Kriovialumumnya digunakan untuk penyimpanan kriogenik garis sel dan bahan biologis penting lainnya, dalam dewar yang diisi dengan nitrogen cair.

Ada beberapa tahap yang terlibat dalam pengawetan sel yang berhasil dalam nitrogen cair. Meskipun prinsip dasarnya adalah pembekuan lambat, teknik yang digunakan bergantung pada jenis sel dan krioprotektan yang digunakan. Ada beberapa pertimbangan keselamatan dan praktik terbaik yang perlu diperhatikan saat menyimpan sel pada suhu rendah tersebut.

Tulisan ini bertujuan untuk memberikan gambaran umum tentang bagaimana kriovial disimpan dalam nitrogen cair.

Apa itu Cryovial?

Kriovial adalah botol kecil berpenutup yang dirancang untuk menyimpan sampel cair pada suhu yang sangat rendah. Botol ini memastikan bahwa sel yang diawetkan dalam krioprotektan tidak bersentuhan langsung dengan nitrogen cair, sehingga meminimalkan risiko fraktur sel sekaligus tetap mendapatkan manfaat dari efek pendinginan ekstrem nitrogen cair.

Botol-botol tersebut biasanya tersedia dalam berbagai volume dan desain – botol-botol tersebut dapat dipasang di dalam atau di luar dengan bagian bawah yang datar atau membulat. Format steril dan non-steril juga tersedia.

Siapa yang menggunakanBurung Cyrovialuntuk Menyimpan Sel dalam Nitrogen Cair

Sejumlah laboratorium NHS dan swasta, serta lembaga penelitian yang mengkhususkan diri dalam perbankan darah tali pusat, biologi sel epitel, imunologi dan biologi sel punca menggunakan kriovial untuk mengkriopreservasi sel.

Sel yang diawetkan dengan cara ini meliputi Sel B dan T, Sel CHO, Sel Punca dan Progenitor Hematopoietik, Hibridoma, Sel Intestinal, Makrofag, Sel Punca dan Progenitor Mesenkimal, Monosit, Mieloma, Sel NK, dan Sel Punca Pluripoten.

Tinjauan Umum tentang Cara Menyimpan Cryovial dalam Nitrogen Cair

Kriopreservasi adalah proses yang mengawetkan sel dan konstruksi biologis lainnya dengan mendinginkannya hingga suhu yang sangat rendah. Sel dapat disimpan dalam nitrogen cair selama bertahun-tahun tanpa kehilangan viabilitas sel. Berikut ini adalah garis besar prosedur yang digunakan.

Persiapan Sel

Metode yang tepat untuk menyiapkan sampel akan bervariasi tergantung pada jenis sel, tetapi secara umum, sel dikumpulkan dan disentrifugasi untuk mengembangkan pelet yang kaya sel. Pelet ini kemudian disuspensikan kembali dalam supernatan yang dicampur dengan krioprotektan atau media kriopreservasi.

Media Kriopreservasi

Media ini digunakan untuk mengawetkan sel dalam lingkungan bersuhu rendah tempat sel akan berada dengan menghambat pembentukan kristal intra dan ekstraseluler dan dengan demikian kematian sel. Peran media ini adalah menyediakan lingkungan yang aman dan protektif bagi sel dan jaringan selama proses pembekuan, penyimpanan, dan pencairan.

Media seperti plasma beku segar (FFP), larutan plasmalit heparinisasi, atau larutan bebas serum dan bebas komponen hewan dicampur dengan krioprotektan seperti dimetil sulfoksida (DMSO) atau gliserol.

Pelet sampel yang dicairkan kembali dialirkan ke dalam kriovial polipropilena sepertiBotol Penyimpanan Kriogenik Perusahaan Biomedis Suzhou Ace.

Penting untuk tidak mengisi kriovial terlalu penuh karena ini akan meningkatkan risiko retak dan kemungkinan terlepasnya isi (1).

Laju Pembekuan Terkendali

Secara umum, laju pembekuan yang lambat dan terkendali digunakan untuk keberhasilan kriopreservasi sel.

Setelah sampel dibagi ke dalam vial kriogenik, sampel tersebut ditempatkan di atas es basah atau dalam lemari pendingin bersuhu 4℃ dan prosedur pembekuan dimulai dalam waktu 5 menit. Sebagai panduan umum, sel didinginkan pada kecepatan -1 hingga -3 per menit (2). Hal ini dicapai dengan menggunakan pendingin yang dapat diprogram atau dengan menempatkan vial dalam kotak terisolasi yang ditempatkan dalam freezer dengan kecepatan terkontrol –70°C hingga –90°C.

Transfer ke Nitrogen Cair

Botol kriogenik beku kemudian dipindahkan ke tangki nitrogen cair untuk jangka waktu yang tidak terbatas asalkan suhunya dipertahankan kurang dari -135℃.

Suhu sangat rendah ini dapat diperoleh melalui perendaman dalam fase cair atau uap nitrogen.

Fase Cair atau Uap?

Penyimpanan dalam nitrogen fase cair diketahui dapat mempertahankan suhu dingin dengan konsistensi absolut, tetapi sering tidak direkomendasikan karena alasan berikut:

• Kebutuhan akan nitrogen cair dalam jumlah besar (dalam kedalaman) merupakan potensi bahaya. Luka bakar atau sesak napas akibat hal ini merupakan risiko nyata.
• Kasus-kasus yang terdokumentasi mengenai kontaminasi silang oleh agen infeksius seperti aspergillus, hepatitis B dan penyebaran virus melalui media nitrogen cair (2,3)
• Potensi nitrogen cair bocor ke dalam vial selama perendaman. Saat dikeluarkan dari tempat penyimpanan dan dihangatkan hingga suhu ruangan, nitrogen akan memuai dengan cepat. Akibatnya, vial dapat pecah saat dikeluarkan dari tempat penyimpanan nitrogen cair, sehingga menimbulkan bahaya dari serpihan yang beterbangan dan paparan terhadap isinya (1, 4).

Karena alasan ini, penyimpanan suhu sangat rendah paling umum dilakukan dalam nitrogen fase uap. Bila sampel harus disimpan dalam fase cair, sebaiknya digunakan tabung kriofleksi khusus.

Kelemahan dari fase uap adalah gradien suhu vertikal dapat terjadi yang mengakibatkan fluktuasi suhu antara -135℃ dan -190℃. Hal ini memerlukan pemantauan yang cermat dan tekun terhadap tingkat nitrogen cair dan variasi suhu (5).

Banyak produsen menyarankan bahwa kriovial cocok untuk penyimpanan hingga -135℃ atau untuk digunakan dalam fase uap saja.

Mencairkan Sel Kriopreservasi Anda

Prosedur pencairan sangat menegangkan bagi kultur beku, dan penanganan serta teknik yang tepat diperlukan untuk memastikan viabilitas, pemulihan, dan fungsi sel yang optimal. Protokol pencairan yang tepat akan bergantung pada jenis sel tertentu. Namun, pencairan cepat dianggap standar untuk:

• Mengurangi dampak apa pun pada pemulihan seluler
• Membantu mengurangi waktu paparan zat terlarut yang ada di media pembekuan
• Minimalkan kerusakan akibat rekristalisasi es

Pemandian air, pemandian manik-manik, atau instrumen otomatis khusus umumnya digunakan untuk mencairkan sampel.

Paling sering, 1 garis sel dicairkan pada suatu waktu selama 1-2 menit, dengan cara diputar perlahan dalam air bersuhu 37℃ hingga hanya tersisa sedikit es dalam botol sebelum dicuci dalam media pertumbuhan yang telah dihangatkan terlebih dahulu.

Untuk beberapa sel seperti embrio mamalia, pemanasan lambat sangat penting untuk kelangsungan hidup mereka.

Sel-sel tersebut sekarang siap untuk kultur sel, isolasi sel, atau dalam kasus sel induk hematopoietik – studi viabilitas untuk menjamin integritas sel induk donor sebelum terapi mieloablatif.

Merupakan praktik yang normal untuk mengambil sebagian kecil sampel yang telah dicuci sebelumnya yang digunakan untuk melakukan penghitungan sel guna menentukan konsentrasi sel untuk pelapisan dalam kultur. Anda kemudian dapat menilai hasil prosedur isolasi sel dan menentukan viabilitas sel.

Praktik Terbaik untuk Penyimpanan Kriovial

Keberhasilan krisopreservasi sampel yang disimpan dalam kriovial bergantung pada banyak elemen dalam protokol, termasuk penyimpanan dan pencatatan yang tepat.

• Membagi sel antara lokasi penyimpanan– Jika volume memungkinkan, pisahkan sel ke dalam botol dan simpan di lokasi terpisah untuk mengurangi risiko hilangnya sampel akibat kegagalan peralatan.
• Mencegah kontaminasi silang– Pilih botol kriogenik steril sekali pakai atau autoklaf sebelum penggunaan selanjutnya
• Gunakan botol berukuran sesuai untuk sel Anda– botol tersedia dalam berbagai volume antara 1 dan 5 ml. Hindari mengisi botol terlalu penuh untuk mengurangi risiko retak.
• Pilih botol kriogenik berulir internal atau eksternal– Botol berulir internal direkomendasikan oleh beberapa universitas demi langkah-langkah keamanan – botol ini juga dapat mencegah kontaminasi selama pengisian atau saat disimpan dalam nitrogen cair.
• Mencegah Kebocoran- Gunakan segel bi-injeksi yang dicetak ke dalam tutup ulir atau cincin-O untuk mencegah kebocoran dan kontaminasi.
• Gunakan kode batang 2D dan beri label pada botol– untuk memastikan keterlacakan, botol dengan area penulisan yang luas memungkinkan setiap botol diberi label yang memadai. Kode batang 2D dapat membantu manajemen penyimpanan dan pencatatan. Tutup botol dengan kode warna berguna untuk memudahkan identifikasi.
• Pemeliharaan penyimpanan yang memadai- Untuk memastikan sel tidak hilang, wadah penyimpanan harus terus memantau suhu dan tingkat nitrogen cair. Alarm harus dipasang untuk memperingatkan pengguna tentang kesalahan.

Tindakan pencegahan keamanan

Nitrogen cair telah menjadi praktik umum dalam penelitian modern tetapi mengandung risiko cedera serius jika digunakan secara tidak benar.

Peralatan pelindung diri (APD) yang tepat harus dikenakan untuk meminimalkan risiko radang dingin, luka bakar, dan insiden buruk lainnya saat menangani nitrogen cair.

• Sarung tangan kriogenik
• jas laboratorium
• Pelindung wajah penuh tahan benturan yang juga menutupi leher
• Sepatu tertutup
• Celemek plastik anti cipratan

Kulkas nitrogen cair harus ditempatkan di area yang berventilasi baik untuk meminimalkan risiko sesak napas – nitrogen yang keluar menguap dan menggantikan oksigen atmosfer. Penyimpanan dengan volume besar harus memiliki sistem alarm oksigen rendah.

Bekerja berpasangan saat menangani nitrogen cair sangatlah ideal dan penggunaannya di luar jam kerja normal harus dilarang.

Cryovial untuk Mendukung Alur Kerja Anda

Perusahaan Suzhou Ace Biomedical menawarkan berbagai pilihan produk yang memenuhi kebutuhan kriopreservasi Anda untuk berbagai jenis sel. Portofolionya mencakup berbagai tabung dan berbagai kriofor steril.

Kriovial kami adalah:

• Tutup Sekrup Laboratorium 0,5mL 1,5mL 2,0mL Botol Kriogenik Kriovial dengan Dasar Kerucut dan Gasket

  ● Spesifikasi 0,5ml, 1,5ml, 2,0ml, dengan rok atau tanpa rok
  ● Desain kerucut atau berdiri sendiri, steril atau non-steril keduanya tersedia
  ● Tabung tutup ulir terbuat dari polipropilena kelas medis
  ● Botol Cryotube PP dapat dibekukan dan dicairkan berulang kali
  ●Desain tutup eksternal dapat mengurangi kemungkinan kontaminasi selama perawatan sampel.
  ● Tutup sekrup tabung kriogenik Ulir sekrup universal untuk digunakan
  ● Tabung cocok dengan rotor paling umum
  ● Tabung o-ring tabung kriogenik cocok untuk kotak pembeku standar 1 inci dan 2 inci, 48 sumur, 81 sumur, 96 sumur, dan 100 sumur
  ● Dapat diautoklaf hingga 121°C dan dapat dibekukan hingga -86°C

  BAGIAN NO	BAHAN	VOLUME	TOPIWARNA	komputer/TAS	TAS/KOTAK
  TINDAKAN05-BL-N	PP	0,5 ml	Hitam, Kuning, Biru, Merah, Ungu, Putih	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1,5 ml	Hitam, Kuning, Biru, Merah, Ungu, Putih	500	10
  ACT15-BL-BARAT LAUT	PP	1,5 ml	Hitam, Kuning, Biru, Merah, Ungu, Putih	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Hitam, Kuning, Biru, Merah, Ungu, Putih	500	10