Comment sceller une plaque PCR

Introduction

plaques PCR, un élément essentiel des laboratoires depuis de nombreuses années, gagnent en importance dans le contexte moderne, à mesure que les laboratoires augmentent leur capacité de production et intègrent de plus en plus l'automatisation à leurs flux de travail. Atteindre ces objectifs tout en préservant la précision et l'intégrité des expériences peut s'avérer difficile. L'un des domaines où des erreurs peuvent fréquemment se glisser est celui de l'étanchéité desplaques PCR, avec une technique inadéquate permettant l'évaporation des échantillons, modifiant le pH et perturbant ainsi les fonctions enzymatiques, et favorisant la contamination. Apprendre à sceller unplaque PCRélimine correctement ces risques et garantit des résultats reproductibles.

Trouvez le joint adapté à votre plaque PCR

Capsules à plaque, films de protection et couvercles
CasquettesLes bouchons sont un bon moyen de sceller hermétiquement votre plaque, tout en vous permettant de la desceller et de la refermer facilement selon vos besoins, sans gaspillage. Cependant, les bouchons présentent quelques inconvénients majeurs.

Tout d'abord, vous devrez acheter un bouchon compatible, ce qui les rend peu polyvalents. Assurez-vous que le bouchon choisi est adapté à la plaque, ce qui dépend du fabricant, et choisissez un modèle bombé ou plat en fonction du thermocycleur utilisé.

Deuxièmement, l’application des bouchons sur la plaque peut être très répétitive et fastidieuse, avec un risque de contamination croisée si vous placez le mauvais bouchon sur le mauvais puits.

Bien que les films de protection soient moins flexibles en termes de retrait et de remplacement, ils sont très polyvalents car ils s'adaptent à tout type de plaque PCR, quel que soit le fabricant. Ils peuvent être facilement découpés, ce qui les rend très efficaces.

Une autre option est le couvercle à plaque. Ce type de couvercle offre une protection moindre que les bouchons et les joints et est principalement utilisé comme protection temporaire pour éviter la contamination.

Scellages optiques ou en film d'aluminium

Que vous ayez besoin d'un joint optique transparent ou d'unfilm d'aluminiumla manière de sceller votre plaque est décidée par votre format expérimental.Films d'étanchéité optiquesLes plaques sont transparentes pour permettre l'observation des échantillons, tout en les protégeant et en empêchant leur évaporation. Elles sont également particulièrement utiles pour les expériences de qPCR, qui nécessitent des mesures très précises de la fluorescence directement depuis la plaque. Dans ce cas, un film de scellage filtrant le moins possible la fluorescence est nécessaire. Il est important de s'assurer que le scellage ou le bouchon utilisé présente une transparence optique suffisante pour garantir des mesures précises.

Les films d'aluminium conviennent à tous les échantillons sensibles à la lumière ou devant être conservés à moins de 80 °C. C'est pourquoi la plupart des échantillons destinés à un stockage à long terme nécessitent un film d'aluminium. Les films d'aluminium sont également perforables, ce qui est utile pour l'examen des puits individuels ou le transfert des échantillons par aiguilles. Cette opération peut être effectuée manuellement ou via une plateforme robotisée.

Tenez également compte du fait que les substances agressives qui incluent des acides, des bases ou des solvants nécessiteront un joint capable de les résister, auquel cas un joint en feuille est probablement plus approprié.

Film adhésif ou thermoscellable
Joints de film adhésifLeur application est très simple et rapide. Il suffit d'appliquer le joint sur la plaque et d'utiliser un simple applicateur pour appuyer et former un joint étanche.

Les thermoscellages sont plus avancés, offrant une étanchéité plus durable et un taux d'évaporation réduit par rapport à un opercule adhésif classique. Cette option est adaptée au stockage à long terme d'échantillons, mais nécessite un équipement de scellage supplémentaire.

Comment sceller une plaque PCR

Méthode de scellement des plaques

Auto-adhésif

1. Assurez-vous de travailler sur une surface de travail plane et stable

2. Retirez le film de son emballage et retirez le support

3. Placez soigneusement le joint sur la plaque, en vous assurant que tous les puits sont couverts

4. Utilisez un applicateur pour appliquer une pression sur la plaque. Commencez par une extrémité et progressez vers l'autre, en appuyant uniformément.

5. Répétez cette opération plusieurs fois

6. Passez votre applicateur autour des puits extérieurs pour vous assurer qu'ils sont également correctement scellés.

thermoscellages

Le thermoscellage consiste à faire fondre le film sur le bord de chaque alvéole à l'aide d'une thermoscelleuse. Pour utiliser une thermoscelleuse, reportez-vous aux instructions fournies par le fabricant de l'équipement. Assurez-vous que le fabricant de votre équipement est fiable, car il est essentiel que le thermoscellage soit parfait, efficace et étanche.

Conseils pour le scellage des plaques

a. Lorsque vous appliquez une pression sur le joint, procédez dans les directions horizontale et verticale pour assurer une bonne étanchéité

b. Il est toujours conseillé de réaliser un essai, quelle que soit la méthode utilisée, et il en va de même pour le scellage des plaques. Effectuez un essai avec une plaque vide avant d'en utiliser une autre avec des échantillons.

c. Lors du test, retirez le joint et vérifiez que l'adhésif adhère correctement, sans laisser d'espace. Une représentation visuelle de ce point est disponible dans le premier document de référence. Si vous n'avez pas correctement scellé la plaque, des espaces apparaîtront lorsque vous retirerez le joint, là où l'adhésif n'aura pas complètement adhéré à la plaque.

d. Pour l'expédition et le transport des échantillons, il peut être utile d'appliquer un joint en plastique sur le joint en aluminium pour une protection supplémentaire (en particulier contre le perçage).

e. Assurez-vous toujours qu'il n'y a pas de bosses ou de plis lors de l'application du film ; ceux-ci provoqueront des fuites et une évaporation.