Criofialesò cumunemente aduprati per u almacenamentu criogenicu di linee cellulari è altri materiali biologichi critichi, in dewar pieni di azotu liquidu.

Ci sò parechje tappe implicate in a preservazione riescita di e cellule in azotu liquidu. Mentre u principiu basicu hè una congelazione lenta, a tecnica esatta impiegata dipende da u tipu di cellula è da u crioprotettore utilizatu. Ci sò parechje cunsiderazioni di sicurezza è migliori pratiche da tene in contu quandu si conservanu e cellule à temperature cusì basse.

Questu articulu hà per scopu di dà una panoramica di cumu i crioviali sò almacenati in azotu liquidu.

Chì sò i crioviali

I crioviali sò picculi flaconi cù tappi, cuncepiti per almacenà campioni liquidi à temperature estremamente basse. Assicuranu chì e cellule cunservate in crioprotettore ùn entrinu micca in cuntattu direttu cù l'azotu liquidu, minimizendu u risicu di fratture cellulari pur prufittendu di l'effettu di raffreddamentu estremu di l'azotu liquidu.

I fiale sò generalmente dispunibili in una varietà di volumi è disinni - ponu esse filettati internamente o esternamente cù fondi piatti o arrotondati. Sò ancu dispunibili furmati sterili è micca sterili.

Quale usaCyrovialsper almacenà e cellule in azotu liquidu

Una varietà di laboratorii NHS è privati, è ancu istituzioni di ricerca specializate in a banca di sangue di u cordone umbilicale, a biologia di e cellule epiteliali, l'immunologia è a biologia di e cellule staminali utilizanu criofiale per crioconservà e cellule.

E cellule cunservate in questu modu includenu cellule B è T, cellule CHO, cellule staminali è progenitrici ematopoietiche, ibridomi, cellule intestinali, macrofagi, cellule staminali è progenitrici mesenchimali, monociti, mieloma, cellule NK è cellule staminali pluripotenti.

Panoramica di cumu cunservà i crioviali in azotu liquidu

A crioconservazione hè un prucessu chì cunserva e cellule è altre custruzzioni biologiche raffreddendule à temperature assai basse. E cellule ponu esse conservate in azotu liquidu per anni senza perdita di viabilità cellulare. Questu hè un schema di e procedure impiegate.

Preparazione di e Cellule

U metudu esattu per preparà i campioni varierà secondu u tipu di cellula, ma in generale, e cellule sò raccolte è centrifugate per sviluppà un pellet riccu di cellule. Stu pellet hè tandu risospesu in u surnatante mischiatu cù crioprotettore o un mezu di crioconservazione.

Mediu di crioconservazione

Stu mezu hè adupratu per priservà e cellule in l'ambienti à bassa temperatura à i quali saranu sottumesse, inibendu a furmazione di cristalli intra è extracellulari è dunque a morte cellulare. U so rolu hè di furnisce un ambiente sicuru è prutettivu per e cellule è i tessuti durante i prucessi di congelazione, almacenamentu è scongelamentu.

Un mezu cum'è u plasma frescu congelatu (FFP), una suluzione di plasmaliti eparinizata o suluzioni senza serumu è senza cumpunenti animali hè mischiatu cù crioprotettori cum'è u dimetilsulfossido (DMSO) o u glicerolu.

U pellet di campione ri-liquidificatu hè aliquotatu in crioviali di polipropilene cum'èFiale di almacenamiento criogenicu di a cumpagnia biomedica Suzhou Ace.

Hè impurtante di ùn riempie micca troppu i crioviali perchè questu aumenterà u risicu di crepe è a pussibile liberazione di u cuntenutu (1).

Velocità di congelazione cuntrullata

In generale, una velocità di congelazione lenta è cuntrullata hè impiegata per a crioconservazione riescita di e cellule.

Dopu chì i campioni sò aliquotati in fiale criogeniche, sò posti nantu à ghiaccio umitu o in un frigorifero à 4 ℃ è a prucedura di congelazione hè iniziata in 5 minuti. Cum'è guida generale, e cellule sò raffreddate à una velocità da -1 à -3 per minutu (2). Questu hè ottenutu aduprendu un raffreddore programmabile o piazzendu e fiale in una scatula isolata posta in un congelatore à velocità cuntrullata da -70 °C à -90 °C.

Trasferimentu à l'azotu liquidu

I flaconi criogenici congelati sò poi trasferiti in un serbatoiu d'azotu liquidu per periodi indefiniti, à cundizione chì sia mantenuta una temperatura inferiore à -135 ℃.

Queste temperature ultra-basse ponu esse ottenute per immersione in l'azotu in fase liquida o vapore.

Fase liquida o di vapore?

U almacenamentu in azotu in fase liquida hè cunnisciutu per mantene a temperatura fredda cù una consistenza assoluta, ma spessu ùn hè micca cunsigliatu per e seguenti ragioni:

• U bisognu di grandi volumi (prufundità) d'azotu liquidu chì hè un periculu putenziale. E brusgiature o l'asfissia per via di questu sò un risicu reale.
• Casi documentati di contaminazione incrociata da agenti infettivi cum'è aspergillus, hep B è diffusione virale via u mezu d'azotu liquidu (2,3)
• U putenziale di fuga di azotu liquidu in i flaconi durante l'immersione. Quandu hè cacciatu da u almacenamentu è riscaldatu à temperatura ambiente, l'azotu si espande rapidamente. Di cunsiguenza, u flacone pò rompe si quandu hè cacciatu da u almacenamentu di azotu liquidu, creendu un periculu sia da i detriti volanti sia da l'esposizione à u cuntenutu (1, 4).

Per queste ragioni, u almacenamentu à temperatura ultra bassa hè più cumunimenti in azotu in fase vapore. Quandu i campioni devenu esse almacenati in fase liquida, devenu esse aduprati tubi crioflex specializati.

L'inconveniente di a fase vapore hè chì pò accade un gradiente di temperatura verticale chì provoca fluttuazioni di temperatura trà -135 ℃ è -190 ℃. Questu richiede un monitoraghju attentu è diligente di i livelli di azotu liquidu è di e variazioni di temperatura (5).

Parechji pruduttori ricumandenu chì i crioviali sianu adatti per a conservazione finu à -135 ℃ o per l'usu solu in fase di vapore.

Scongelamentu di e vostre cellule crioconservate

A prucedura di scongelamentu hè stressante per una cultura congelata, è una manipulazione è una tecnica adatte sò necessarie per assicurà a viabilità, a ricuperazione è a funzionalità ottimali di e cellule. I protokolli di scongelamentu esatti dependeranu da i tipi specifici di cellule. Tuttavia, u scongelamentu rapidu hè cunsideratu standard per:

• Diminuisce ogni impattu nantu à a ripresa cellulare
• Aiutà à riduce u tempu d'esposizione à i suluti prisenti in i mezi di congelazione
• Minimizà ogni dannu per via di a ricristallizazione di u ghjacciu

I bagni d'acqua, i bagni di perle, o strumenti automatizati specializati sò cumunimenti usati per scongelare i campioni.

Più spessu, 1 linea cellulare hè scongelata à a volta per 1-2 minuti, girandula delicatamente in un bagnu d'acqua à 37 ℃ finu à chì ci sia solu un pocu di ghiaccio in a fiala prima di esse lavate in un mezu di crescita preriscaldatu.

Per alcune cellule cum'è l'embrioni di mammiferi, un riscaldamentu lentu hè essenziale per a so sopravvivenza.

E cellule sò avà pronte per a cultura cellulare, l'isolamentu cellulare, o in u casu di e cellule staminali ematopoietiche - studii di viabilità per guarantisce l'integrità di e cellule staminali di u donatore prima di a terapia mieloablativa.

Hè nurmale piglià piccule aliquote di u campione prelavatu utilizatu per fà un contu cellulare per determinà e concentrazioni cellulari per a piastratura in cultura. Pudete tandu valutà i risultati di e procedure d'isolamentu cellulare è determinà a viabilità cellulare.

E migliori pratiche per a conservazione di crioviali

A crioconservazione riescita di i campioni almacenati in criofiale dipende da parechji elementi di u protocolu, cumpresi un almacenamentu adattatu è a tenuta di registri.

• Divide e cellule trà i lochi di almacenamentu– Sè i vulumi u permettenu, dividite e cellule trà i fiale è conservatele in lochi separati per riduce u risicu di perdita di campioni per via di guasti di l'attrezzatura.
• Prevenisce a contaminazione incruciata– Optate per fiale criogeniche sterili monouso o autoclave prima di l'usu successivu
• Aduprate fiale di dimensioni adatte per e vostre cellule– i fiale sò dispunibili in una gamma di vulumi trà 1 è 5 ml. Evitate di riempie troppu i fiale per riduce u risicu di crepe.
• Selezziunate fiale criogeniche cù filettatura interna o esterna– E fiale cù filettatura interna sò cunsigliate da alcune università per misure di sicurezza - ponu ancu impedisce a contaminazione durante u riempimentu o quandu sò almacenate in l'azotu liquidu.
• Prevenisce e perdite- Aduprate guarnizioni bi-iniettate stampate in u tappu à vite o in l'O-rings per impedisce perdite è contaminazione.
• Aduprate codici à barre 2D è etichettate e fiale– per assicurà a tracciabilità, i flaconi cù grandi superfici di scrittura permettenu di etichettà adeguatamente ogni flacone. I codici à barre 2D ponu aiutà cù a gestione di u almacenamentu è a tenuta di registri. I tappi codificati per culore sò utili per una identificazione più faciule.
• Mantenimentu di almacenamentu adeguatu- Per assicurà chì e cellule ùn sianu micca perse, i recipienti di almacenamentu devenu monitorà constantemente a temperatura è i livelli di azotu liquidu. L'allarmi devenu esse installati per avvisà l'utilizatori di l'errori.

Precauzioni di sicurezza

L'azotu liquidu hè diventatu una pratica cumuna in a ricerca muderna, ma porta u risicu di ferite gravi s'ellu hè adupratu in modu incorrectu.

L'equipaggiu di prutezzione individuale (PPE) adattatu deve esse purtatu per minimizà u risicu di congelamentu, brusgiature è altri incidenti avversi quandu si manipula l'azotu liquidu.

• Guanti criogenichi
• Camicia di laburatoriu
• Visiera cumpleta resistente à l'impattu chì copre ancu u collu
• Scarpe chjuse
• Grembiule di plastica resistente à l'acqua

I frigoriferi à azotu liquidu devenu esse piazzati in zone ben ventilate per minimizà u risicu d'asfissia - l'azotu scappatu si vaporizza è spiazza l'ossigenu atmosfericu. I magazzini di grande vulume devenu avè sistemi d'allarme per bassu ossigenu.

U travagliu in coppia quandu si manipula l'azotu liquidu hè ideale è u so usu fora di l'ore di travagliu nurmali deve esse pruibitu.

Criofiale per sustene u vostru flussu di travagliu

A cumpagnia Suzhou Ace Biomedical offre una larga selezzione di prudutti chì rispondenu à i vostri bisogni di crioconservazione per diversi tipi di cellule. U portafogliu include una gamma di tubi è ancu una gamma di criovial sterili.

I nostri crioviali sò:

• Tappu à vite di laburatoriu 0,5 ml 1,5 ml 2,0 ml Fiale criogeniche Criotubu à fondu cònicu cù guarnizione

  ● Specificazione 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml, cù gonna o senza gonna
  ● Design cònicu o autoportante, sterile o micca sterile sò tramindui dispunibili
  ● I tubi cù tappu à vite sò fatti di polipropilene di qualità medica
  ● I flaconi di criotubi in PP ponu esse congelati è scongelati ripetutamente
  ● U cuncepimentu di u tappu esternu pò riduce a probabilità di contaminazione durante u trattamentu di u campione.
  ● Tubi criogenici cù tappu à vite Filettatura di vite universale per l'usu
  ● I tubi si adattanu à a maiò parte di i rotori cumuni
  ● I tubi criogenichi cù o-ring sò adatti à scatule di congelatore standard da 1 pollice è 2 pollici, 48 pozzetti, 81 pozzetti, 96 pozzetti è 100 pozzetti
  ● Autoclavabile finu à 121 °C è congelatibile finu à -86 °C

  N° DI PEZZA	MATERIALE	VOLUME	CAPCULORE	PCS/SACCU	SACCHETTI/CUSTODIE
  ACT05-BL-N	PP	0,5 ML	Neru, Giallu, Blu, Rossu, Viola, Biancu	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1,5 ml	Neru, Giallu, Blu, Rossu, Viola, Biancu	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1,5 ml	Neru, Giallu, Blu, Rossu, Viola, Biancu	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2,0 ML	Neru, Giallu, Blu, Rossu, Viola, Biancu	500	10