O que são criotubos?
Frascos de armazenamento criogênicoOs criotubos são recipientes pequenos, cilíndricos e com tampa, projetados para armazenar e preservar amostras em temperaturas ultrabaixas. Embora tradicionalmente esses frascos fossem feitos de vidro, agora são muito mais comumente feitos de polipropileno por conveniência e custo. Os criotubos foram cuidadosamente projetados para suportar temperaturas tão baixas quanto -196°C e para acomodar uma ampla variedade de tipos de células. Estes variam de células-tronco diagnósticas, microrganismos e células primárias a linhagens celulares estabelecidas. Além disso, também pode haver pequenos organismos multicelulares armazenados emfrascos de armazenamento criogênico, bem como ácidos nucleicos e proteínas que precisam ser armazenados em níveis de temperatura de armazenamento criogênico.
Os frascos criogênicos para armazenamento estão disponíveis em diversos formatos, e encontrar o tipo certo que atenda a todas as suas necessidades garantirá a manutenção da integridade da amostra sem gastar demais. Leia nosso artigo para saber mais sobre os principais fatores de compra ao selecionar o frasco criogênico certo para a sua aplicação laboratorial.
Propriedades do frasco criogênico a serem consideradas
Roscas externas vs. internas
As pessoas geralmente fazem essa escolha com base na preferência pessoal, mas, na verdade, há diferenças funcionais importantes a serem consideradas entre os dois tipos de rosca.
Muitos laboratórios costumam optar por frascos com rosca interna para minimizar o espaço de armazenamento dos tubos e permitir um melhor encaixe em freezers. Apesar disso, você pode considerar a opção com rosca externa como a melhor opção para você. Considera-se que eles apresentam menor risco de contaminação, devido ao seu design, que dificulta ainda mais a entrada de qualquer objeto que não seja a amostra no frasco.
Frascos com rosca externa são geralmente preferidos para aplicações genômicas, mas ambas as opções são consideradas adequadas para biobancos e outras aplicações de alto rendimento.
Uma última coisa a considerar sobre a rosca: se seu laboratório usa automação, você pode precisar considerar qual rosca pode ser usada com as pinças do instrumento.
Volume de armazenamento
Os frascos criogênicos estão disponíveis em vários tamanhos para cobrir a maioria das necessidades, mas geralmente variam entre uma capacidade de 1 mL e 5 mL.
O fundamental é garantir que o criotubo não esteja cheio demais e que haja espaço extra disponível, caso a amostra inche durante o congelamento. Na prática, isso significa que os laboratórios optam por frascos de 1 mL para armazenar amostras de 0,5 mL de células suspensas em crioprotetor, e frascos de 2 mL para 1 mL de amostra. Outra dica para não encher demais os frascos é usar criotubos com marcações graduadas, o que evitará qualquer inchaço que possa causar rachaduras ou vazamentos.
Tampa de rosca vs. tampa articulada
O tipo de tampa que você escolher depende principalmente se você usará nitrogênio em fase líquida ou não. Se for o caso, você precisará de criotubos com tampa de rosca. Isso garante que eles não se abram acidentalmente devido a manuseio incorreto ou mudanças de temperatura. Além disso, as tampas de rosca permitem uma recuperação mais fácil das caixas criogênicas e um armazenamento mais eficiente.
No entanto, se você não estiver usando nitrogênio líquido e precisar de uma tampa mais conveniente e fácil de abrir, uma tampa articulada é a melhor opção. Isso economizará muito tempo, pois é muito mais fácil de abrir, o que a torna particularmente útil em operações de alto rendimento e naquelas que utilizam processos em lote.
Selo de Segurança
A melhor maneira de garantir uma vedação segura é certificar-se de que a tampa e o frasco criogênicos sejam feitos do mesmo material. Isso garantirá que eles se contraiam e se expandissem simultaneamente. Se forem feitos com materiais diferentes, eles se contrairão e se expandirão em velocidades diferentes conforme a temperatura muda, causando lacunas e potencial vazamento e consequente contaminação.
Algumas empresas oferecem arruelas duplas e flange para o mais alto nível de segurança da amostra em criotubos com rosca externa. Criotubos com anel de vedação são considerados os mais confiáveis para criotubos com rosca interna.
Vidro vs Plástico
Por questões de segurança e conveniência, muitos laboratórios agora utilizam plástico, geralmente polipropileno, em vez de ampolas de vidro seláveis a quente. As ampolas de vidro são consideradas uma opção ultrapassada, pois durante o processo de selagem podem ocorrer vazamentos invisíveis por microperfurações, que, ao serem descongeladas após o armazenamento em nitrogênio líquido, podem causar sua explosão. Além disso, elas não são tão adequadas às técnicas modernas de rotulagem, essenciais para garantir a rastreabilidade das amostras.
Calças autoportantes vs. calças arredondadas
Os frascos criogênicos estão disponíveis tanto com fundo em formato de estrela quanto com fundo arredondado. Se você precisar colocar seus frascos sobre uma superfície, certifique-se de escolher o modelo com fundo em formato de estrela.
Rastreabilidade e rastreamento de amostras
Esta área do armazenamento criogênico é frequentemente negligenciada, mas o rastreamento e a rastreabilidade das amostras são aspectos cruciais a serem considerados. As amostras criogênicas podem ser armazenadas por muitos anos, período durante o qual a equipe pode mudar e, sem registros devidamente mantidos, podem se tornar irreconhecíveis.
Certifique-se de escolher frascos que facilitem ao máximo a identificação da amostra. Observe os seguintes pontos:
Grandes áreas para escrever para registrar detalhes suficientes para que os registros possam ser encontrados caso um frasco seja localizado em um local incorreto – geralmente, a identidade da célula, a data de congelamento e as iniciais da pessoa responsável são adequadas.
Códigos de barras para auxiliar sistemas de gerenciamento e rastreamento de amostras
Bonés coloridos
Uma observação para o futuro: chips ultrarresistentes ao frio estão sendo desenvolvidos, os quais, quando instalados em criotubos individuais, podem armazenar um histórico térmico detalhado, bem como informações detalhadas sobre o lote, resultados de testes e outras documentações de qualidade relevantes.
Além de considerar as diferentes especificações dos frascos disponíveis, também é preciso pensar no processo técnico de armazenamento de frascos criogênicos em nitrogênio líquido.
Temperatura de armazenamento
Existem vários métodos de armazenamento criogênico de amostras, cada um operando a uma temperatura específica. As opções e as temperaturas em que operam incluem:
Fase líquida LN2: manter uma temperatura de -196℃
LN2 fase vapor: são capazes de operar em faixas de temperatura específicas entre -135°C e -190°C dependendo do modelo.
Congeladores de vapor de nitrogênio: -20°C a -150°C
O tipo de células armazenadas e o método de armazenamento preferido do pesquisador determinarão qual das três opções disponíveis seu laboratório usará.
No entanto, devido às temperaturas extremamente baixas empregadas, nem todos os tubos ou designs serão adequados ou seguros. Os materiais podem se tornar extremamente frágeis em temperaturas extremamente baixas. O uso de um frasco inadequado para uso na temperatura escolhida pode causar a quebra ou rachadura do recipiente durante o armazenamento ou descongelamento.
Verifique cuidadosamente as recomendações dos fabricantes sobre o uso adequado, pois alguns frascos criogênicos são adequados para temperaturas tão baixas quanto -175 °C, alguns -150 °C e outros apenas 80 °C.
Também vale a pena notar que muitos fabricantes afirmam que seus frascos criogênicos não são adequados para imersão na fase líquida. Se esses frascos forem armazenados na fase líquida ao retornarem à temperatura ambiente, eles ou suas tampas podem se romper devido ao rápido aumento de pressão causado por pequenos vazamentos.
Se as células forem armazenadas na fase líquida do nitrogênio líquido, considere armazená-las em frascos criogênicos adequados, selados a quente em tubos crioflex ou armazená-las em ampolas de vidro hermeticamente fechadas.
Horário da publicação: 25/11/2022