cryovialsइनका उपयोग आमतौर पर तरल नाइट्रोजन से भरे डिवार्स में कोशिका रेखाओं और अन्य महत्वपूर्ण जैविक सामग्रियों के क्रायोजेनिक भंडारण के लिए किया जाता है।

तरल नाइट्रोजन में कोशिकाओं के सफल संरक्षण में कई चरण शामिल हैं। जबकि मूल सिद्धांत धीमी गति से जमना है, इस्तेमाल की जाने वाली सटीक तकनीक कोशिका के प्रकार और इस्तेमाल किए गए क्रायोप्रोटेक्टेंट पर निर्भर करती है। ऐसे कम तापमान पर कोशिकाओं को संग्रहीत करते समय कई सुरक्षा संबंधी विचार और सर्वोत्तम अभ्यासों को ध्यान में रखना चाहिए।

इस पोस्ट का उद्देश्य यह बताना है कि क्रायोवायल को तरल नाइट्रोजन में किस प्रकार संग्रहित किया जाता है।

क्रायोवायल क्या हैं?

क्रायोवियल्स छोटी, ढक्कन वाली शीशियाँ होती हैं जिन्हें बेहद कम तापमान पर तरल नमूनों को संग्रहीत करने के लिए डिज़ाइन किया गया है। वे सुनिश्चित करते हैं कि क्रायोप्रोटेक्टेंट में संरक्षित कोशिकाएँ तरल नाइट्रोजन के सीधे संपर्क में न आएं, जिससे सेलुलर फ्रैक्चर का जोखिम कम हो जाता है और साथ ही तरल नाइट्रोजन के अत्यधिक शीतलन प्रभाव से भी लाभ मिलता है।

शीशियाँ आमतौर पर कई तरह के वॉल्यूम और डिज़ाइन में उपलब्ध होती हैं - वे अंदर या बाहर से चपटी या गोल तली वाली हो सकती हैं। बाँझ और गैर-बाँझ प्रारूप भी उपलब्ध हैं।

कौन उपयोग करता है?cryovialsकोशिकाओं को तरल नाइट्रोजन में संग्रहित करना

एनएचएस और निजी प्रयोगशालाओं की एक श्रृंखला, साथ ही गर्भनाल रक्त बैंकिंग, उपकला कोशिका जीव विज्ञान, प्रतिरक्षा विज्ञान और स्टेम कोशिका जीव विज्ञान में विशेषज्ञता वाले अनुसंधान संस्थान कोशिकाओं को क्रायोप्रिजर्व करने के लिए क्रायोवायल का उपयोग करते हैं।

इस तरह से संरक्षित कोशिकाओं में बी और टी कोशिकाएं, सीएचओ कोशिकाएं, हेमाटोपोइएटिक स्टेम और प्रोजेनिटर कोशिकाएं, हाइब्रिडोमा, आंत्र कोशिकाएं, मैक्रोफेज, मेसेनकाइमल स्टेम और प्रोजेनिटर कोशिकाएं, मोनोसाइट्स, मायलोमा, एनके कोशिकाएं और प्लुरिपोटेंट स्टेम कोशिकाएं शामिल हैं।

क्रायोवायल को लिक्विड नाइट्रोजन में कैसे स्टोर करें, इसका अवलोकन

क्रायोप्रिजर्वेशन एक ऐसी प्रक्रिया है जो कोशिकाओं और अन्य जैविक संरचनाओं को बहुत कम तापमान पर ठंडा करके संरक्षित करती है। कोशिकाओं को तरल नाइट्रोजन में सालों तक बिना कोशिका व्यवहार्यता खोए संग्रहीत किया जा सकता है। यह उपयोग की जाने वाली प्रक्रियाओं की एक रूपरेखा है।

सेल की तैयारी

नमूने तैयार करने की सटीक विधि कोशिका के प्रकार के आधार पर अलग-अलग होगी, लेकिन आम तौर पर, कोशिकाओं को एकत्र किया जाता है और सेल-समृद्ध गोली बनाने के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। फिर इस गोली को क्रायोप्रोटेक्टेंट या क्रायोप्रिजर्वेशन माध्यम के साथ मिश्रित सुपरनेटेंट में फिर से निलंबित कर दिया जाता है।

क्रायोप्रिजर्वेशन माध्यम

इस माध्यम का उपयोग कोशिकाओं को कम तापमान वाले वातावरण में संरक्षित करने के लिए किया जाता है, जिससे उन्हें इंट्रा और एक्स्ट्रासेलुलर क्रिस्टल के निर्माण को रोका जा सके और इस प्रकार कोशिका मृत्यु हो सकती है। उनकी भूमिका कोशिकाओं और ऊतकों को ठंड, भंडारण और विगलन प्रक्रियाओं के दौरान एक सुरक्षित, सुरक्षात्मक वातावरण प्रदान करना है।

ताजा जमे हुए प्लाज्मा (FFP), हेपरिनिज्ड प्लाज़्मालाइट घोल या सीरम-मुक्त, पशु घटक-मुक्त घोल जैसे माध्यम को डाइमिथाइल सल्फॉक्साइड (DMSO) या ग्लिसरॉल जैसे क्रायोप्रोटेक्टेंट्स के साथ मिलाया जाता है।

पुनः द्रवीकृत नमूना गोली को पॉलीप्रोपाइलीन क्रायोवायल में विभाजित किया जाता है जैसेसूज़ौ ऐस बायोमेडिकल कंपनी क्रायोजेनिक स्टोरेज शीशियाँ.

यह महत्वपूर्ण है कि क्रायोवियल को अधिक न भरें क्योंकि इससे टूटने और सामग्री के बाहर निकलने का खतरा बढ़ जाएगा (1)।

नियंत्रित हिमीकरण दर

सामान्यतः, कोशिकाओं के सफल क्रायोप्रिजर्वेशन के लिए धीमी नियंत्रित हिमीकरण दर का उपयोग किया जाता है।

नमूनों को क्रायोजेनिक शीशियों में डालने के बाद, उन्हें गीली बर्फ या 4 डिग्री सेल्सियस के रेफ्रिजरेटर में रखा जाता है और 5 मिनट के भीतर फ्रीजिंग प्रक्रिया शुरू कर दी जाती है। एक सामान्य गाइड के रूप में, कोशिकाओं को -1 से -3 प्रति मिनट (2) की दर से ठंडा किया जाता है। यह एक प्रोग्रामेबल कूलर का उपयोग करके या शीशियों को -70 डिग्री सेल्सियस से -90 डिग्री सेल्सियस नियंत्रित दर वाले फ्रीजर में रखे एक इंसुलेटेड बॉक्स में रखकर प्राप्त किया जाता है।

तरल नाइट्रोजन में स्थानांतरण

इसके बाद जमे हुए क्रायोजेनिक शीशियों को अनिश्चित अवधि के लिए तरल नाइट्रोजन टैंक में स्थानांतरित कर दिया जाता है, बशर्ते तापमान -135 डिग्री सेल्सियस से कम बनाए रखा जाए।

ये अति-निम्न तापमान तरल या वाष्प प्रावस्था नाइट्रोजन में डुबाकर प्राप्त किया जा सकता है।

द्रव या वाष्प चरण?

द्रव चरण नाइट्रोजन में भंडारण ठंडे तापमान को पूर्ण स्थिरता के साथ बनाए रखने के लिए जाना जाता है, लेकिन अक्सर निम्नलिखित कारणों से इसकी अनुशंसा नहीं की जाती है:

• तरल नाइट्रोजन की बड़ी मात्रा (गहराई) की आवश्यकता होती है जो एक संभावित खतरा है। इसके कारण जलने या दम घुटने का वास्तविक जोखिम है।
• एस्परगिलस, हेप बी जैसे संक्रामक एजेंटों द्वारा क्रॉस-संदूषण के प्रलेखित मामले और तरल नाइट्रोजन माध्यम के माध्यम से वायरल प्रसार (2,3)
• विसर्जन के दौरान तरल नाइट्रोजन के शीशियों में रिसाव की संभावना। जब भंडारण से निकाला जाता है और कमरे के तापमान पर गर्म किया जाता है, तो नाइट्रोजन तेजी से फैलता है। नतीजतन, तरल नाइट्रोजन भंडारण से निकाले जाने पर शीशी टूट सकती है, जिससे उड़ने वाले मलबे और सामग्री के संपर्क में आने का खतरा पैदा हो सकता है (1, 4)।

इन कारणों से, अल्ट्रा-लो तापमान भंडारण सबसे आम तौर पर वाष्प चरण नाइट्रोजन में होता है। जब नमूनों को तरल चरण में संग्रहित किया जाना चाहिए, तो विशेष क्रायोफ्लेक्स ट्यूबिंग का उपयोग किया जाना चाहिए।

वाष्प चरण का नकारात्मक पक्ष यह है कि एक ऊर्ध्वाधर तापमान प्रवणता हो सकती है जिसके परिणामस्वरूप -135 डिग्री सेल्सियस और -190 डिग्री सेल्सियस के बीच तापमान में उतार-चढ़ाव हो सकता है। इसके लिए तरल नाइट्रोजन के स्तर और तापमान भिन्नताओं की सावधानीपूर्वक और मेहनती निगरानी की आवश्यकता होती है (5)।

कई निर्माता यह सलाह देते हैं कि क्रायोवायल -135 डिग्री सेल्सियस तक भंडारण के लिए या केवल वाष्प अवस्था में उपयोग के लिए उपयुक्त हैं।

अपने क्रायोप्रिजर्व्ड कोशिकाओं को पिघलाना

जमे हुए कल्चर के लिए विगलन प्रक्रिया तनावपूर्ण होती है, और कोशिकाओं की इष्टतम व्यवहार्यता, पुनर्प्राप्ति और कार्यक्षमता सुनिश्चित करने के लिए उचित हैंडलिंग और तकनीक की आवश्यकता होती है। सटीक विगलन प्रोटोकॉल विशिष्ट कोशिका प्रकारों पर निर्भर करेगा। हालाँकि, तेजी से विगलन को मानक माना जाता है:

• सेलुलर रिकवरी पर किसी भी प्रभाव को कम करें
• हिमीकरण माध्यम में उपस्थित विलेय के संपर्क में आने के समय को कम करने में सहायता करें
• बर्फ के पुनःक्रिस्टलीकरण से होने वाली क्षति को न्यूनतम करना

नमूनों को पिघलाने के लिए आमतौर पर जल स्नान, मनका स्नान या विशेष स्वचालित उपकरणों का उपयोग किया जाता है।

सबसे अधिक बार एक बार में एक कोशिका लाइन को 1-2 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के पानी में धीरे-धीरे घुमाया जाता है, जब तक कि शीशी में थोड़ी सी बर्फ न रह जाए, उसके बाद उन्हें पहले से गरम विकास माध्यम में धोया जाता है।

स्तनधारी भ्रूण जैसी कुछ कोशिकाओं के लिए धीमी गति से गर्म होना उनके जीवित रहने के लिए आवश्यक है।

कोशिकाएं अब कोशिका संवर्धन, कोशिका पृथक्करण, या हेमेटोपोइटिक स्टेम कोशिकाओं के मामले में - मायेलोएबलेटिव थेरेपी से पहले दाता स्टेम कोशिकाओं की अखंडता की गारंटी के लिए व्यवहार्यता अध्ययन के लिए तैयार हैं।

संस्कृति में प्लेटिंग के लिए कोशिका सांद्रता निर्धारित करने के लिए कोशिका गणना करने के लिए उपयोग किए जाने वाले पहले से धोए गए नमूने के छोटे अंश लेना सामान्य अभ्यास है। फिर आप कोशिका पृथक्करण प्रक्रियाओं के परिणामों का आकलन कर सकते हैं और कोशिका व्यवहार्यता निर्धारित कर सकते हैं।

क्रायोवायल के भंडारण के लिए सर्वोत्तम अभ्यास

क्रायोवायल में संग्रहीत नमूनों का सफल क्रायोप्रिजर्वेशन प्रोटोकॉल के कई तत्वों पर निर्भर करता है, जिसमें उचित भंडारण और रिकॉर्ड रखना शामिल है।

• भंडारण स्थानों के बीच कोशिकाओं को विभाजित करें- यदि मात्रा अनुमति दे, तो कोशिकाओं को शीशियों के बीच विभाजित करें और उपकरण विफलताओं के कारण नमूना हानि के जोखिम को कम करने के लिए उन्हें अलग-अलग स्थानों पर संग्रहीत करें।
• क्रॉस-संदूषण को रोकें– अगले उपयोग से पहले एकल-उपयोग बाँझ क्रायोजेनिक शीशियों या आटोक्लेव का विकल्प चुनें
• अपनी कोशिकाओं के लिए उचित आकार की शीशियों का उपयोग करें- शीशियाँ 1 से 5 मिलीलीटर के बीच की मात्रा में आती हैं। टूटने के जोखिम को कम करने के लिए शीशियों को ज़्यादा भरने से बचें।
• आंतरिक या बाह्य थ्रेडेड क्रायोजेनिक शीशियों का चयन करें- सुरक्षा उपायों के लिए कुछ विश्वविद्यालयों द्वारा आंतरिक थ्रेडेड शीशियों की सिफारिश की जाती है - वे भरने के दौरान या तरल नाइट्रोजन में संग्रहीत होने पर संदूषण को भी रोक सकते हैं।
• रिसाव रोकें- रिसाव और संदूषण को रोकने के लिए स्क्रू-कैप या ओ-रिंग में ढाले गए द्वि-इंजेक्टेड सील का उपयोग करें।
• 2D बारकोड का उपयोग करें और शीशियों पर लेबल लगाएं- ट्रेसेबिलिटी सुनिश्चित करने के लिए, बड़े लेखन क्षेत्रों वाली शीशियों से प्रत्येक शीशी पर उचित लेबलिंग की जा सकती है। 2D बारकोड भंडारण प्रबंधन और रिकॉर्ड रखने में मदद कर सकते हैं। रंग कोडित कैप आसान पहचान के लिए उपयोगी हैं।
• पर्याप्त भंडारण रखरखाव- यह सुनिश्चित करने के लिए कि सेल नष्ट न हों, भंडारण बर्तनों को लगातार तापमान और तरल नाइट्रोजन के स्तर की निगरानी करनी चाहिए। त्रुटियों के बारे में उपयोगकर्ताओं को सचेत करने के लिए अलार्म लगाए जाने चाहिए।

सुरक्षा सावधानियां

आधुनिक अनुसंधान में तरल नाइट्रोजन का प्रयोग आम बात हो गई है, लेकिन यदि इसका गलत तरीके से प्रयोग किया जाए तो गंभीर क्षति का खतरा रहता है।

तरल नाइट्रोजन को संभालते समय शीतदंश, जलन और अन्य प्रतिकूल घटनाओं के जोखिम को कम करने के लिए उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (पीपीई) पहना जाना चाहिए।

• क्रायोजेनिक दस्ताने
• प्रयोगशाला कोट
• प्रभाव प्रतिरोधी पूर्ण चेहरा ढाल जो गर्दन को भी ढकती है
• बंद पैर के जूते
• स्पलैशप्रूफ प्लास्टिक एप्रन

लिक्विड नाइट्रोजन रेफ्रिजरेटर को अच्छी तरह हवादार क्षेत्रों में रखा जाना चाहिए ताकि श्वासावरोध के जोखिम को कम किया जा सके - बची हुई नाइट्रोजन वाष्पीकृत हो जाती है और वायुमंडलीय ऑक्सीजन को विस्थापित कर देती है। बड़े वॉल्यूम वाले स्टोर में कम ऑक्सीजन अलार्म सिस्टम होना चाहिए।

तरल नाइट्रोजन का उपयोग करते समय जोड़े में काम करना आदर्श है तथा सामान्य कार्य समय के अलावा इसका उपयोग वर्जित होना चाहिए।

आपके वर्कफ़्लो को सहायता देने के लिए क्रायोवायल्स

सूज़ौ ऐस बायोमेडिकल कंपनी ऐसे उत्पादों की एक विस्तृत श्रृंखला प्रदान करती है जो विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं के लिए आपकी क्रायोप्रिजर्वेशन आवश्यकताओं को पूरा करते हैं। पोर्टफोलियो में ट्यूबों की एक श्रृंखला के साथ-साथ स्टेराइल क्रायोवियल की एक श्रृंखला शामिल है।

हमारे क्रायोवायल हैं:

• लैब स्क्रू कैप 0.5mL 1.5mL 2.0mL क्रायोविअल क्रायोजेनिक शीशियाँ शंक्वाकार तल क्रायोट्यूब गैस्केट के साथ

  ● 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml विनिर्देश, स्कर्ट के साथ या स्कर्ट के बिना
  ● शंक्वाकार या स्वयं खड़े डिजाइन, बाँझ या गैर बाँझ दोनों उपलब्ध हैं
  ● स्क्रू कैप ट्यूब मेडिकल ग्रेड पॉलीप्रोपाइलीन से बने होते हैं
  ● पीपी क्रायोट्यूब शीशियों को बार-बार जमाया और पिघलाया जा सकता है
  ●बाहरी कैप डिज़ाइन नमूना उपचार के दौरान संदूषण की संभावना को कम कर सकता है।
  ● स्क्रू कैप क्रायोजेनिक ट्यूब उपयोग के लिए यूनिवर्सल स्क्रू थ्रेड
  ● ट्यूब सबसे आम रोटर्स में फिट होते हैं
  ● क्रायोजेनिक ट्यूब ओ-रिंग ट्यूब मानक 1-इंच और 2-इंच, 48वेल, 81वेल, 96वेल और 100वेल फ्रीजर बॉक्स में फिट होते हैं
  ● 121°C तक ऑटोक्लेव करने योग्य और -86°C तक फ़्रीज़ करने योग्य

  भाग संख्या	सामग्री	आयतन	टोपीरंग	पीसीएस/थैला	बैग/केस
  ACT05-बीएल-एन	PP	0.5एमएल	काला, पीला, नीला, लाल, बैंगनी, सफेद	500	10
  ACT15-बीएल-एन	PP	1.5एमएल	काला, पीला, नीला, लाल, बैंगनी, सफेद	500	10
  ACT15-बीएल-NW	PP	1.5एमएल	काला, पीला, नीला, लाल, बैंगनी, सफेद	500	10
  ACT20-बीएल-एन	PP	2.0एमएल	काला, पीला, नीला, लाल, बैंगनी, सफेद	500	10