क्रायोव्हियल्सद्रव नायट्रोजनने भरलेल्या देवारांमध्ये, पेशी रेषा आणि इतर महत्त्वपूर्ण जैविक पदार्थांच्या क्रायोजेनिक साठवणुकीसाठी सामान्यतः वापरले जातात.

द्रव नायट्रोजनमध्ये पेशींचे यशस्वीरित्या जतन करण्यासाठी अनेक टप्पे असतात. मूलभूत तत्व म्हणजे हळूहळू गोठवणे, परंतु नेमके तंत्र वापरल्या जाणाऱ्या पेशी प्रकारावर आणि वापरल्या जाणाऱ्या क्रायोप्रोटेक्टंटवर अवलंबून असते. इतक्या कमी तापमानात पेशी साठवताना अनेक सुरक्षितता बाबी आणि सर्वोत्तम पद्धती विचारात घेतल्या पाहिजेत.

या पोस्टचा उद्देश द्रव नायट्रोजनमध्ये क्रायोव्हियल कसे साठवले जातात याचा आढावा देणे आहे.

क्रायोव्हियल्स म्हणजे काय?

क्रायोव्हियल हे लहान, झाकलेल्या कुपी असतात ज्या अत्यंत कमी तापमानात द्रव नमुने साठवण्यासाठी डिझाइन केल्या जातात. ते सुनिश्चित करतात की क्रायोप्रोटेक्टंटमध्ये जतन केलेल्या पेशी द्रव नायट्रोजनच्या थेट संपर्कात येत नाहीत, ज्यामुळे पेशी फ्रॅक्चरचा धोका कमी होतो आणि तरीही द्रव नायट्रोजनच्या अत्यंत थंड प्रभावाचा फायदा होतो.

या कुपी सामान्यतः विविध आकारमान आणि डिझाइनमध्ये उपलब्ध असतात - त्या आतील किंवा बाहेरून सपाट किंवा गोलाकार तळाशी थ्रेड केल्या जाऊ शकतात. निर्जंतुकीकरण आणि निर्जंतुकीकरण नसलेले स्वरूप देखील उपलब्ध आहेत.

कोण वापरतेसायरोव्हियल्सद्रव नायट्रोजनमध्ये पेशी साठवणे

एनएचएस आणि खाजगी प्रयोगशाळांची एक श्रेणी, तसेच कॉर्ड ब्लड बँकिंग, एपिथेलियल सेल बायोलॉजी, इम्यूनोलॉजी आणि स्टेम सेल बायोलॉजीमध्ये विशेषज्ञ असलेल्या संशोधन संस्था पेशींचे आरक्षण करण्यासाठी क्रायोव्हियल वापरतात.

अशा प्रकारे जतन केलेल्या पेशींमध्ये बी आणि टी पेशी, सीएचओ पेशी, हेमॅटोपोएटिक स्टेम आणि प्रोजेनिटर पेशी, हायब्रिडोमास, आतड्यांसंबंधी पेशी, मॅक्रोफेजेस, मेसेनकायमल स्टेम आणि प्रोजेनिटर पेशी, मोनोसाइट्स, मायलोमा, एनके पेशी आणि प्लुरिपोटेंट स्टेम पेशी यांचा समावेश आहे.

द्रव नायट्रोजनमध्ये क्रायोव्हियल्स कसे साठवायचे याचा आढावा

क्रायोप्रिझर्वेशन ही एक प्रक्रिया आहे जी पेशी आणि इतर जैविक रचनांना अतिशय कमी तापमानात थंड करून जतन करते. पेशींची व्यवहार्यता न गमावता पेशी वर्षानुवर्षे द्रव नायट्रोजनमध्ये साठवता येतात. ही वापरल्या जाणाऱ्या प्रक्रियांची रूपरेषा आहे.

पेशी तयार करणे

पेशींच्या प्रकारानुसार नमुने तयार करण्याची अचूक पद्धत बदलू शकते, परंतु सर्वसाधारणपणे, पेशी गोळा केल्या जातात आणि पेशींनी समृद्ध गोळी विकसित करण्यासाठी सेंट्रीफ्यूज केले जातात. नंतर ही गोळी क्रायोप्रोटेक्टंट किंवा क्रायोप्रिझर्वेशन माध्यमात मिसळलेल्या सुपरनॅटंटमध्ये पुन्हा सस्पेंड केली जाते.

क्रायोप्रिझर्वेशन माध्यम

या माध्यमाचा वापर पेशींच्या आत आणि बाहेरील क्रिस्टल्सची निर्मिती रोखून कमी-तापमानाच्या वातावरणात पेशींचे संरक्षण करण्यासाठी केला जातो आणि त्यामुळे पेशींचा मृत्यू होतो. गोठवण्याच्या, साठवण्याच्या आणि वितळण्याच्या प्रक्रियेदरम्यान पेशी आणि ऊतींसाठी सुरक्षित, संरक्षणात्मक वातावरण प्रदान करणे ही त्यांची भूमिका आहे.

फ्रेश फ्रोझन प्लाझ्मा (FFP), हेपरिनाइज्ड प्लाझ्मालाइट सोल्यूशन किंवा सीरम-मुक्त, प्राण्यांच्या घटक-मुक्त सोल्यूशनसारखे माध्यम डायमिथाइल सल्फॉक्साइड (DMSO) किंवा ग्लिसरॉल सारख्या क्रायोप्रोटेक्टंट्ससह मिसळले जाते.

पुन्हा द्रवीकृत नमुना गोळी पॉलीप्रोपायलीन क्रायोव्हियलमध्ये विरघळवली जाते जसे कीसुझोउ एस बायोमेडिकल कंपनी क्रायोजेनिक स्टोरेज वायल्स.

क्रायोव्हियल जास्त प्रमाणात भरू नये हे महत्वाचे आहे कारण यामुळे क्रॅक होण्याचा आणि त्यातील घटक बाहेर पडण्याचा धोका वाढेल (१).

नियंत्रित गोठवण्याचा दर

सर्वसाधारणपणे, पेशींच्या यशस्वी क्रायोप्रिझर्वेशनसाठी मंद नियंत्रित गोठवण्याचा दर वापरला जातो.

नमुने क्रायोजेनिक कुपींमध्ये मिसळल्यानंतर, ते ओल्या बर्फावर किंवा 4℃ तापमानाच्या रेफ्रिजरेटरमध्ये ठेवले जातात आणि 5 मिनिटांत गोठवण्याची प्रक्रिया सुरू होते. सामान्य मार्गदर्शक म्हणून, पेशी -1 ते -3 प्रति मिनिट या दराने थंड केल्या जातात (2). हे प्रोग्राम करण्यायोग्य कूलर वापरून किंवा -70°C ते -90°C नियंत्रित दर फ्रीजरमध्ये ठेवलेल्या इन्सुलेटेड बॉक्समध्ये कुपी ठेवून साध्य केले जाते.

द्रव नायट्रोजनमध्ये स्थानांतरित करा

गोठवलेल्या क्रायोजेनिक कुपी नंतर -१३५ डिग्री सेल्सियस पेक्षा कमी तापमान राखल्यास अनिश्चित काळासाठी द्रव नायट्रोजन टाकीमध्ये हलवल्या जातात.

हे अति-कमी तापमान द्रव किंवा बाष्प अवस्थेतील नायट्रोजनमध्ये बुडवून मिळवता येते.

द्रव किंवा वाष्प अवस्था?

द्रव अवस्थेत नायट्रोजन साठवल्याने थंड तापमान पूर्ण सुसंगततेसह राखले जाते हे ज्ञात आहे, परंतु खालील कारणांमुळे ते सहसा शिफारसित नाही:

• मोठ्या प्रमाणात (खोल) द्रव नायट्रोजनची आवश्यकता, जी एक संभाव्य धोका आहे. यामुळे भाजणे किंवा श्वास रोखणे हा एक वास्तविक धोका आहे.
• एस्परगिलस, हेपेटायटीस बी आणि द्रव नायट्रोजन माध्यमातून पसरलेल्या विषाणूंसारख्या संसर्गजन्य घटकांद्वारे क्रॉस-दूषित होण्याचे दस्तऐवजीकरण केलेले प्रकरणे (२,३)
• विसर्जन करताना द्रव नायट्रोजन बाटल्यांमध्ये गळती होण्याची शक्यता. साठवणुकीतून काढून खोलीच्या तापमानाला गरम केल्यावर, नायट्रोजन वेगाने विस्तारतो. परिणामी, द्रव नायट्रोजन साठवणुकीतून काढल्यावर बाटली फुटू शकते, ज्यामुळे उडणाऱ्या कचऱ्यापासून आणि त्यातील घटकांच्या संपर्कात येण्यापासून धोका निर्माण होतो (१, ४).

या कारणांमुळे, अति-कमी तापमानात साठवणूक ही सामान्यतः वाष्प टप्प्यातील नायट्रोजनमध्ये होते. जेव्हा नमुने द्रव टप्प्यात साठवायचे असतात, तेव्हा विशेष क्रायोफ्लेक्स ट्यूबिंग वापरावे.

बाष्प अवस्थेचा तोटा असा आहे की उभ्या तापमान ग्रेडियंटमुळे -१३५℃ आणि -१९०℃ दरम्यान तापमानात चढ-उतार होऊ शकतात. यासाठी द्रव नायट्रोजन पातळी आणि तापमानातील फरकांचे काळजीपूर्वक आणि परिश्रमपूर्वक निरीक्षण करणे आवश्यक आहे (५).

अनेक उत्पादक शिफारस करतात की क्रायोव्हियल -१३५ डिग्री सेल्सिअस पर्यंत साठवण्यासाठी किंवा फक्त बाष्प अवस्थेत वापरण्यासाठी योग्य आहेत.

तुमच्या क्रायोप्रिझर्व्ड पेशी वितळवणे

गोठवलेल्या कल्चरसाठी वितळण्याची प्रक्रिया तणावपूर्ण असते आणि पेशींची इष्टतम व्यवहार्यता, पुनर्प्राप्ती आणि कार्यक्षमता सुनिश्चित करण्यासाठी योग्य हाताळणी आणि तंत्र आवश्यक असते. वितळण्याचे अचूक प्रोटोकॉल विशिष्ट पेशी प्रकारांवर अवलंबून असतील. तथापि, जलद वितळणे हे मानक मानले जाते:

• पेशी पुनर्प्राप्तीवरील कोणताही परिणाम कमी करा
• गोठवणाऱ्या माध्यमात असलेल्या द्राव्य पदार्थांच्या संपर्कात येण्याचा वेळ कमी करण्यास मदत करा.
• बर्फाचे पुनर्स्फटिकीकरण करून होणारे कोणतेही नुकसान कमीत कमी करा.

नमुने वितळवण्यासाठी सामान्यतः पाण्याचे स्नान, मणी स्नान किंवा विशेष स्वयंचलित उपकरणे वापरली जातात.

बहुतेकदा, १ सेल लाईन एका वेळी १-२ मिनिटांसाठी वितळवली जाते, ३७℃ तापमानाच्या पाण्याच्या बाथमध्ये हळूवारपणे फिरवली जाते जोपर्यंत कुपीमध्ये थोडासा बर्फ शिल्लक राहत नाही आणि नंतर ती पूर्व-गरम केलेल्या वाढीच्या माध्यमात धुतली जाते.

सस्तन प्राण्यांच्या भ्रूणांसारख्या काही पेशींसाठी, त्यांच्या अस्तित्वासाठी मंद तापमानवाढ आवश्यक आहे.

पेशी आता पेशी संवर्धन, पेशी अलगाव किंवा हेमेटोपोएटिक स्टेम सेल्सच्या बाबतीत तयार आहेत - मायलोअॅब्लेटिव्ह थेरपीपूर्वी दात्याच्या स्टेम पेशींच्या अखंडतेची हमी देण्यासाठी व्यवहार्यता अभ्यास.

कल्चरमध्ये प्लेटिंगसाठी पेशींची सांद्रता निश्चित करण्यासाठी पेशी मोजण्यासाठी वापरल्या जाणाऱ्या प्रीवॉश केलेल्या नमुन्याचे लहान अंश घेणे ही सामान्य पद्धत आहे. त्यानंतर तुम्ही पेशी अलगीकरण प्रक्रियेच्या परिणामांचे मूल्यांकन करू शकता आणि पेशींची व्यवहार्यता निश्चित करू शकता.

क्रायोव्हियल्स साठवण्यासाठी सर्वोत्तम पद्धती

क्रायोव्हियलमध्ये साठवलेल्या नमुन्यांचे यशस्वी क्रायोप्रिझर्वेशन हे योग्य साठवणूक आणि रेकॉर्ड ठेवणे यासह प्रोटोकॉलमधील अनेक घटकांवर अवलंबून असते.

• स्टोरेज स्थानांमध्ये सेल विभाजित करा- जर प्रमाण शक्य असेल तर, उपकरणांच्या बिघाडामुळे नमुना गमावण्याचा धोका कमी करण्यासाठी, बाटल्यांमध्ये पेशी विभाजित करा आणि त्या वेगवेगळ्या ठिकाणी साठवा.
• क्रॉस-दूषित होणे टाळा- नंतर वापरण्यापूर्वी एकदा वापरता येणारे निर्जंतुकीकरण क्रायोजेनिक शीशा किंवा ऑटोक्लेव्ह निवडा.
• तुमच्या पेशींसाठी योग्य आकाराच्या कुपी वापरा.- बाटल्या १ ते ५ मिली पर्यंतच्या आकारमानात येतात. फुटण्याचा धोका कमी करण्यासाठी बाटल्या जास्त भरणे टाळा.
• अंतर्गत किंवा बाह्य थ्रेडेड क्रायोजेनिक शीशा निवडा.- काही विद्यापीठांनी सुरक्षिततेच्या उपायांसाठी अंतर्गत थ्रेडेड कुपींची शिफारस केली आहे - ते भरताना किंवा द्रव नायट्रोजनमध्ये साठवताना दूषित होण्यापासून देखील रोखू शकतात.
• गळती रोखा- गळती आणि दूषितता टाळण्यासाठी स्क्रू-कॅप किंवा ओ-रिंगमध्ये मोल्ड केलेले बाय-इंजेक्टेड सील वापरा.
• 2D बारकोड आणि लेबल व्हिल वापरा- ट्रेसेबिलिटी सुनिश्चित करण्यासाठी, मोठ्या लेखन क्षेत्रासह असलेल्या कुपी प्रत्येक कुपीला पुरेसे लेबल करण्यास सक्षम करतात. 2D बारकोड स्टोरेज व्यवस्थापन आणि रेकॉर्ड ठेवण्यास मदत करू शकतात. सहज ओळखण्यासाठी रंगीत कोडेड कॅप्स उपयुक्त आहेत.
• पुरेशी साठवणूक देखभाल- पेशी नष्ट होऊ नयेत याची खात्री करण्यासाठी, साठवणूक वाहिन्यांनी तापमान आणि द्रव नायट्रोजन पातळीचे सतत निरीक्षण केले पाहिजे. वापरकर्त्यांना चुकांबद्दल सतर्क करण्यासाठी अलार्म बसवले पाहिजेत.

सुरक्षितता खबरदारी

आधुनिक संशोधनात द्रव नायट्रोजन ही एक सामान्य पद्धत बनली आहे परंतु चुकीच्या पद्धतीने वापरल्यास गंभीर दुखापत होण्याचा धोका असतो.

द्रव नायट्रोजन हाताळताना हिमबाधा, भाजणे आणि इतर प्रतिकूल घटनांचा धोका कमी करण्यासाठी योग्य वैयक्तिक संरक्षक उपकरणे (पीपीई) परिधान करावीत. परिधान करा

• क्रायोजेनिक हातमोजे
• प्रयोगशाळेचा कोट
• मान झाकणारे प्रभाव प्रतिरोधक फुल फेस शील्ड
• बंद पायाचे बूट
• स्प्लॅशप्रूफ प्लास्टिक एप्रन

श्वास रोखण्याचा धोका कमी करण्यासाठी द्रव नायट्रोजन रेफ्रिजरेटर्स चांगल्या हवेशीर ठिकाणी ठेवावेत - बाहेर पडणारा नायट्रोजन वातावरणातील ऑक्सिजनचे बाष्पीभवन करून विस्थापित करतो. मोठ्या प्रमाणात असलेल्या स्टोअरमध्ये कमी ऑक्सिजन अलार्म सिस्टम असाव्यात.

द्रव नायट्रोजन हाताळताना जोडीने काम करणे आदर्श आहे आणि सामान्य कामकाजाच्या वेळेबाहेर त्याचा वापर करण्यास मनाई असावी.

तुमच्या कार्यप्रवाहाला आधार देण्यासाठी क्रायोव्हियल्स

सुझोउ एस बायोमेडिकल कंपनी विविध प्रकारच्या पेशींसाठी तुमच्या क्रायोप्रिझर्वेशन गरजा पूर्ण करणाऱ्या उत्पादनांची विस्तृत निवड देते. पोर्टफोलिओमध्ये विविध प्रकारच्या नळ्या तसेच निर्जंतुकीकरण क्रायोव्हियल्सचा समावेश आहे.

आमचे क्रायोव्हियल आहेत:

• लॅब स्क्रू कॅप ०.५ मिली १.५ मिली २.० मिली क्रायोव्हियल क्रायोजेनिक वायल्स शंकूच्या आकाराचे तळाशी क्रायोट्यूब गॅस्केटसह

  ● ०.५ मिली, १.५ मिली, २.० मिली स्पेसिफिकेशन, स्कर्टसह किंवा स्कर्टशिवाय
  ● शंकूच्या आकाराचे किंवा स्वयं-उभे डिझाइन, निर्जंतुकीकरण किंवा निर्जंतुकीकरण नसलेले दोन्ही उपलब्ध आहेत.
  ● स्क्रू कॅप ट्यूब मेडिकल ग्रेड पॉलीप्रोपायलीनपासून बनवल्या जातात.
  ● पीपी क्रायोट्यूब वायल्स वारंवार गोठवता येतात आणि वितळवता येतात.
  ● नमुना उपचारादरम्यान बाह्य कॅप डिझाइनमुळे दूषित होण्याची शक्यता कमी होऊ शकते.
  ● स्क्रू कॅप क्रायोजेनिक ट्यूब वापरण्यासाठी युनिव्हर्सल स्क्रू थ्रेड्स
  ● ट्यूब्स बहुतेक सामान्य रोटर्समध्ये बसतात.
  ● क्रायोजेनिक ट्यूब ओ-रिंग ट्यूब मानक १-इंच आणि २-इंच, ४८वेल, ८१वेल, ९६वेल आणि १००वेल फ्रीजर बॉक्समध्ये बसतात.
  ● १२१°C पर्यंत ऑटोक्लेव्हेबल आणि -८६°C पर्यंत फ्रीझ करण्यायोग्य

  भाग क्र.	साहित्य	खंड	कॅपरंग	पीसीएस/बॅग	बॅग/केस
  ACT05-BL-N साठी चौकशी सबमिट करा, आम्ही तुमच्याशी २४ तासांत संपर्क करू.	PP	०.५ मिली	काळा, पिवळा, निळा, लाल, जांभळा, पांढरा	५००	10
  ACT15-BL-N साठी चौकशी सबमिट करा, आम्ही तुमच्याशी २४ तासांत संपर्क करू.	PP	१.५ मिली	काळा, पिवळा, निळा, लाल, जांभळा, पांढरा	५००	10
  ACT15-BL-NW साठी चौकशी सबमिट करा, आम्ही तुमच्याशी २४ तासांत संपर्क करू.	PP	१.५ मिली	काळा, पिवळा, निळा, लाल, जांभळा, पांढरा	५००	10
  ACT20-BL-N साठी चौकशी सबमिट करा, आम्ही तुमच्याशी २४ तासांत संपर्क करू.	PP	२.० मिली	काळा, पिवळा, निळा, लाल, जांभळा, पांढरा	५००	10