Criobhiolanair an cleachdadh gu cumanta airson stòradh criogenach loidhnichean cealla agus stuthan bith-eòlasach èiginneach eile, ann an dewaran làn naitridean leaghaidh.

Tha grunn ìrean an sàs ann a bhith a’ gleidheadh ​​cheallan ann an naitridean leaghaidh gu soirbheachail. Ged is e reothadh slaodach am prionnsapal bunaiteach, tha an dòigh-obrach cheart a thathar a’ cleachdadh an urra ris an t-seòrsa cealla agus an dìonadair crio a thathar a’ cleachdadh. Tha grunn bheachdachaidhean sàbhailteachd agus deagh chleachdaidhean ri bheachdachadh nuair a thathar a’ stòradh cheallan aig teòthachd cho ìosal.

Tha an dreuchd seo ag amas air sealladh farsaing a thoirt seachad air mar a tha crio-bhiolagan air an stòradh ann an naitridean leaghaidh.

Dè a th’ ann an crio-bhiolagan

Is e crio-bhiolagan beaga le caip a th’ annta a chaidh a dhealbhadh airson sampallan leaghaidh a stòradh aig teòthachdan gu math ìosal. Bidh iad a’ dèanamh cinnteach nach tig ceallan a tha air an gleidheadh ​​ann an crio-dhìonadair an conaltradh dìreach ris an naitridean leaghaidh, a’ lughdachadh cunnart brisidhean cealla agus aig an aon àm a’ faighinn buannachd bhon bhuaidh fhuarachaidh anabarrach aig naitridean leaghaidh.

Mar as trice bidh na fiolan rim faighinn ann an raon de mheudan agus dhealbhaidhean – faodar an snàthadh a-staigh no a-muigh le bonn còmhnard no cruinn. Tha cruthan steirile agus neo-steirile rim faighinn cuideachd.

Cò a chleachdasCyrovialsgus ceallan a stòradh ann an naitridean leaghaidh

Bidh raon de dh’obair-lannan an NHS agus prìobhaideach, a bharrachd air ionadan rannsachaidh a tha gu sònraichte a’ dèiligeadh ri bancaichean fala corda, bith-eòlas cheallan epithelial, imdhun-eòlas agus bith-eòlas cheallan gas a’ cleachdadh crio-bhiolagan gus ceallan a chrio-ghleidheadh.

Am measg nan ceallan a tha air an gleidheadh ​​san dòigh seo tha ceallan B agus T, ceallan CHO, ceallan gas is ceallan tùsail hematopoietic, hybridomas, ceallan intestinal, macrophages, ceallan gas is ceallan tùsail mesenchymal, monocytes, myeloma, ceallan NK agus ceallan gas pluripotent.

Sealladh farsaing air mar a stòras tu crio-bhiolagan ann an naitridean leaghaidh

'S e pròiseas a th' ann an crio-ghlèidheadh ​​a bhios a' gleidheadh ​​cheallan agus structaran bith-eòlasach eile le bhith gan fuarachadh gu teòthachd glè ìosal. Faodar ceallan a stòradh ann an naitridean leaghaidh airson bhliadhnaichean gun chall beòthalachd cheallan. Seo geàrr-chunntas air na modhan-obrach a thathar a' cleachdadh.

Ullachadh Ceallan

Bidh an dòigh cheart airson sampallan ullachadh ag atharrachadh a rèir an t-seòrsa cealla, ach san fharsaingeachd, thèid na ceallan a chruinneachadh agus a chuir ann an inneal-snìomhachaidh gus peileat làn cheallan a leasachadh. An uairsin thèid am peileat seo ath-fhulang san t-supernatant measgaichte le crios-dìonadair no meadhan crios-ghlèidhidh.

Meadhan Crio-ghlèidhidh

Tha am meadhan seo air a chleachdadh gus ceallan a ghleidheadh ​​anns na h-àrainneachdan teòthachd ìosal ris am bi iad fosgailte le bhith a’ cur bacadh air cruthachadh chriostalan taobh a-staigh agus taobh a-muigh cealla agus mar sin bàs cheallan. ’S e an obair aca àrainneachd shàbhailte, dhìonach a thoirt do cheallan agus do fhigheagan rè na pròiseasan reothadh, stòraidh agus leaghadh.

Tha meadhan leithid plasma ùr reòta (FFP), fuasgladh plasmalyte heparinichte no fuasglaidhean gun serum, gun cho-phàirtean bheathaichean air a mheasgachadh le crioso-dhìonadairean leithid dimethyl sulphoxide (DMSO) no glycerol.

Tha am peileat sampall ath-leaghte air a roinn ann an crio-bhiolagan polypropylene leithidFiolan stòraidh criogenach companaidh bith-mheidigeach Suzhou Ace.

Tha e cudromach gun a bhith a’ lìonadh nan crio-bhiolagan ro mhòr oir meudaichidh seo an cunnart gun sgàin iad agus gun tèid an susbaint a leigeil ma sgaoil (1).

Ìre Reothadh Fo Smachd

San fharsaingeachd, thathar a’ cleachdadh ìre reòta slaodach fo smachd airson crio-ghleidheadh ​​cheallan gu soirbheachail.

Às dèidh do na sampallan a bhith air an roinn ann am fiolan criogenach, thèid an cur air deigh fhliuch no ann am frids 4℃ agus thèid am modh-obrach reothadh a thòiseachadh taobh a-staigh 5 mionaidean. Mar stiùireadh coitcheann, thèid ceallan a fhuarachadh aig ìre de -1 gu -3 gach mionaid (2). Coileanar seo le bhith a’ cleachdadh fuaradair prògramaichte no le bhith a’ cur fiolan ann am bogsa inslithe a tha air a chur ann an reothadair aig ìre fo smachd –70°C gu –90°C.

Gluasad gu naitridean leaghaidh

Thèid na fiolan criogenach reòta an uair sin a ghluasad gu tanca naitridean leaghaidh airson ùine neo-chinnteach fhad ‘s a thèid teòthachd nas ìsle na -135 ℃ a chumail suas.

Gheibhear na teòthachdan fìor ìosal seo le bhith gan bogadh ann an naitridean ann an ìre leaghaidh no smùid.

Ìre leaghaidh no ceò?

Tha fios gu bheil stòradh ann an naitridean ìre leaghaidh a’ cumail suas an teòthachd fhuar le cunbhalachd iomlan, ach gu tric chan eilear ga mholadh airson nan adhbharan a leanas:

• Tha feum air meudan mòra (doimhneachd) de naitridean leaghaidh a dh’ fhaodadh a bhith na chunnart. Tha losgadh no tachdadh mar thoradh air seo na chunnart mòr.
• Cùisean clàraichte de thar-thruailleadh le riochdairean gabhaltach leithid aspergillus, hep B agus sgaoileadh bhìorasach tron ​​mheadhan naitridean leaghaidh (2,3)
• Comas gum bi naitridean leaghaidh a’ leigeil a-steach do na fiolan nuair a thèid an bogadh. Nuair a thèid an toirt a-mach às an stòradh agus an teasachadh gu teòthachd an t-seòmair, bidh an naitridean a’ leudachadh gu luath. Mar thoradh air an sin, faodaidh am fiol briseadh nuair a thèid a thoirt a-mach às an stòradh naitridean leaghaidh, a’ cruthachadh cunnart bho sprùilleach itealaich agus nochdadh don t-susbaint (1, 4).

Air na h-adhbharan sin, mar as trice bidh stòradh aig teòthachd anabarrach ìosal ann an naitridean ìre smùide. Nuair a dh’fheumar sampallan a stòradh san ìre leaghaidh, bu chòir tiùban crioflex sònraichte a chleachdadh.

Is e an taobh àicheil den ìre smùide gum faod caisead teòthachd dìreach tachairt agus mar thoradh air sin bidh atharrachaidhean teòthachd eadar -135℃ agus -190℃ ann. Tha seo ag iarraidh sgrùdadh cùramach agus dìcheallach air ìrean naitridean leaghaidh agus atharrachaidhean teòthachd (5).

Tha mòran de luchd-saothrachaidh a’ moladh gu bheil crio-bhiolagan freagarrach airson stòradh sìos gu -135 ℃ no airson an cleachdadh anns an ìre smùide a-mhàin.

A’ leaghadh do cheallan crio-ghlèidhte

Tha am pròiseas leaghadh cuideam mòr airson cultar reòta, agus feumar làimhseachadh agus dòigh-obrach cheart gus dèanamh cinnteach à seasmhachd, ath-bheothachadh agus gnìomhachd as fheàrr nan ceallan. Bidh na protocolaidhean leaghadh mionaideach an urra ri seòrsachan cealla sònraichte. Ach, thathas den bheachd gu bheil leaghadh luath àbhaisteach airson:

• Lùghdaich buaidh sam bith air ath-bheothachadh ceallach
• Cuidich le bhith a’ lughdachadh na h-ùine nochdaidh do na stuthan soluichte a tha an làthair anns na meadhanan reòta
• Lùghdaich milleadh sam bith le ath-chriostalachadh deighe

Bithear a’ cleachdadh amaran-uisge, amaran-grìogagan, no innealan fèin-ghluasadach sònraichte gu cumanta airson sampallan a leaghadh.

Mar as trice, thèid 1 loidhne chealla a leaghadh aig aon àm airson 1-2 mhionaid, le bhith gan tionndadh gu socair ann an amar-uisge 37℃ gus am bi dìreach beagan deigh air fhàgail anns a’ bhial mus tèid an nighe ann am meadhan fàis ro-theth.

Airson cuid de cheallan leithid embryos mamalan, tha blàthachadh slaodach riatanach airson am mairsinn.

Tha na ceallan a-nis deiseil airson cultar cealla, dealachadh cheallan, no a thaobh cheallan gas haematopoietic – sgrùdaidhean comasachd gus ionracas nan ceallan gas tabhartais a ghealltainn mus tèid leigheas myeloablative a dhèanamh.

’S e cleachdadh àbhaisteach a th’ ann earrannan beaga den sampall ro-nighe a chleachdadh gus cunntadh cheallan a dhèanamh gus dùmhlachd cheallan a dhearbhadh airson an cur ann an cultar. Faodaidh tu an uairsin measadh a dhèanamh air toraidhean nan dòighean-obrach airson aonaranachd cheallan agus comas-beò cheallan a dhearbhadh.

Cleachdaidhean as Fheàrr airson Stòradh Criobhiolan

Tha soirbheachas crio-ghleidheadh ​​shamhlaichean a tha air an stòradh ann an crio-bhiolagan an urra ri mòran eileamaidean sa phròtacal, a’ gabhail a-steach stòradh ceart agus gleidheadh ​​chlàran.

• Roinn ceallan eadar àiteachan stòraidh– Ma leigeas na meudan leis, roinn na ceallan eadar fiolan agus stòraich iad ann an àiteachan eadar-dhealaichte gus cunnart call sampall air sgàth fàilligidhean uidheamachd a lùghdachadh.
• Casg a chur air tar-thruailleadh– Tagh fiolan criogenach sterile aon-chleachdaidh no autoclave mus tèid an cleachdadh às dèidh sin
• Cleachd fiolan de mheud iomchaidh airson do cheallan– thig fiolan ann an raon de mheudan eadar 1 agus 5ml. Seachain cus fiolan a lìonadh gus cunnart sgàineadh a lùghdachadh.
• Tagh fiolan criogenach le snàthadh a-staigh no a-muigh– Tha cuid de oilthighean a’ moladh bhiolan le snàthadh a-staigh airson ceumannan sàbhailteachd – faodaidh iad cuideachd casg a chuir air truailleadh nuair a thathar gan lìonadh no nuair a thèid an stòradh anns an naitridean leaghaidh.
• Casg a chur air aodion- Cleachd ròin dà-stealladh air an cumadh a-steach don chaip-sriubha no na fàinneachan-O gus casg a chuir air aodion agus truailleadh.
• Cleachd còdan-barra 2D agus bileagan-fiolan– gus dèanamh cinnteach gum faodar lorg a dhèanamh orra, leigidh fiolan le raointean sgrìobhaidh mòra le gach fiol a bhith air a chomharrachadh gu ceart. Faodaidh còdan-barra 2D cuideachadh le riaghladh stòraidh agus gleidheadh ​​chlàran. Tha ceapan le còd dath feumail airson aithneachadh nas fhasa.
• Cumail suas stòraidh iomchaidh- Gus dèanamh cinnteach nach tèid ceallan a chall, bu chòir do shoithichean stòraidh sùil a chumail air an teòthachd agus ìrean naitridean leaghaidh gu cunbhalach. Bu chòir innealan-rabhaidh a bhith air an cur a-steach gus rabhadh a thoirt do luchd-cleachdaidh mu mhearachdan.

Rabhaidhean Sàbhailteachd

Tha naitridean leaghaidh air a bhith cumanta ann an rannsachadh an latha an-diugh ach tha cunnart ann gun tèid droch leòn a dhèanamh dheth ma thèid a chleachdadh gu ceàrr.

Bu chòir uidheam dìon pearsanta (PPE) ceart a chaitheamh gus cunnart reothadh, losgadh agus tachartasan àicheil eile a lughdachadh nuair a thathar a’ làimhseachadh naitridean leaghaidh.

• miotagan criogenach
• Còta obair-lann
• Sgiath aghaidh làn-sheasmhach a tha an aghaidh buaidh agus a tha cuideachd a’ còmhdach amhach
• Brògan dùinte
• Apron plastaig dìon-frasaidh

Bu chòir fridsichean le naitridean leaghte a chur ann an àiteachan le deagh fhionnarachadh gus cunnart tachdadh a lughdachadh – bidh naitridean a tha a’ teicheadh ​​a’ ceòthachadh agus a’ gluasad ocsaidean àile. Bu chòir siostaman rabhaidh ocsaidean ìosal a bhith aig stòran mòra.

Tha e air leth freagarrach a bhith ag obair ann an càraidean nuair a thathar a’ làimhseachadh naitridean leaghaidh agus bu chòir a chleachdadh taobh a-muigh uairean obrach àbhaisteach a thoirmeasg.

Crio-bhiolagan gus taic a thoirt don t-sruth-obrach agad

Tha companaidh Suzhou Ace Biomedical a’ tabhann taghadh farsaing de thoraidhean a choinnicheas ri na feumalachdan crio-ghlèidhidh agad airson diofar sheòrsaichean cheallan. Tha raon de thiùban agus crio-bhiolagan steirile nam pàirt den phasgan.

Is iad na crio-bhiolagan againn:

• Caip Sgriubha Lab 0.5mL 1.5mL 2.0mL Fiolan Criogenach Criobhiach le Bonn Cònach agus Gasgaid

  ● Sònrachadh 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml, le sgiort no às aonais sgiort
  ● Tha dealbhadh cònail no fèin-sheasmhach, sterile no neo-sterile rim faighinn
  ● Tha tiùban caip sgriubha air an dèanamh de polypropylene ìre meidigeach
  ● Faodar fiolan criotùb PP a reothadh agus a leaghadh a-rithist is a-rithist
  ●Faodaidh dealbhadh a’ chaip a-muigh cothrom truailleadh a lùghdachadh rè làimhseachadh sampall.
  ● Tiùban criogenach le caip sgriubha Snàithleanan sgriubha uile-choitcheann airson an cleachdadh
  ● Bidh na tiùban a’ freagairt air na rotors as cumanta
  ● Bidh tiùban fàinne-o tiùb criogenach a’ freagairt air bogsaichean reothadair àbhaisteach 1-òirleach agus 2-òirleach, 48 tobar, 81 tobar, 96 tobar agus 100 tobar
  ● Faodar a chleachdadh san fhèithean-fèin-ghlèidhidh gu 121°C agus faodar a reothadh gu -86°C

  ÀIREAMH NA PÀIRT	STUTH	LEABHAR	CAPDATH	PCS/POCA	POCANNAN/CÙIS
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Dubh, Buidhe, Gorm, Dearg, Purpaidh, Geal	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Dubh, Buidhe, Gorm, Dearg, Purpaidh, Geal	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Dubh, Buidhe, Gorm, Dearg, Purpaidh, Geal	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Dubh, Buidhe, Gorm, Dearg, Purpaidh, Geal	500	10