KriyovialYo souvan itilize pou depo kriyojenik liy selilè ak lòt materyèl byolojik kritik, nan dewar ki ranpli ak nitwojèn likid.

Gen plizyè etap ki enplike nan prezèvasyon selil yo avèk siksè nan nitwojèn likid. Pandan ke prensip debaz la se yon konjelasyon dousman, teknik egzak ki itilize a depann de kalite selil la ak kriyopwotektè ki itilize a. Gen plizyè konsiderasyon sekirite ak pi bon pratik pou pran an kont lè w ap estoke selil nan tanperati ki ba konsa.

Pòs sa a gen pou objektif bay yon apèsi sou kijan yo estoke kriyofiyal nan nitwojèn likid.

Ki sa ki kriyovial yo?

Kriyovial yo se ti flakon ki gen bouchon epi ki fèt pou konsève echantiyon likid nan tanperati ki ba anpil. Yo asire ke selil ki konsève nan kriyopwotektè a pa antre an kontak dirèk ak nitwojèn likid la, sa ki minimize risk pou selil yo ka fraktire pandan y ap toujou benefisye de efè refwadisman ekstrèm nitwojèn likid la.

Ti boutèy yo anjeneral disponib nan yon seri volim ak modèl - yo ka gen fil anndan oswa deyò ak fon plat oswa won. Fòma esteril ak ki pa esteril disponib tou.

Ki moun ki itilizeSirovyalpou konsève selil nan azòt likid

Yon seri laboratwa NHS ak prive, ansanm ak enstitisyon rechèch ki espesyalize nan bank san kòd lonbrit, byoloji selil epitelyal, imunoloji ak byoloji selil souch itilize kriyovial pou kriyoprezève selil yo.

Selil ki konsève nan fason sa a gen ladan yo selil B ak T, selil CHO, selil souch ak pwogéniteur ematopoyetik, ibridòm, selil entestinal, makrofaj, selil souch ak pwogéniteur mezenkimal, monosit, myelòm, selil NK ak selil souch pliripotan.

Apèsi sou kijan pou konsève kriyofiyal nan azòt likid

Kriyoprezèvasyon se yon pwosesis ki prezève selil ak lòt konstriksyon byolojik lè yo refwadi yo nan tanperati ki ba anpil. Selil yo ka estoke nan nitwojèn likid pandan plizyè ane san yo pa pèdi viabilité selilè. Sa a se yon deskripsyon sou pwosedi yo itilize yo.

Preparasyon Selilè

Metòd egzak pou prepare echantiyon yo ap varye selon kalite selil la, men an jeneral, yo kolekte selil yo epi yo santrifije yo pou devlope yon grenn ki rich an selil. Apre sa, yo resispann grenn sa a nan sipènatant lan melanje ak yon kriyopwotektè oswa yon mwayen kriyoprezèvasyon.

Mwayen kriyoprezèvasyon

Yo itilize mwayen sa a pou prezève selil yo nan anviwònman ki gen tanperati ki ba kote yo pral sibi yo, lè li anpeche fòmasyon kristal entra ak ekstraselilè e pakonsekan lanmò selilè. Wòl yo se bay yon anviwònman ki an sekirite e ki pwoteje pou selil ak tisi yo pandan pwosesis konjelasyon, depo ak dekonjelasyon.

Yon mwayen tankou plasma fre nan frizè (FFP), solisyon plasmalit eparinize oswa solisyon san serom, san konpozan animal melanje ak kriyopwotektè tankou dimetil silfoksid (DMSO) oswa gliseròl.

Yo mete grenn echantiyon ki te vin likid ankò a nan kriyovial polipropilèn tankouKonpayi Suzhou Ace Biomedical, ti boutèy depo kriyojenik.

Li enpòtan pou pa ranpli kriyovial yo twòp paske sa ap ogmante risk pou yo fann epi posiblite pou yo lage sa ki ladan l (1).

Kontwole vitès konjelasyon

An jeneral, yo itilize yon vitès konjelasyon kontwole dousman pou kriyoprezèvasyon selil yo avèk siksè.

Apre echantiyon yo fin mete nan ti boutèy kriyojenik, yo mete yo sou glas mouye oubyen nan yon frijidè 4℃ epi yo kòmanse pwosedi konjelasyon an nan 5 minit. Kòm yon gid jeneral, selil yo refwadi nan yon vitès -1 a -3 pa minit (2). Sa a reyalize lè l sèvi avèk yon pi fre pwogramab oubyen lè yo mete ti boutèy yo nan yon bwat izole ki mete nan yon frizè vitès kontwole -70°C a –90°C.

Transfè nan Azòt Likid

Apre sa, yo transfere ti boutèy kriyojenik yo ki nan frizè nan yon tank nitwojèn likid pou peryòd endefini, depi yo kenbe yon tanperati mwens pase -135 ℃.

Ou ka jwenn tanperati ultra-ba sa yo lè w plonje yo nan azòt nan faz likid oswa vapè.

Faz likid oswa faz vapè?

Depo nan azòt faz likid li konnen pou kenbe tanperati frèt la ak yon konsistans absoli, men souvan li pa rekòmande pou rezon sa yo:

• Bezwen pou gwo volim (pwofondè) nitwojèn likid ki se yon danje potansyèl. Boule oswa asfiksi akòz sa a se yon risk reyèl.
• Ka dokimante sou kontaminasyon kwaze pa ajan enfeksyon tankou aspergillus, epatit B ak pwopagasyon viral atravè medyòm nitwojèn likid la (2,3)
• Posibilite pou azòt likid koule nan ti boutèy yo pandan y ap plonje. Lè yo retire yo nan depo a epi yo chofe yo nan tanperati chanm, azòt la gonfle rapidman. Kidonk, ti ​​boutèy la ka kraze lè yo retire li nan depo azòt likid la, sa ki kreye yon danje tou de debri k ap vole ak ekspoze a sa ki ladan l (1, 4).

Pou rezon sa yo, depo nan tanperati ultra ba pi souvan fèt nan azòt faz vapè. Lè echantiyon yo dwe estoke nan faz likid, yo ta dwe itilize tib kriyofleks espesyalize.

Dezavantaj faz vapè a se yon gradyan tanperati vètikal ka rive, sa ki ka lakòz varyasyon tanperati ant -135℃ ak -190℃. Sa mande pou siveyans atansyon ak dilijan nivo azòt likid yo ak varyasyon tanperati yo (5).

Anpil manifaktirè rekòmande pou kriyovial yo apwopriye pou depo jiska -135 ℃ oswa pou itilize nan faz vapè sèlman.

Dekonjle Selil Kriyoprezève ou yo

Pwosedi dekonjelasyon an se yon pwosesis ki bay strès pou yon kilti ki konjele, epi li nesesè pou itilize bon jan teknik pou asire yon viabilite, yon rekiperasyon, ak yon fonksyonalite optimal selil yo. Pwotokòl egzak dekonjelasyon yo ap depann de kalite selil espesifik yo. Sepandan, dekonjelasyon rapid la konsidere kòm yon bagay estanda pou:

• Diminye nenpòt enpak sou rekiperasyon selilè
• Ede diminye tan ekspozisyon an nan solisyon ki prezan nan medya konjelasyon an
• Minimize nenpòt domaj pa rekristalizasyon glas

Beny dlo, beny pèl, oswa enstriman otomatik espesyalize yo souvan itilize pou deglase echantiyon yo.

Pi souvan, yo dekonjle 1 liy selilè alafwa pandan 1-2 minit, lè yo brase l dousman nan yon beny dlo 37 ℃ jiskaske gen yon ti glas ki rete nan ti boutèy la anvan yo lave yo nan yon mwayen kwasans ki deja chofe.

Pou kèk selil tankou anbriyon mamifè yo, yon rechofman dousman esansyèl pou yo siviv.

Kounye a, selil yo pare pou kilti selilè, izolasyon selilè, oubyen nan ka selil souch ematopoyetik – etid viabilité pou garanti entegrite selil souch donatè a anvan terapi myeloablatif.

Li nòmal pou pran ti alikòt nan echantiyon prelave a ki itilize pou fè yon kontaj selilè pou detèmine konsantrasyon selilè pou kilti. Apre sa, ou ka evalye rezilta pwosedi izolasyon selilè yo epi detèmine viabilité selilè a.

Pi bon pratik pou depo kriyovial yo

Siksè kriyoprezèvasyon echantiyon ki estoke nan kriyovial yo depann de anpil eleman nan pwotokòl la, tankou bon depo ak kenbe dosye.

• Separe selil yo ant kote depo yo– Si volim yo pèmèt, separe selil yo nan ti boutèy yo epi sere yo nan kote separe pou diminye risk pou pèdi echantiyon akòz pann ekipman yo.
• Anpeche kontaminasyon kwaze– Chwazi ti boutèy kriyojenik esteril pou yon sèl itilizasyon oswa otoklav anvan ou itilize yo apre sa.
• Sèvi ak ti boutèy ki gen gwosè apwopriye pou selil ou yo– ti boutèy yo vini nan yon seri volim ant 1 ak 5 ml. Evite ranpli ti boutèy yo twòp pou diminye risk pou yo fann.
• Chwazi ti boutèy kriyojenik ki gen fil entèn oswa ekstèn– Gen kèk inivèsite ki rekòmande ti boutèy ki gen filetaj anndan pou mezi sekirite – yo kapab anpeche kontaminasyon tou pandan ranpli a oswa lè yo estoke nan nitwojèn likid.
• Anpeche flit- Sèvi ak sele bi-enjekte ki moule nan bouchon vis la oswa bag O- yo pou anpeche flit ak kontaminasyon.
• Sèvi ak kòd bar 2D epi mete etikèt sou ti boutèy yo– Pou asire trasabilite, ti boutèy ki gen gwo zòn ekriti pèmèt chak ti boutèy byen make. Kòd bar 2D yo ka ede ak jesyon depo ak kenbe dosye. Bouchon ki gen kòd koulè itil pou idantifikasyon pi fasil.
• Antretyen depo adekwa- Pou asire selil yo pa pèdi, veso depo yo ta dwe toujou ap kontwole tanperati a ak nivo azòt likid la. Yo ta dwe enstale alam pou avèti itilizatè yo sou erè.

Prekosyon Sekirite

Azòt likid vin tounen yon pratik komen nan rechèch modèn men li pote risk pou blesi grav si yo pa itilize li byen.

Fòk ou mete ekipman pwoteksyon pèsonèl (PPE) ki apwopriye pou minimize risk fredi, boule ak lòt ensidan negatif lè w ap manyen nitwojèn likid. Mete

• Gan kriyojenik
• Rad laboratwa
• Pwoteksyon figi konplè ki reziste enpak epi ki kouvri kou a tou
• Soulye fèmen
• Tabliye plastik ki reziste dlo

Yo ta dwe mete frijidè ki gen nitwojèn likid nan zòn ki byen ayere pou minimize risk asfiksi - nitwojèn ki chape a vaporize epi li deplase oksijèn atmosferik la. Magazen ki gen gwo volim yo ta dwe gen sistèm alam pou oksijèn ki ba.

Li ideyal pou travay an pè lè w ap manyen azòt likid epi yo ta dwe entèdi itilizasyon li deyò lè travay nòmal yo.

Kriyovial pou Sipòte Flux Travay ou

Konpayi Suzhou Ace Biomedical la ofri yon pakèt pwodwi ki satisfè bezwen kriyoprezèvasyon ou yo pou diferan kalite selil. Pòtfolyo a gen ladan yon seri tib ansanm ak yon seri kriyovial esteril.

Kriyovial nou yo se:

• Bouchon vis laboratwa 0.5mL 1.5mL 2.0mL kriyojenik flakon kriyojenik anba konik ak jwenti

  ● 0.5ml, 1.5ml, spesifikasyon 2.0ml, ak jip oswa san jip
  ● Konsepsyon konik oswa endepandan, esteril oswa ki pa esteril disponib tou de
  ● Tib bouchon vis yo fèt ak polipropilèn klas medikal
  ● Ou ka konjele epi dekonjele ti boutèy Cryotube PP yo plizyè fwa.
  ● Desen bouchon ekstèn lan ka diminye pwobabilite kontaminasyon pandan tretman echantiyon an.
  ● Tib kriyojenik ak bouchon vis Fil vis inivèsèl pou itilizasyon
  ● Tib yo anfòm ak pifò rotor komen yo
  ● Tib kriyojenik o-ring yo anfòm bwat frizè estanda 1 pous ak 2 pous, 48 ​​pi, 81 pi, 96 pi ak 100 pi
  ● Otoklavab jiska 121°C epi konjele jiska -86°C

  NIMEWO PYÈS	MATERYÈL	VOLIM	KAPSILKOULÈ	PCS/SAK	SAK/BÒS
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Nwa, Jòn, Ble, Wouj, Vyolèt, Blan	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Nwa, Jòn, Ble, Wouj, Vyolèt, Blan	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Nwa, Jòn, Ble, Wouj, Vyolèt, Blan	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Nwa, Jòn, Ble, Wouj, Vyolèt, Blan	500	10