Com segellar una placa de PCR

Introducció

plaques de PCR, un element bàsic del laboratori durant molts anys, s'estan tornant encara més freqüents en l'entorn modern a mesura que els laboratoris augmenten el seu rendiment i utilitzen cada cop més l'automatització dins dels seus fluxos de treball. Assolir aquests objectius tot preservant la precisió i la integritat dels experiments pot ser difícil. Una de les àrees comunes on es poden produir errors és amb el segellat deplaques de PCR, amb una tècnica deficient que permet l'evaporació de les mostres, alterant el pH i, per tant, interrompent les funcions enzimàtiques, i afavorint la contaminació. Aprendre a segellar unPlaca de PCRelimina correctament aquests riscos i garanteix resultats reproduïbles.

Troba el segell adequat per a la teva placa de PCR

Tapes de placa vs. segells de pel·lícula vs. tapes
Gorressón una bona manera de segellar el plat amb un segellat hermètic, alhora que us donen la flexibilitat de dessegellar i tornar a segellar el plat fàcilment quan necessiteu sense cap malbaratament. Tanmateix, els taps tenen un parell d'inconvenients clau.

En primer lloc, haureu de comprar el tap específic que sigui compatible, cosa que els fa poc versàtils. Haureu d'assegurar-vos que el tap que trieu s'adapti a la placa, que depèn del fabricant, i triar entre bombat o pla segons el termociclador que utilitzeu.

En segon lloc, aplicar els taps a la placa pot ser molt repetitiu i tediós, amb el risc de contaminació creuada si es col·loca el tap equivocat al pou equivocat.

Tot i que els segells de pel·lícula són menys flexibles pel que fa a la seva extracció i substitució, són molt versàtils, ja que s'adapten a qualsevol tipus de placa de PCR, independentment de qui sigui el fabricant. Simplement es poden tallar a mida, cosa que els fa molt eficaços.

Una altra opció és una tapa de placa. Aquestes ofereixen menys protecció que els taps i els segells, i principalment només s'utilitzen per a cobertes a curt termini per evitar la contaminació.

Segells òptics vs. segells de pel·lícula de làmina

Tant si necessiteu un segell òptic, transparent o unpel·lícula de paper d'aluminiper segellar la placa depèn del format experimental.Pel·lícules de segellat òpticsón transparents per permetre observar mostres, alhora que les protegeixen i eviten l'evaporació. També són particularment útils en experiments de qPCR que impliquen fer mesures de fluorescència molt precises directament des de la placa, en aquest cas necessitareu una pel·lícula de segellat que filtri la mínima fluorescència possible. És important assegurar-se que el segell o la tapa que utilitzeu tingui un nivell prou alt de claredat òptica per garantir que les lectures siguin precises.

Les pel·lícules de paper d'alumini són adequades per a qualsevol mostra sensible a la llum o que s'hagi d'emmagatzemar a menys de 80 °C. Per aquest motiu, la majoria de mostres destinades a un emmagatzematge a llarg termini requeriran una pel·lícula de paper d'alumini. Les pel·lícules de paper d'alumini també són perforables, cosa que és útil per examinar pous individuals o per a la transferència de mostres mitjançant agulles. Això es pot fer manualment o com a part d'una plataforma robòtica.

També tingueu en compte que les substàncies agressives que inclouen àcids, bases o dissolvents requeriran un segell que les pugui suportar, en aquest cas un segell de làmina és probablement més adequat.

Adhesiu vs. Pel·lícula de segellat tèrmic
Segells de pel·lícula adhesivasón molt senzills i fàcils d'aplicar. Només cal que l'usuari apliqui el segell a la placa i utilitzi una eina aplicadora senzilla per prémer i formar un segell hermètic.

Els segellats tèrmics són més avançats, ja que proporcionen un segellat més durador que ha reduït les taxes d'evaporació en comparació amb un segellat adhesiu convencional. Aquesta opció és adequada si voleu emmagatzemar mostres a llarg termini, tot i que això comporta un requisit addicional per a l'equip de segellat de plaques.

Com segellar una placa de PCR

Mètode de segellat de plaques

Autoadhesiu

1. Assegureu-vos que treballeu sobre una superfície de treball plana i estable

2. Traieu la pel·lícula del seu embalatge i retireu el suport

3. Col·loqueu amb cura el segell a la placa, assegurant-vos que tots els forats estiguin coberts.

4. Utilitzeu una eina aplicadora per aplicar pressió a la placa. Comenceu des d'un extrem i aneu treballant fins a l'altre, pressionant uniformement.

5. Repetiu això nombroses vegades

6. Feu passar l'aplicador pels forats exteriors per assegurar-vos que també estiguin correctament segellats.

Segells de calor

Els segelladors tèrmics funcionen fonent la pel·lícula fins a la vora de cada pou, amb l'ajuda d'una segelladora de plaques. Per fer funcionar una segelladora tèrmica, consulteu les instruccions proporcionades pel fabricant de l'equip. Assegureu-vos que el fabricant del qual obteniu l'equip sigui de bona reputació, ja que és molt important que el segellat sigui correcte, eficaç i hermètic.

Consells principals per segellar plaques

a. Quan apliqueu pressió al segellat, aneu en direccions horitzontal i vertical per assegurar un segellat correcte.

b. Sempre és una bona pràctica fer una prova del que esteu fent, i això no és diferent amb el segellat de plaques. Proveu amb una placa buida abans d'utilitzar-ne una amb mostres.

c. Quan feu la prova, traieu el segell i comproveu que l'adhesiu s'hagi enganxat correctament, sense forats. Hi ha una representació visual d'això al primer document de referència. Si no heu segellat la placa correctament, quan traieu el segell hi haurà forats on l'adhesiu no s'hagi adherit completament a la placa.

d. Per a l'enviament i el transport de mostres, pot ser útil aplicar un segell de plàstic a sobre del segell de paper d'alumini per a una protecció addicional (especialment contra perforacions).

e. Assegureu-vos sempre que no hi hagi bonys ni arrugues en aplicar la pel·lícula, ja que això provocarà fuites i evaporació.