கிரையோவியல்கள்திரவ நைட்ரஜன் நிரப்பப்பட்ட டீவார்களில், செல் கோடுகள் மற்றும் பிற முக்கியமான உயிரியல் பொருட்களின் கிரையோஜெனிக் சேமிப்பிற்கு பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.

திரவ நைட்ரஜனில் செல்களை வெற்றிகரமாகப் பாதுகாப்பதில் பல நிலைகள் உள்ளன. அடிப்படைக் கொள்கை மெதுவாக உறைய வைப்பது என்றாலும், பயன்படுத்தப்படும் சரியான நுட்பம் செல் வகை மற்றும் பயன்படுத்தப்படும் கிரையோப்ரொடெக்டண்டைப் பொறுத்தது. இவ்வளவு குறைந்த வெப்பநிலையில் செல்களைச் சேமிக்கும்போது கணக்கில் எடுத்துக்கொள்ள வேண்டிய பல பாதுகாப்புக் கருத்தாய்வுகளும் சிறந்த நடைமுறைகளும் உள்ளன.

இந்த இடுகை, திரவ நைட்ரஜனில் கிரையோவியல்கள் எவ்வாறு சேமிக்கப்படுகின்றன என்பது பற்றிய ஒரு கண்ணோட்டத்தை வழங்குவதை நோக்கமாகக் கொண்டுள்ளது.

கிரையோவியல்கள் என்றால் என்ன?

கிரையோவியல்கள் என்பது மிகக் குறைந்த வெப்பநிலையில் திரவ மாதிரிகளை சேமிப்பதற்காக வடிவமைக்கப்பட்ட சிறிய, மூடிய குப்பிகள் ஆகும். கிரையோபுரோடெக்டண்டில் பாதுகாக்கப்பட்ட செல்கள் திரவ நைட்ரஜனுடன் நேரடி தொடர்புக்கு வராமல் பார்த்துக் கொள்கின்றன, திரவ நைட்ரஜனின் தீவிர குளிரூட்டும் விளைவிலிருந்து பயனடைகையில் செல்லுலார் எலும்பு முறிவுகளின் அபாயத்தைக் குறைக்கின்றன.

குப்பிகள் பொதுவாக பல்வேறு அளவுகள் மற்றும் வடிவமைப்புகளில் கிடைக்கின்றன - அவை தட்டையான அல்லது வட்டமான அடிப்பகுதிகளுடன் உட்புறமாகவோ அல்லது வெளிப்புறமாகவோ திரிக்கப்பட்டிருக்கலாம். மலட்டு மற்றும் மலட்டுத்தன்மையற்ற வடிவங்களும் கிடைக்கின்றன.

யார் பயன்படுத்துகிறார்கள்சைரோவியல்கள்திரவ நைட்ரஜனில் செல்களை சேமிக்க

பல்வேறு NHS மற்றும் தனியார் ஆய்வகங்கள், அதே போல் தண்டு இரத்த வங்கி, எபிதீலியல் செல் உயிரியல், நோயெதிர்ப்பு மற்றும் ஸ்டெம் செல் உயிரியலில் நிபுணத்துவம் பெற்ற ஆராய்ச்சி நிறுவனங்கள், செல்களை கிரையோபிரெசர்வ் செய்ய கிரையோவியல்களைப் பயன்படுத்துகின்றன.

இந்த வழியில் பாதுகாக்கப்படும் செல்களில் B மற்றும் T செல்கள், CHO செல்கள், ஹீமாடோபாய்டிக் ஸ்டெம் மற்றும் முன்னோடி செல்கள், ஹைப்ரிடோமாக்கள், குடல் செல்கள், மேக்ரோபேஜ்கள், மெசன்கிமல் ஸ்டெம் மற்றும் முன்னோடி செல்கள், மோனோசைட்டுகள், மைலோமா, NK செல்கள் மற்றும் ப்ளூரிபோடென்ட் ஸ்டெம் செல்கள் ஆகியவை அடங்கும்.

திரவ நைட்ரஜனில் கிரையோவியல்களை எவ்வாறு சேமிப்பது என்பது பற்றிய கண்ணோட்டம்

கிரையோப்ரிசர்வேஷன் என்பது செல்கள் மற்றும் பிற உயிரியல் கட்டமைப்புகளை மிகக் குறைந்த வெப்பநிலைக்கு குளிர்விப்பதன் மூலம் பாதுகாக்கும் ஒரு செயல்முறையாகும். செல் நம்பகத்தன்மையை இழக்காமல் செல்களை திரவ நைட்ரஜனில் பல ஆண்டுகளாக சேமிக்க முடியும். இது பயன்படுத்தப்படும் நடைமுறைகளின் சுருக்கமாகும்.

செல் தயாரிப்பு

மாதிரிகளைத் தயாரிப்பதற்கான சரியான முறை செல் வகையைப் பொறுத்து மாறுபடும், ஆனால் பொதுவாக, செல்கள் சேகரிக்கப்பட்டு மையவிலக்கு செய்யப்பட்டு செல் நிறைந்த துகள்களை உருவாக்கப்படுகின்றன. பின்னர் இந்த துகள் கிரையோபுரோடெக்டன்ட் அல்லது கிரையோபிரெசர்வேஷன் ஊடகத்துடன் கலந்த சூப்பர்நேட்டண்டில் மீண்டும் இணைக்கப்படுகிறது.

கிரையோப்ரிசர்வேஷன் மீடியம்

இந்த ஊடகம், குறைந்த வெப்பநிலை சூழல்களில் செல்களைப் பாதுகாக்கப் பயன்படுகிறது, இதன் மூலம் அவை உள் மற்றும் புற-செல்லுலார் படிகங்கள் உருவாவதைத் தடுக்கின்றன, இதனால் செல் இறப்பு ஏற்படுகிறது. உறைதல், சேமிப்பு மற்றும் உருகுதல் செயல்முறைகளின் போது செல்கள் மற்றும் திசுக்களுக்கு பாதுகாப்பான, பாதுகாப்பு சூழலை வழங்குவதே அவற்றின் பங்கு.

புதிதாக உறைந்த பிளாஸ்மா (FFP), ஹெப்பரினைஸ் செய்யப்பட்ட பிளாஸ்மாலைட் கரைசல் அல்லது சீரம் இல்லாத, விலங்கு கூறுகள் இல்லாத கரைசல்கள் போன்ற ஒரு ஊடகம் டைமெத்தில் சல்பாக்சைடு (DMSO) அல்லது கிளிசரால் போன்ற கிரையோபுரோடெக்டர்களுடன் கலக்கப்படுகிறது.

மீண்டும் திரவமாக்கப்பட்ட மாதிரித் துகள் பாலிப்ரொப்பிலீன் கிரையோவியல்களாக மாற்றப்படுகிறது, எடுத்துக்காட்டாகசுஜோ ஏஸ் பயோமெடிக்கல் நிறுவனம் கிரையோஜெனிக் சேமிப்பு குப்பிகள்.

கிரையோவியல்களை அதிகமாக நிரப்பாமல் இருப்பது முக்கியம், ஏனெனில் இது விரிசல் ஏற்படும் அபாயத்தையும் உள்ளடக்கங்கள் வெளியேறும் அபாயத்தையும் அதிகரிக்கும் (1).

கட்டுப்படுத்தப்பட்ட உறைநிலை விகிதம்

பொதுவாக, செல்களின் வெற்றிகரமான கிரையோபிரசர்வேஷனுக்கு மெதுவான கட்டுப்படுத்தப்பட்ட உறைதல் விகிதம் பயன்படுத்தப்படுகிறது.

மாதிரிகள் கிரையோஜெனிக் குப்பிகளில் பிரிக்கப்பட்ட பிறகு, அவை ஈரமான பனிக்கட்டியில் அல்லது 4℃ குளிர்சாதன பெட்டியில் வைக்கப்படுகின்றன, மேலும் உறைபனி செயல்முறை 5 நிமிடங்களுக்குள் தொடங்கப்படும். ஒரு பொதுவான வழிகாட்டியாக, செல்கள் நிமிடத்திற்கு -1 முதல் -3 என்ற விகிதத்தில் குளிர்விக்கப்படுகின்றன (2). இது ஒரு நிரல்படுத்தக்கூடிய குளிரூட்டியைப் பயன்படுத்தி அல்லது -70°C முதல் -90°C வரை கட்டுப்படுத்தப்பட்ட விகித உறைவிப்பான் பெட்டியில் வைக்கப்படும் காப்பிடப்பட்ட பெட்டியில் குப்பிகளை வைப்பதன் மூலம் அடையப்படுகிறது.

திரவ நைட்ரஜனுக்கு மாற்றவும்

உறைந்த கிரையோஜெனிக் குப்பிகள் பின்னர் -135℃ க்கும் குறைவான வெப்பநிலை பராமரிக்கப்படும் வரை, காலவரையின்றி ஒரு திரவ நைட்ரஜன் தொட்டியில் மாற்றப்படும்.

இந்த மிகக் குறைந்த வெப்பநிலையை திரவ அல்லது நீராவி நிலை நைட்ரஜனில் மூழ்கடிப்பதன் மூலம் பெறலாம்.

திரவ நிலையா அல்லது ஆவி நிலையா?

திரவ நிலை நைட்ரஜனில் சேமிப்பது குளிர்ந்த வெப்பநிலையை முழுமையான நிலைத்தன்மையுடன் பராமரிக்கும் என்று அறியப்படுகிறது, ஆனால் பின்வரும் காரணங்களுக்காக இது பெரும்பாலும் பரிந்துரைக்கப்படுவதில்லை:

• திரவ நைட்ரஜனை அதிக அளவில் (ஆழம்) ஊற்ற வேண்டிய அவசியம், இது ஒரு சாத்தியமான ஆபத்தாகும். இதனால் ஏற்படும் தீக்காயங்கள் அல்லது மூச்சுத்திணறல் ஒரு உண்மையான ஆபத்து.
• ஆஸ்பெர்ஜிலஸ், ஹெபடைடிஸ் பி போன்ற தொற்று முகவர்களால் குறுக்கு-மாசுபாட்டின் ஆவணப்படுத்தப்பட்ட வழக்குகள் மற்றும் திரவ நைட்ரஜன் ஊடகம் வழியாக வைரஸ் பரவுதல் (2,3)
• மூழ்கும்போது குப்பிகளில் திரவ நைட்ரஜன் கசிவு ஏற்படுவதற்கான வாய்ப்பு. சேமிப்பிலிருந்து அகற்றப்பட்டு அறை வெப்பநிலைக்கு சூடேற்றப்படும்போது, ​​நைட்ரஜன் வேகமாக விரிவடைகிறது. இதன் விளைவாக, திரவ நைட்ரஜன் சேமிப்பிலிருந்து அகற்றப்படும்போது குப்பி உடைந்து போகக்கூடும், இதனால் பறக்கும் குப்பைகள் மற்றும் உள்ளடக்கங்களுக்கு வெளிப்பாடு (1, 4) ஆகிய இரண்டிலிருந்தும் ஆபத்து ஏற்படும்.

இந்தக் காரணங்களுக்காக, மிகக் குறைந்த வெப்பநிலை சேமிப்பு பெரும்பாலும் நீராவி நிலை நைட்ரஜனில் இருக்கும். மாதிரிகள் திரவ நிலையில் சேமிக்கப்படும்போது, ​​சிறப்பு கிரையோஃப்ளெக்ஸ் குழாய்களைப் பயன்படுத்த வேண்டும்.

நீராவி கட்டத்தின் குறைபாடு என்னவென்றால், செங்குத்து வெப்பநிலை சாய்வு ஏற்படலாம், இதன் விளைவாக -135℃ முதல் -190℃ வரை வெப்பநிலை ஏற்ற இறக்கங்கள் ஏற்படலாம். இதற்கு திரவ நைட்ரஜன் அளவுகள் மற்றும் வெப்பநிலை மாறுபாடுகளை கவனமாகவும் விடாமுயற்சியுடனும் கண்காணிப்பது அவசியம் (5).

பல உற்பத்தியாளர்கள் கிரையோவியல்கள் -135℃ வரை சேமிப்பதற்கு அல்லது நீராவி கட்டத்தில் மட்டுமே பயன்படுத்த ஏற்றது என்று பரிந்துரைக்கின்றனர்.

உங்கள் கிரையோபிரெர்சர்வ்டு செல்களை உருக்குதல்

உறைந்த கலாச்சாரத்திற்கு உருகும் செயல்முறை மன அழுத்தத்தை ஏற்படுத்துகிறது, மேலும் செல்களின் உகந்த நம்பகத்தன்மை, மீட்பு மற்றும் செயல்பாட்டை உறுதி செய்ய சரியான கையாளுதல் மற்றும் நுட்பம் தேவைப்படுகிறது. சரியான உருகும் நெறிமுறைகள் குறிப்பிட்ட செல் வகைகளைப் பொறுத்தது. இருப்பினும், விரைவான உருகுதல் தரநிலையாகக் கருதப்படுகிறது:

• செல்லுலார் மீட்டெடுப்பில் ஏற்படும் எந்த தாக்கத்தையும் குறைக்கவும்
• உறைபனி ஊடகத்தில் இருக்கும் கரைப்பான்களுக்கு வெளிப்படும் நேரத்தைக் குறைக்க உதவுங்கள்.
• பனி மறுபடிகமாக்கல் மூலம் ஏற்படும் எந்த சேதத்தையும் குறைக்கவும்.

மாதிரிகளை கரைக்க நீர் குளியல், மணி குளியல் அல்லது சிறப்பு தானியங்கி கருவிகள் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.

பெரும்பாலும், 1 செல் வரிசையானது 1-2 நிமிடங்களுக்கு ஒரு நேரத்தில் கரைக்கப்படுகிறது, 37°C வெப்பநிலையில் தண்ணீர் குளியலில் மெதுவாகச் சுழற்றி, குப்பியில் சிறிது பனிக்கட்டி மட்டுமே எஞ்சியிருக்கும் வரை, பின்னர் முன்கூட்டியே சூடாக்கப்பட்ட வளர்ச்சி ஊடகத்தில் கழுவப்படுகிறது.

பாலூட்டி கருக்கள் போன்ற சில செல்களுக்கு, அவற்றின் உயிர்வாழ்விற்கு மெதுவான வெப்பமயமாதல் அவசியம்.

மைலோஆப்லேடிவ் சிகிச்சைக்கு முன் நன்கொடையாளர் ஸ்டெம் செல்களின் ஒருமைப்பாட்டை உறுதி செய்வதற்கான நம்பகத்தன்மை ஆய்வுகள் - செல் வளர்ப்பு, செல் தனிமைப்படுத்தல் அல்லது ஹீமாடோபாய்டிக் ஸ்டெம் செல்கள் விஷயத்தில் செல்கள் இப்போது தயாராக உள்ளன.

வளர்ப்பில் முலாம் பூசுவதற்கான செல் செறிவுகளைத் தீர்மானிக்க, செல் எண்ணிக்கையைச் செய்யப் பயன்படுத்தப்படும் முன் கழுவப்பட்ட மாதிரியின் சிறிய பகுதிகளை எடுத்துக்கொள்வது வழக்கமான நடைமுறையாகும். பின்னர் நீங்கள் செல் தனிமைப்படுத்தல் நடைமுறைகளின் முடிவுகளை மதிப்பிட்டு செல் நம்பகத்தன்மையை தீர்மானிக்கலாம்.

கிரையோவியல்களை சேமிப்பதற்கான சிறந்த நடைமுறைகள்

கிரையோவியல்களில் சேமிக்கப்பட்ட மாதிரிகளின் வெற்றிகரமான கிரையோபிரிசர்வேஷன், முறையான சேமிப்பு மற்றும் பதிவு வைத்தல் உள்ளிட்ட நெறிமுறையில் உள்ள பல கூறுகளைப் பொறுத்தது.

• சேமிப்பக இடங்களுக்கு இடையில் செல்களைப் பிரிக்கவும்– அளவுகள் அனுமதித்தால், உபகரணங்கள் செயலிழப்பால் மாதிரி இழப்பு ஏற்படும் அபாயத்தைக் குறைக்க, குப்பிகளுக்கு இடையில் செல்களைப் பிரித்து தனித்தனி இடங்களில் சேமிக்கவும்.
• குறுக்கு மாசுபாட்டைத் தடுக்கவும்- அடுத்தடுத்த பயன்பாட்டிற்கு முன் ஒற்றை-பயன்பாட்டு மலட்டு கிரையோஜெனிக் குப்பிகளை அல்லது ஆட்டோகிளேவைத் தேர்வுசெய்யவும்.
• உங்கள் செல்களுக்கு ஏற்ற அளவிலான குப்பிகளைப் பயன்படுத்துங்கள்.- குப்பிகள் 1 முதல் 5 மில்லி வரையிலான அளவுகளில் வருகின்றன. விரிசல் ஏற்படும் அபாயத்தைக் குறைக்க குப்பிகளை அதிகமாக நிரப்புவதைத் தவிர்க்கவும்.
• உட்புற அல்லது வெளிப்புற திரிக்கப்பட்ட கிரையோஜெனிக் குப்பிகளைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.- பாதுகாப்பு நடவடிக்கைகளுக்காக சில பல்கலைக்கழகங்கள் உட்புறமாக திரிக்கப்பட்ட குப்பிகளைப் பரிந்துரைக்கின்றன - அவை நிரப்பும்போது அல்லது திரவ நைட்ரஜனில் சேமிக்கப்படும் போது மாசுபடுவதைத் தடுக்கலாம்.
• கசிவைத் தடுக்கவும்- கசிவு மற்றும் மாசுபடுவதைத் தடுக்க, திருகு-மூடி அல்லது O-வளையங்களில் வார்க்கப்பட்ட இரு-ஊசி போடப்பட்ட முத்திரைகளைப் பயன்படுத்தவும்.
• 2D பார்கோடுகள் மற்றும் லேபிள் குப்பிகளைப் பயன்படுத்தவும்- தடமறிதலை உறுதி செய்வதற்காக, பெரிய எழுத்துப் பகுதிகளைக் கொண்ட குப்பிகள் ஒவ்வொரு குப்பியையும் போதுமான அளவு லேபிளிட உதவுகின்றன. 2D பார்கோடுகள் சேமிப்பு மேலாண்மை மற்றும் பதிவு பராமரிப்புக்கு உதவும். எளிதாக அடையாளம் காண வண்ணக் குறியிடப்பட்ட தொப்பிகள் பயனுள்ளதாக இருக்கும்.
• போதுமான சேமிப்பு பராமரிப்பு- செல்கள் இழக்கப்படுவதை உறுதிசெய்ய, சேமிப்புக் கலன்கள் வெப்பநிலை மற்றும் திரவ நைட்ரஜன் அளவை தொடர்ந்து கண்காணிக்க வேண்டும். பிழைகள் குறித்து பயனர்களை எச்சரிக்க அலாரங்கள் பொருத்தப்பட வேண்டும்.

பாதுகாப்பு முன்னெச்சரிக்கைகள்

நவீன ஆராய்ச்சியில் திரவ நைட்ரஜன் பொதுவான நடைமுறையாகிவிட்டது, ஆனால் தவறாகப் பயன்படுத்தினால் கடுமையான காயம் ஏற்படும் அபாயத்தைக் கொண்டுள்ளது.

திரவ நைட்ரஜனைக் கையாளும் போது உறைபனி, தீக்காயங்கள் மற்றும் பிற பாதகமான சம்பவங்களின் அபாயத்தைக் குறைக்க சரியான தனிப்பட்ட பாதுகாப்பு உபகரணங்கள் (PPE) அணிய வேண்டும்.

• கிரையோஜெனிக் கையுறைகள்
• ஆய்வக கோட்
• கழுத்தையும் உள்ளடக்கிய தாக்கத்தை எதிர்க்கும் முழு முகக் கவசம்
• மூடிய கால் காலணிகள்
• தெறிக்காத பிளாஸ்டிக் ஏப்ரான்

திரவ நைட்ரஜன் குளிர்சாதன பெட்டிகள் மூச்சுத்திணறல் அபாயத்தைக் குறைக்க நன்கு காற்றோட்டமான பகுதிகளில் வைக்கப்பட வேண்டும் - வெளியேறிய நைட்ரஜன் ஆவியாகி வளிமண்டல ஆக்ஸிஜனை இடமாற்றம் செய்கிறது. பெரிய அளவிலான கடைகளில் குறைந்த ஆக்ஸிஜன் எச்சரிக்கை அமைப்புகள் இருக்க வேண்டும்.

திரவ நைட்ரஜனைக் கையாளும் போது ஜோடியாக வேலை செய்வது சிறந்தது மற்றும் சாதாரண வேலை நேரத்திற்கு வெளியே அதன் பயன்பாடு தடை செய்யப்பட வேண்டும்.

உங்கள் பணிப்பாய்வுக்கு ஆதரவளிக்கும் கிரையோவியல்கள்

சுஜோவ் ஏஸ் பயோமெடிக்கல் நிறுவனம் பல்வேறு வகையான செல்களுக்கான உங்கள் கிரையோபிரசர்வேஷன் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்யும் பரந்த அளவிலான தயாரிப்புகளை வழங்குகிறது. இந்த போர்ட்ஃபோலியோவில் பல்வேறு வகையான குழாய்கள் மற்றும் பல்வேறு வகையான ஸ்டெரைல் கிரையோவியல்கள் உள்ளன.

எங்கள் கிரையோவியல்கள்:

• லேப் ஸ்க்ரூ கேப் 0.5மிலி 1.5மிலி 2.0மிலி கிரையோவியல் கிரையோஜெனிக் குப்பிகள் கூம்பு வடிவ பாட்டம் கிரையோட்யூப் கேஸ்கெட்டுடன்

  ● 0.5மிலி, 1.5மிலி, 2.0மிலி விவரக்குறிப்பு, பாவாடையுடன் அல்லது பாவாடை இல்லாமல்
  ● கூம்பு அல்லது சுயமாக நிற்கும் வடிவமைப்பு, மலட்டுத்தன்மை அல்லது மலட்டுத்தன்மையற்ற இரண்டும் கிடைக்கின்றன.
  ● திருகு மூடி குழாய்கள் மருத்துவ தர பாலிப்ரொப்பிலீனால் ஆனவை.
  ● பிபி கிரையோட்யூப் குப்பிகளை மீண்டும் மீண்டும் உறைய வைத்து உருக வைக்கலாம்.
  ●வெளிப்புற மூடி வடிவமைப்பு மாதிரி சிகிச்சையின் போது மாசுபடுவதற்கான நிகழ்தகவைக் குறைக்கும்.
  ● திருகு மூடி கிரையோஜெனிக் குழாய்கள் பயன்பாட்டிற்கான உலகளாவிய திருகு நூல்கள்
  ● குழாய்கள் மிகவும் பொதுவான ரோட்டர்களைப் பொருத்துகின்றன.
  ● கிரையோஜெனிக் குழாய் ஓ-ரிங் குழாய்கள் நிலையான 1-இன்ச் மற்றும் 2-இன்ச், 48கிணறு, 81கிணறு, 96கிணறு மற்றும் 100கிணறு உறைவிப்பான் பெட்டிகளுக்கு பொருந்தும்.
  ● 121°C வரை ஆட்டோகிளேவ் செய்யக்கூடியது மற்றும் -86°C வரை உறைய வைக்கக்கூடியது.

  பகுதி எண்	பொருள்	தொகுதி	தொப்பிநிறம்	பிசிஎஸ்/பை	பைகள்/வழக்கு
  ACT05-BL-N அறிமுகம்	PP	0.5மிலி	கருப்பு, மஞ்சள், நீலம், சிவப்பு, ஊதா, வெள்ளை	500 மீ	10
  ACT15-BL-N அறிமுகம்	PP	1.5 மிலி	கருப்பு, மஞ்சள், நீலம், சிவப்பு, ஊதா, வெள்ளை	500 மீ	10
  ACT15-BL-NW அறிமுகம்	PP	1.5 மிலி	கருப்பு, மஞ்சள், நீலம், சிவப்பு, ஊதா, வெள்ளை	500 மீ	10
  ACT20-BL-N அறிமுகம்	PP	2.0மிலி	கருப்பு, மஞ்சள், நீலம், சிவப்பு, ஊதா, வெள்ளை	500 மீ	10