao selo, vaia en dirección horizontal e vertical para garantir un selo axeitado.

b. Sempre é unha boa práctica realizar unha proba do que se estea a facer, e isto non é diferente co selado de placas. Probe cunha placa baleira antes de usar unha con mostras.

c. Ao realizar a proba, retire o selo e comprobe que o adhesivo se adhira correctamente, sen ocos. Hai unha representación visual disto no primeiro documento de referencia. Se non selou a placa correctamente, ao retirar o selo haberá ocos onde o adhesivo non se adhira completamente á placa.

d. Para o envío e o transporte de mostras, pode resultar útil aplicar un selo de plástico enriba do selo de aluminio para unha protección adicional (especialmente contra perforacións).

e. Asegúrate sempre de que non haxa protuberancias nin engurras ao aplicar a película; isto provocará fugas e evaporación.