क्रायोभियलहरूतरल नाइट्रोजनले भरिएको देवारहरूमा, कोष रेखाहरू र अन्य महत्वपूर्ण जैविक सामग्रीहरूको क्रायोजेनिक भण्डारणको लागि सामान्यतया प्रयोग गरिन्छ।
तरल नाइट्रोजनमा कोषहरूको सफल संरक्षणमा धेरै चरणहरू समावेश छन्। आधारभूत सिद्धान्त ढिलो फ्रिज हो, तर प्रयोग गरिएको सही प्रविधि प्रयोग गरिएको कोषको प्रकार र क्रायोप्रोटेक्टेन्टमा निर्भर गर्दछ। यति कम तापक्रममा कोषहरू भण्डारण गर्दा ध्यानमा राख्नुपर्ने धेरै सुरक्षा विचारहरू र उत्तम अभ्यासहरू छन्।
यस पोस्टको उद्देश्य तरल नाइट्रोजनमा क्रायोभियलहरू कसरी भण्डारण गरिन्छ भन्ने बारेमा एक सिंहावलोकन दिनु हो।
क्रायोभियलहरू के हुन्?
क्रायोभियलहरू साना, बन्द गरिएका शीशीहरू हुन् जुन अत्यन्त कम तापक्रममा तरल नाइट्रोजन भण्डारण गर्न डिजाइन गरिएको हो। तिनीहरूले क्रायोप्रोटेक्टेन्टमा संरक्षित कोषहरू तरल नाइट्रोजनसँग प्रत्यक्ष सम्पर्कमा नआउने कुरा सुनिश्चित गर्छन्, जसले गर्दा कोषिकाहरू फ्र्याक्चर हुने जोखिम कम हुन्छ र तरल नाइट्रोजनको अत्यधिक शीतलन प्रभावबाट लाभ उठाउँछन्।
शीशीहरू सामान्यतया विभिन्न आकार र डिजाइनहरूमा उपलब्ध हुन्छन् - तिनीहरू समतल वा गोलाकार तल्लो भागको साथ आन्तरिक वा बाह्य रूपमा थ्रेड गर्न सकिन्छ। बाँझ र गैर-बाँझ ढाँचाहरू पनि उपलब्ध छन्।
कसले प्रयोग गर्छसाइरोभियाल्सतरल नाइट्रोजनमा कोषहरू भण्डारण गर्न
विभिन्न NHS र निजी प्रयोगशालाहरू, साथै कर्ड ब्लड बैंकिङ, एपिथेलियल सेल बायोलजी, इम्युनोलोजी र स्टेम सेल बायोलजीमा विशेषज्ञता हासिल गर्ने अनुसन्धान संस्थाहरूले कोषहरूलाई क्रायोप्रिजर्भ गर्न क्रायोभियलहरू प्रयोग गर्छन्।
यसरी संरक्षित गरिएका कोषहरूमा B र T कोषहरू, CHO कोषहरू, हेमेटोपोएटिक स्टेम र प्रोजेनिटर कोषहरू, हाइब्रिडोमास, आन्द्रा कोषहरू, म्याक्रोफेजहरू, मेसेन्काइमल स्टेम र प्रोजेनिटर कोषहरू, मोनोसाइट्स, माइलोमा, NK कोषहरू र प्लुरिपोटेन्ट स्टेम कोषहरू समावेश छन्।
तरल नाइट्रोजनमा क्रायोभियलहरू कसरी भण्डारण गर्ने भन्ने बारे सिंहावलोकन
क्रायोप्रिजर्भेसन भनेको कोषहरू र अन्य जैविक संरचनाहरूलाई धेरै कम तापक्रममा चिसो पारेर संरक्षण गर्ने प्रक्रिया हो। कोषहरूको जीवन्तता गुमाउनु नपर्ने गरी कोषहरूलाई वर्षौंसम्म तरल नाइट्रोजनमा भण्डारण गर्न सकिन्छ। यो प्रयोग गरिने प्रक्रियाहरूको रूपरेखा हो।
कोष तयारी
नमूनाहरू तयार गर्ने सही विधि कोषको प्रकारमा निर्भर गर्दछ, तर सामान्यतया, कोषहरू सङ्कलन गरिन्छ र कोष-समृद्ध गोली विकास गर्न केन्द्रित गरिन्छ। त्यसपछि यो गोलीलाई क्रायोप्रोटेक्टेन्ट वा क्रायोप्रिजर्भेसन माध्यमसँग मिसाइएको सुपरनेट्यान्टमा पुन: निलम्बन गरिन्छ।
क्रायोप्रिजर्भेसन माध्यम
यो माध्यम कोशिकाहरूलाई कम-तापमानको वातावरणमा संरक्षण गर्न प्रयोग गरिन्छ जुन तिनीहरूको अधीनमा हुनेछन्, भित्री र बाह्य कोशिका क्रिस्टलहरूको गठनलाई रोकेर र त्यसैले कोशिका मृत्युलाई रोकेर। तिनीहरूको भूमिका जम्ने, भण्डारण गर्ने र पग्लने प्रक्रियाहरूको समयमा कोशिकाहरू र तन्तुहरूको लागि सुरक्षित, सुरक्षात्मक वातावरण प्रदान गर्नु हो।
ताजा जमेको प्लाज्मा (FFP), हेपरिनाइज्ड प्लाज्मालाइट घोल वा सीरम-रहित, जनावरको घटक-रहित घोल जस्ता माध्यमलाई डाइमिथाइल सल्फोक्साइड (DMSO) वा ग्लिसरोल जस्ता क्रायोप्रोटेक्टेन्टहरूसँग मिसाइन्छ।
पुन: तरल नमुना गोलीलाई पोलिप्रोपाइलिन क्रायोभियलहरूमा विभाजित गरिन्छ जस्तैसुझाउ एस बायोमेडिकल कम्पनी क्रायोजेनिक भण्डारण शीशीहरू.
क्रायोभियलहरू ओभरफिल नगर्नु महत्त्वपूर्ण छ किनकि यसले फुट्ने र सामग्रीहरू निस्कने सम्भावित जोखिम बढाउनेछ (१)।
नियन्त्रित फ्रिज दर
सामान्यतया, कोषहरूको सफल क्रायोप्रिजर्भेसनको लागि ढिलो नियन्त्रित फ्रिज दर प्रयोग गरिन्छ।
नमूनाहरूलाई क्रायोजेनिक भाइलहरूमा हालिसकेपछि, तिनीहरूलाई भिजेको बरफमा वा ४°C रेफ्रिजरेटरमा राखिन्छ र ५ मिनेट भित्र फ्रिज गर्ने प्रक्रिया सुरु हुन्छ। सामान्य मार्गनिर्देशनको रूपमा, कोषहरूलाई -१ देखि -३ प्रति मिनेटको दरमा चिसो गरिन्छ (२)। यो प्रोग्रामेबल कूलर प्रयोग गरेर वा -७०°C देखि -९०°C नियन्त्रित दर फ्रीजरमा राखिएको इन्सुलेटेड बक्समा भाइलहरू राखेर प्राप्त गरिन्छ।
तरल नाइट्रोजनमा स्थानान्तरण गर्नुहोस्
जमेको क्रायोजेनिक भाइलहरू त्यसपछि अनिश्चित कालको लागि तरल नाइट्रोजन ट्याङ्कीमा स्थानान्तरण गरिन्छ यदि -१३५ डिग्री सेल्सियस भन्दा कम तापक्रम कायम राखिएको छ भने।
यी अति-न्यून तापक्रमहरू तरल वा वाष्प चरण नाइट्रोजनमा डुबाएर प्राप्त गर्न सकिन्छ।
तरल वा बाफ चरण?
तरल चरणमा नाइट्रोजन भण्डारण गर्दा पूर्ण स्थिरताका साथ चिसो तापक्रम कायम राख्न सकिन्छ भन्ने कुरा थाहा छ, तर निम्न कारणहरूले गर्दा प्रायः सिफारिस गरिँदैन:
- तरल नाइट्रोजनको ठूलो मात्रा (गहिराई) को आवश्यकता जुन सम्भावित खतरा हो। यसको कारणले जल्ने वा निसास्सिने वास्तविक जोखिम हो।
- एस्परगिलस, हेपाटाइटिस बी जस्ता संक्रामक एजेन्टहरू र तरल नाइट्रोजन माध्यम मार्फत फैलिएको भाइरलद्वारा क्रस-प्रदूषणको दस्तावेजीकरण गरिएका केसहरू (२,३)
- डुबाउने क्रममा तरल नाइट्रोजन शीशीहरूमा चुहिने सम्भावना हुन्छ। भण्डारणबाट हटाउँदा र कोठाको तापक्रममा तताउँदा, नाइट्रोजन द्रुत गतिमा फैलिन्छ। फलस्वरूप, तरल नाइट्रोजन भण्डारणबाट हटाउँदा शीशी चकनाचुर हुन सक्छ, जसले गर्दा उड्ने फोहोर र सामग्रीको सम्पर्क दुवैबाट खतरा सिर्जना हुन्छ (१, ४)।
यी कारणहरूले गर्दा, अति-कम तापक्रम भण्डारण प्रायः वाष्प चरण नाइट्रोजनमा हुन्छ। जब नमूनाहरू तरल चरणमा भण्डारण गर्नुपर्छ, विशेष क्रायोफ्लेक्स ट्युबिङ प्रयोग गर्नुपर्छ।
बाष्प चरणको नकारात्मक पक्ष भनेको ठाडो तापक्रम ढाँचा हुन सक्छ जसले गर्दा -१३५ ℃ र -१९० ℃ बीच तापक्रममा उतारचढाव आउन सक्छ। यसले तरल नाइट्रोजन स्तर र तापक्रम भिन्नताहरूको सावधानीपूर्वक र लगनशील निगरानी आवश्यक छ (५)।
धेरै निर्माताहरूले क्रायोभियलहरू -१३५ डिग्री सेल्सियससम्म भण्डारण गर्न वा वाष्प चरणमा मात्र प्रयोगको लागि उपयुक्त हुने सिफारिस गर्छन्।
तपाईंको क्रायोप्रिजर्भ कोषहरू पगाल्ने
जमेको संस्कृतिको लागि पग्लने प्रक्रिया तनावपूर्ण हुन्छ, र कोषहरूको इष्टतम व्यवहार्यता, पुन: प्राप्ति र कार्यक्षमता सुनिश्चित गर्न उचित ह्यान्डलिङ र प्रविधि आवश्यक पर्दछ। पग्लने सही प्रोटोकलहरू विशिष्ट कोष प्रकारहरूमा निर्भर हुनेछन्। यद्यपि, द्रुत पग्लनेलाई निम्नको लागि मानक मानिन्छ:
- सेलुलर रिकभरीमा पर्ने कुनै पनि प्रभाव कम गर्नुहोस्
- फ्रिजिङ मिडियामा उपस्थित घुलनशील पदार्थहरूमा एक्सपोजर समय कम गर्न मद्दत गर्नुहोस्
- बरफ पुन: क्रिस्टलाइजेसन गरेर हुने कुनै पनि क्षतिलाई कम गर्नुहोस्
नमूनाहरू पगाल्न सामान्यतया पानी स्नान, मनका स्नान, वा विशेष स्वचालित उपकरणहरू प्रयोग गरिन्छ।
प्रायः १ सेल लाइनलाई १-२ मिनेटको लागि एक पटकमा पगालिन्छ, ३७ डिग्री सेल्सियस पानीको नुहाउने ठाउँमा बिस्तारै घुमाएर शीशीमा थोरै बरफ बाँकी नराख्दासम्म तिनीहरूलाई पूर्व-तातो वृद्धि माध्यममा धोइन्छ।
स्तनधारी भ्रूण जस्ता केही कोषहरूको लागि, तिनीहरूको बाँच्नको लागि ढिलो तापक्रम आवश्यक छ।
कोषहरू अब कोष संस्कृति, कोष अलगाव, वा हेमेटोपोएटिक स्टेम सेलहरूको मामलामा तयार छन् - माइलोएब्लेटिभ थेरापी अघि दाता स्टेम सेलहरूको अखण्डताको ग्यारेन्टी गर्न व्यवहार्यता अध्ययन।
कल्चरमा प्लेटिङको लागि कोशिका सांद्रता निर्धारण गर्न कोशिका गणना गर्न प्रयोग गरिने पूर्व धुने नमूनाको सानो अंश लिनु सामान्य अभ्यास हो। त्यसपछि तपाईं कोशिका अलगाव प्रक्रियाहरूको नतिजाहरूको मूल्याङ्कन गर्न सक्नुहुन्छ र कोशिका व्यवहार्यता निर्धारण गर्न सक्नुहुन्छ।
क्रायोभियलहरूको भण्डारणको लागि उत्तम अभ्यासहरू
क्रायोभियलहरूमा भण्डारण गरिएका नमूनाहरूको सफल क्रायोप्रिजर्भेसन उचित भण्डारण र रेकर्ड राख्ने सहित प्रोटोकलका धेरै तत्वहरूमा निर्भर गर्दछ।
- भण्डारण स्थानहरू बीच कक्षहरू विभाजन गर्नुहोस्- यदि मात्राले अनुमति दिन्छ भने, उपकरणको विफलताका कारण नमुना हराउने जोखिम कम गर्न शीशीहरू बीच कोषहरू विभाजन गर्नुहोस् र तिनीहरूलाई छुट्टाछुट्टै स्थानहरूमा भण्डार गर्नुहोस्।
- क्रस-प्रदूषण रोक्नुहोस्- पछि प्रयोग गर्नु अघि एकल-प्रयोग बाँझ क्रायोजेनिक शीशी वा अटोक्लेभको लागि रोज्नुहोस्।
- तपाईंको कोषहरूको लागि उपयुक्त आकारको शीशीहरू प्रयोग गर्नुहोस्।- शीशीहरू १ देखि ५ मिलिलिटरसम्मको मात्रामा आउँछन्। फुट्ने जोखिम कम गर्न शीशीहरू धेरै भर्नबाट बच्नुहोस्।
- आन्तरिक वा बाह्य रूपमा थ्रेडेड गरिएका क्रायोजेनिक शीशीहरू चयन गर्नुहोस्- सुरक्षा उपायहरूको लागि केही विश्वविद्यालयहरूले आन्तरिक थ्रेडेड शीशीहरू सिफारिस गर्छन् - तिनीहरूले भर्ने क्रममा वा तरल नाइट्रोजनमा भण्डारण गर्दा पनि दूषित हुनबाट रोक्न सक्छन्।
- चुहावट रोक्नुहोस्- चुहावट र प्रदूषण रोक्नको लागि स्क्रू-क्याप वा ओ-रिङहरूमा मोल्ड गरिएको द्वि-इन्जेक्टेड सिलहरू प्रयोग गर्नुहोस्।
- २D बारकोड र लेबल शीशीहरू प्रयोग गर्नुहोस्- ट्रेसेबिलिटी सुनिश्चित गर्न, ठूला लेखन क्षेत्रहरू भएका शीशीहरूले प्रत्येक शीशीलाई पर्याप्त लेबल गर्न सक्षम बनाउँछन्। 2D बारकोडहरूले भण्डारण व्यवस्थापन र रेकर्ड राख्न मद्दत गर्न सक्छन्। रङ कोडेड क्यापहरू सजिलो पहिचानको लागि उपयोगी छन्।
- पर्याप्त भण्डारण मर्मतसम्भार- कोषहरू हराउन नदिनको लागि, भण्डारण भाँडाहरूले तापक्रम र तरल नाइट्रोजन स्तरको निरन्तर निगरानी गर्नुपर्छ। प्रयोगकर्ताहरूलाई त्रुटिहरूको बारेमा सचेत गराउन अलार्म जडान गर्नुपर्छ।
सुरक्षा सावधानीहरू
आधुनिक अनुसन्धानमा तरल नाइट्रोजन सामान्य अभ्यास भएको छ तर गलत तरिकाले प्रयोग गर्दा गम्भीर चोटपटक लाग्ने जोखिम हुन्छ।
तरल नाइट्रोजन प्रयोग गर्दा शीतदंश, जलन र अन्य प्रतिकूल घटनाहरूको जोखिम कम गर्न उचित व्यक्तिगत सुरक्षात्मक उपकरण (PPE) लगाउनु पर्छ।
- क्रायोजेनिक पन्जा
- प्रयोगशाला कोट
- घाँटी पनि ढाक्ने प्रभाव प्रतिरोधी पूर्ण अनुहार ढाल
- बन्द खुट्टाको जुत्ता
- छिचोल्न नमिल्ने प्लास्टिकको एप्रोन
तरल नाइट्रोजन रेफ्रिजरेटरहरू राम्रोसँग हावा चल्ने ठाउँमा राख्नुपर्छ ताकि श्वासप्रश्वास बन्द हुने जोखिम कम होस् - बाहिर निस्केको नाइट्रोजनले वायुमण्डलीय अक्सिजनलाई वाष्पीकरण गर्छ र विस्थापित गर्छ। ठूला मात्रामा भण्डारण गरिएका स्टोरहरूमा कम अक्सिजन अलार्म प्रणालीहरू हुनुपर्छ।
तरल नाइट्रोजन प्रयोग गर्दा जोडीमा काम गर्नु आदर्श हो र सामान्य कार्य घण्टा बाहिर यसको प्रयोग निषेध गरिनु पर्छ।
तपाईंको कार्यप्रवाहलाई समर्थन गर्न क्रायोभियलहरू
सुझाउ एस बायोमेडिकल कम्पनीले विभिन्न प्रकारका कोषहरूको लागि तपाईंको क्रायोप्रिजर्भेसन आवश्यकताहरू पूरा गर्ने उत्पादनहरूको विस्तृत चयन प्रदान गर्दछ। पोर्टफोलियोमा विभिन्न प्रकारका ट्यूबहरू साथै बाँझ क्रायोभियलहरूको दायरा समावेश छ।
हाम्रा क्रायोभियलहरू हुन्:
-
ल्याब स्क्रू क्याप ०.५ मिलिलिटर १.५ मिलिलिटर २.० मिलिलिटर क्रायोभियल क्रायोजेनिक शीशीहरू कोनिकल बटम क्रायोट्यूब ग्यास्केट सहित
● ०.५ मिलिलिटर, १.५ मिलिलिटर, २.० मिलिलिटर स्पेसिफिकेसन, स्कर्ट सहित वा स्कर्ट बिना
● कोनिकल वा सेल्फ स्ट्यान्डिङ डिजाइन, बाँझ वा गैर-बाँझ दुवै उपलब्ध छन्।
● स्क्रू क्याप ट्यूबहरू मेडिकल ग्रेड पोलिप्रोपाइलिनबाट बनेका हुन्छन्
● पीपी क्रायोट्यूब शीशीहरू बारम्बार जम्मा गर्न र पगाल्न सकिन्छ।
● बाहिरी क्याप डिजाइनले नमूना उपचारको क्रममा प्रदूषणको सम्भावना कम गर्न सक्छ।
● स्क्रू क्याप क्रायोजेनिक ट्यूबहरू प्रयोगको लागि विश्वव्यापी स्क्रू थ्रेडहरू
● ट्यूबहरू धेरैजसो सामान्य रोटरहरूमा फिट हुन्छन्
● क्रायोजेनिक ट्यूब ओ-रिंग ट्यूबहरू मानक १-इन्च र २-इन्च, ४८वेल, ८१वेल, ९६वेल र १००वेल फ्रिजर बक्सहरूमा फिट हुन्छन्।
● १२१°C सम्म अटोक्लेभ गर्न मिल्ने र -८६°C सम्म फ्रिज गर्न मिल्नेभाग नं.
सामग्री
भोल्युम
क्यापरङ
पीसीएस/झोला
झोला/केस
ACT05-BL-N को कीवर्डहरू
PP
०.५ मिलिलिटर
कालो, पहेंलो, नीलो, रातो, बैजनी, सेतो
५००
10
ACT15-BL-N को कीवर्डहरू
PP
१.५ मिलिलिटर
कालो, पहेंलो, नीलो, रातो, बैजनी, सेतो
५००
10
ACT15-BL-NW को लागि सोधपुछ पेश गर्नुहोस्, हामी तपाईंलाई 24 घण्टामा सम्पर्क गर्नेछौं।
PP
१.५ मिलिलिटर
कालो, पहेंलो, नीलो, रातो, बैजनी, सेतो
५००
10
ACT20-BL-N को कीवर्डहरू
PP
२.० मिलिलिटर
कालो, पहेंलो, नीलो, रातो, बैजनी, सेतो
५००
10
पोस्ट समय: डिसेम्बर-२७-२०२२