Sissejuhatus
PCR-plaadid, mis on aastaid olnud labori põhielement, muutuvad tänapäeva keskkonnas veelgi levinumaks, kuna laborid suurendavad oma läbilaskevõimet ja kasutavad oma töövoogudes üha enam automatiseerimist. Nende eesmärkide saavutamine, säilitades samal ajal katsete täpsuse ja terviklikkuse, võib olla keeruline. Üks levinud valdkond, kus vead võivad sisse hiilida, on tihendamisel.PCR-plaadid, halva tehnikaga, mis võimaldab proovide aurustumist, pH muutmist ja seega ensümaatiliste funktsioonide häirimist ning saastumise soodustamist. Õppida, kuidas sulgedaPCR-plaatvälistab need riskid õigesti ja tagab reprodutseeritavad tulemused.
Leidke oma PCR-plaadile sobiv tihend
Plaadikorgid vs. kiletihendid vs. kaaned
Mütsidon hea viis taldriku tihedaks sulgemiseks, pakkudes samal ajal paindlikkust taldriku hõlpsaks avamiseks ja uuesti sulgemiseks vastavalt vajadusele ilma raiskamiseta. Korkidel on aga paar olulist puudust.
Esiteks peate ostma sobiva korgi, mis muudab need mitte-paindlikuks. Peate veenduma, et valitud kork sobib plaadile, mis sõltub selle tootjast, ja valima kas kuplikujulise või lameda korgi, olenevalt kasutatavast termotsüklerist.
Teiseks, korkide plaadile paigaldamine võib olla väga korduv ja tüütu ning vale korgi valele süvendile panemisel võib tekkida ristsaastumise oht.
Kuigi kiletihendid on eemaldamise ja vahetamise osas vähem paindlikud, on need väga mitmekülgsed, kuna sobivad igat tüüpi PCR-plaatidele, olenemata tootjast. Neid saab lihtsalt mõõtu lõigata, mis muudab need väga tõhusaks.
Teine võimalus on taldrikukaan. Need pakuvad vähem kaitset kui korgid ja tihendid ning neid kasutatakse peamiselt ainult lühiajaliseks katmiseks saastumise vältimiseks.
Optilised vs. fooliumkile tihendid
Olenemata sellest, kas vajate optilist, läbipaistvat tihendit võialumiiniumfooliumkilePlaadi sulgemise otsustab teie eksperimentaalne vorming.Optilised tihenduskiledon läbipaistvad, et saaksite proove jälgida, neid samal ajal kaitstes ja aurustumist vältides. Need on eriti kasulikud ka qPCR-katsetes, mis hõlmavad fluorestsentsi ülitäpseid mõõtmisi otse plaadilt, sellisel juhul vajate sulgemiskilet, mis filtreerib välja võimalikult vähe fluorestsentsi. Oluline on veenduda, et kasutataval tihendil või korgil on piisavalt kõrge optiline läbipaistvus, et tagada täpsed näidud.
Fooliumkiled sobivad kõikidele valgustundlikele või alla 80 °C säilitatavatele proovidele. Sel põhjusel vajavad enamik pikaajaliseks säilitamiseks mõeldud proove fooliumkilet. Fooliumkiled on ka läbistatavad, mis on kasulik nii üksikute süvendite uurimiseks kui ka proovide nõelte abil ülekandmiseks. Seda saab teha käsitsi või robotplatvormi osana.
Samuti arvestage sellega, et agressiivsed ained, sealhulgas happed, alused või lahustid, vajavad neile vastupidavat tihendit, sellisel juhul on fooliumtihend tõenäoliselt sobivam.
Liim vs. kuumtihenduskile
Kleepkile tihendidOn väga otsekohesed ja kergesti paigaldatavad. Kasutajal on vaja vaid tihend plaadile peale kanda ja seejärel lihtsa aplikaatoriga see alla suruda, et tihe tihend moodustada.
Kuumtihendid on täiustatud meetodid, mis pakuvad pikemaajalisemat ja väiksema aurustumisega tihendit võrreldes tavapärase liimtihendiga. See valik sobib proovide pikaajaliseks säilitamiseks, kuigi sellega kaasneb täiendav nõue plaatide tihendusseadmete järele.
Kuidas PCR-plaati sulgeda
Plaadi tihendamise meetod
Isekleepuv
1. Veenduge, et töötate tasasel ja stabiilsel tööpinnal
2. Eemaldage kile pakendist ja seejärel aluspaber.
3. Asetage kate ettevaatlikult plaadile, veendudes samal ajal, et kõik süvendid on kaetud.
4. Kasutage plaadile surve avaldamiseks aplikaatorit. Alustage ühest otsast ja liikuge teise poole, vajutades ühtlaselt.
5. Korda seda mitu korda
6. Libistage aplikaatorit ümber välimiste süvendite, et veenduda ka nende korralikus sulgemises.
Kuumtihendid
Kuumtihendid toimivad nii, et kile sulatatakse iga süvendi serva külge plaaditihendaja abil. Kuumtihendaja kasutamiseks lugege seadme tootja juhiseid. Veenduge, et seadme tootja on hea mainega, kuna on väga oluline, et tihend oleks korralik, tõhus ja veekindel.
Plaatide tihendamise parimad näpunäited
a. Tihendile survet avaldades tehke seda nii horisontaalselt kui ka vertikaalselt, et tagada korralik tihendus.
b. Hea tava on alati teha proovitöö iga töö kohta ja see pole teisiti ka plaatide sulgemise puhul. Enne proovidega plaadi kasutamist testige seda tühja plaadiga.
c. Testimisel eemaldage tihend ja kontrollige, kas liim on korralikult kinni jäänud ja vahesid pole. Selle visuaalne esitus on esimeses teatmedokumendis. Kui te pole plaati korralikult tihendanud, siis pärast tihendi eemaldamist jäävad sinna vahed, kus liim pole plaadiga täielikult kinnitunud.
d. Proovide saatmisel ja transportimisel võib olla kasulik fooliumtihendi peale panna plasttihend, et tagada lisakaitse (eriti läbitorkamise eest).
e. Kile paigaldamisel veenduge alati, et poleks muhke ega kortse – need põhjustavad lekkeid ja aurustumist.
Postituse aeg: 23. november 2022