క్రయోవియల్స్ద్రవ నైట్రోజన్‌తో నిండిన దేవార్‌లలో, కణ తంతువులు మరియు ఇతర కీలకమైన జీవ పదార్థాల క్రయోజెనిక్ నిల్వ కోసం సాధారణంగా ఉపయోగిస్తారు.

ద్రవ నైట్రోజన్‌లో కణాల విజయవంతమైన సంరక్షణలో అనేక దశలు ఉంటాయి. ప్రాథమిక సూత్రం నెమ్మదిగా స్తంభింపజేయడం అయినప్పటికీ, ఉపయోగించే ఖచ్చితమైన సాంకేతికత సెల్ రకం మరియు ఉపయోగించిన క్రయోప్రొటెక్టెంట్‌పై ఆధారపడి ఉంటుంది. అటువంటి తక్కువ ఉష్ణోగ్రతల వద్ద కణాలను నిల్వ చేసేటప్పుడు పరిగణనలోకి తీసుకోవలసిన అనేక భద్రతా పరిగణనలు మరియు ఉత్తమ పద్ధతులు ఉన్నాయి.

ఈ పోస్ట్ క్రయోవియల్స్ ద్రవ నైట్రోజన్‌లో ఎలా నిల్వ చేయబడతాయో ఒక అవలోకనం ఇవ్వడం లక్ష్యంగా పెట్టుకుంది.

క్రయోవియల్స్ అంటే ఏమిటి?

క్రయోవియల్స్ అనేవి చాలా తక్కువ ఉష్ణోగ్రతల వద్ద ద్రవ నమూనాలను నిల్వ చేయడానికి రూపొందించబడిన చిన్న, మూత కలిగిన వయల్స్. క్రయోప్రొటెక్టెంట్‌లో భద్రపరచబడిన కణాలు ద్రవ నైట్రోజన్‌తో ప్రత్యక్ష సంబంధంలోకి రాకుండా చూసుకుంటాయి, ద్రవ నైట్రోజన్ యొక్క తీవ్ర శీతలీకరణ ప్రభావం నుండి ప్రయోజనం పొందుతూనే సెల్యులార్ పగుళ్ల ప్రమాదాన్ని తగ్గిస్తాయి.

ఈ వయల్స్ సాధారణంగా వివిధ పరిమాణాలు మరియు డిజైన్లలో లభిస్తాయి - వీటిని అంతర్గతంగా లేదా బాహ్యంగా ఫ్లాట్ లేదా గుండ్రని బాటమ్‌లతో థ్రెడ్ చేయవచ్చు. స్టెరైల్ మరియు నాన్-స్టెరైల్ ఫార్మాట్‌లు కూడా అందుబాటులో ఉన్నాయి.

ఎవరు ఉపయోగిస్తారుసైరోవియల్స్కణాలను ద్రవ నత్రజనిలో నిల్వ చేయడానికి

NHS మరియు ప్రైవేట్ ప్రయోగశాలల శ్రేణి, అలాగే త్రాడు రక్త బ్యాంకింగ్, ఎపిథీలియల్ సెల్ బయాలజీ, ఇమ్యునాలజీ మరియు స్టెమ్ సెల్ బయాలజీలో ప్రత్యేకత కలిగిన పరిశోధనా సంస్థలు కణాలను క్రయోప్రెజర్వ్ చేయడానికి క్రయోవియల్‌లను ఉపయోగిస్తాయి.

ఈ విధంగా సంరక్షించబడిన కణాలలో B మరియు T కణాలు, CHO కణాలు, హెమటోపోయిటిక్ స్టెమ్ మరియు ప్రొజెనిటర్ కణాలు, హైబ్రిడోమాలు, పేగు కణాలు, మాక్రోఫేజెస్, మెసెన్‌కైమల్ స్టెమ్ మరియు ప్రొజెనిటర్ కణాలు, మోనోసైట్లు, మైలోమా, NK కణాలు మరియు ప్లూరిపోటెంట్ స్టెమ్ కణాలు ఉన్నాయి.

లిక్విడ్ నైట్రోజన్‌లో క్రయోవియల్స్‌ను ఎలా నిల్వ చేయాలో అవలోకనం

క్రయోప్రెజర్వేషన్ అనేది కణాలను మరియు ఇతర జీవ నిర్మాణాలను చాలా తక్కువ ఉష్ణోగ్రతలకు చల్లబరచడం ద్వారా సంరక్షించే ప్రక్రియ. కణాల సాధ్యతను కోల్పోకుండా కణాలను ద్రవ నత్రజనిలో సంవత్సరాల తరబడి నిల్వ చేయవచ్చు. ఇది ఉపయోగించే విధానాల రూపురేఖలు.

సెల్ తయారీ

నమూనాలను తయారు చేయడానికి ఖచ్చితమైన పద్ధతి కణ రకాన్ని బట్టి మారుతుంది, కానీ సాధారణంగా, కణాలను సేకరించి సెంట్రిఫ్యూజ్ చేసి కణ-సమృద్ధ గుళికను అభివృద్ధి చేస్తారు. ఈ గుళికను క్రయోప్రొటెక్టెంట్ లేదా క్రియోప్రెజర్వేషన్ మాధ్యమంతో కలిపిన సూపర్‌నాటెంట్‌లో తిరిగి అమర్చుతారు.

క్రయోప్రెజర్వేషన్ మీడియం

ఈ మాధ్యమం తక్కువ-ఉష్ణోగ్రత వాతావరణంలో కణాలను సంరక్షించడానికి ఉపయోగించబడుతుంది, అవి కణాంతర మరియు బాహ్య కణ స్ఫటికాలు ఏర్పడకుండా నిరోధించడం ద్వారా కణాల మరణాన్ని నిరోధిస్తాయి. ఘనీభవనం, నిల్వ మరియు ద్రవీభవన ప్రక్రియల సమయంలో కణాలు మరియు కణజాలాలకు సురక్షితమైన, రక్షణాత్మక వాతావరణాన్ని అందించడం వారి పాత్ర.

తాజాగా స్తంభింపచేసిన ప్లాస్మా (FFP), హెపారినైజ్డ్ ప్లాస్మాలైట్ ద్రావణం లేదా సీరం-రహిత, జంతు భాగాలు లేని ద్రావణాలు వంటి మాధ్యమాన్ని డైమిథైల్ సల్ఫాక్సైడ్ (DMSO) లేదా గ్లిసరాల్ వంటి క్రయోప్రొటెక్టెంట్లతో కలుపుతారు.

తిరిగి ద్రవీకరించబడిన నమూనా గుళికను పాలీప్రొఫైలిన్ క్రయోవియల్స్‌గా మారుస్తారు, ఉదాహరణకుసుజౌ ఏస్ బయోమెడికల్ కంపెనీ క్రయోజెనిక్ స్టోరేజ్ వైల్స్.

క్రయోవియల్స్‌ను ఎక్కువగా నింపకుండా ఉండటం ముఖ్యం ఎందుకంటే ఇది పగుళ్లు ఏర్పడే ప్రమాదాన్ని పెంచుతుంది మరియు కంటెంట్‌లు విడుదలయ్యే అవకాశం ఉంది (1).

నియంత్రిత ఫ్రీజ్ రేటు

సాధారణంగా, కణాల విజయవంతమైన క్రయోప్రెజర్వేషన్ కోసం నెమ్మదిగా నియంత్రిత ఫ్రీజ్ రేటు ఉపయోగించబడుతుంది.

నమూనాలను క్రయోజెనిక్ వయల్స్‌లోకి మార్చిన తర్వాత, వాటిని తడి మంచు మీద లేదా 4℃ రిఫ్రిజిరేటర్‌లో ఉంచుతారు మరియు 5 నిమిషాల్లో ఘనీభవన ప్రక్రియ ప్రారంభమవుతుంది. సాధారణ మార్గదర్శిగా, కణాలు నిమిషానికి -1 నుండి -3 చొప్పున చల్లబడతాయి (2). ప్రోగ్రామబుల్ కూలర్‌ను ఉపయోగించి లేదా –70°C నుండి –90°C నియంత్రిత రేటు ఫ్రీజర్‌లో ఉంచిన ఇన్సులేటెడ్ బాక్స్‌లో వయల్‌లను ఉంచడం ద్వారా దీనిని సాధించవచ్చు.

ద్రవ నత్రజనికి బదిలీ చేయండి

ఘనీభవించిన క్రయోజెనిక్ వయల్స్‌ను -135℃ కంటే తక్కువ ఉష్ణోగ్రత నిర్వహించబడే వరకు నిరవధిక కాలం పాటు ద్రవ నైట్రోజన్ ట్యాంకుకు బదిలీ చేస్తారు.

ఈ అతి తక్కువ ఉష్ణోగ్రతలను ద్రవ లేదా ఆవిరి దశ నైట్రోజన్‌లో ముంచడం ద్వారా పొందవచ్చు.

ద్రవ దశ లేదా ఆవిరి దశ?

ద్రవ దశ నైట్రోజన్‌లో నిల్వ చేయడం వలన చల్లని ఉష్ణోగ్రత సంపూర్ణ స్థిరత్వంతో నిర్వహించబడుతుంది, కానీ ఈ క్రింది కారణాల వల్ల తరచుగా సిఫార్సు చేయబడదు:

• ద్రవ నత్రజని యొక్క పెద్ద పరిమాణంలో (లోతు) అవసరం, ఇది సంభావ్య ప్రమాదం. దీని కారణంగా కాలిన గాయాలు లేదా ఊపిరాడకపోవడం నిజమైన ప్రమాదం.
• ఆస్పెర్‌గిల్లస్, హెప్ బి వంటి అంటువ్యాధి కారకాల ద్వారా క్రాస్-కాలుష్యం మరియు ద్రవ నత్రజని మాధ్యమం ద్వారా వైరల్ వ్యాప్తికి సంబంధించిన నమోదు చేయబడిన కేసులు (2,3)
• ద్రవ నత్రజని నిమజ్జనం సమయంలో కుండలలోకి లీక్ అయ్యే అవకాశం. నిల్వ నుండి తీసివేసి గది ఉష్ణోగ్రతకు వేడి చేసినప్పుడు, నత్రజని వేగంగా విస్తరిస్తుంది. పర్యవసానంగా, ద్రవ నత్రజని నిల్వ నుండి తీసివేసినప్పుడు కుండ పగిలిపోవచ్చు, ఎగిరే శిధిలాల నుండి మరియు పదార్థాలకు గురికావడం వలన ప్రమాదం ఏర్పడుతుంది (1, 4).

ఈ కారణాల వల్ల, అతి తక్కువ ఉష్ణోగ్రత నిల్వ సాధారణంగా ఆవిరి దశ నైట్రోజన్‌లో ఉంటుంది. నమూనాలను ద్రవ దశలో నిల్వ చేయాల్సి వచ్చినప్పుడు, ప్రత్యేకమైన క్రయోఫ్లెక్స్ గొట్టాలను ఉపయోగించాలి.

ఆవిరి దశకు ఉన్న ప్రతికూలత ఏమిటంటే, నిలువు ఉష్ణోగ్రత ప్రవణత సంభవించవచ్చు, దీని ఫలితంగా -135℃ మరియు -190℃ మధ్య ఉష్ణోగ్రత హెచ్చుతగ్గులు సంభవించవచ్చు. దీనికి ద్రవ నత్రజని స్థాయిలు మరియు ఉష్ణోగ్రత వైవిధ్యాలను జాగ్రత్తగా మరియు శ్రద్ధగా పర్యవేక్షించడం అవసరం (5).

చాలా మంది తయారీదారులు క్రయోవియల్స్ -135℃ వరకు నిల్వ చేయడానికి లేదా ఆవిరి దశలో మాత్రమే ఉపయోగించడానికి అనుకూలంగా ఉంటాయని సిఫార్సు చేస్తున్నారు.

మీ క్రయోప్రెజర్డ్ కణాలను కరిగించడం

ఘనీభవించిన సంస్కృతికి కరిగించే విధానం ఒత్తిడితో కూడుకున్నది మరియు కణాల యొక్క సరైన సాధ్యత, పునరుద్ధరణ మరియు కార్యాచరణను నిర్ధారించడానికి సరైన నిర్వహణ మరియు సాంకేతికత అవసరం. ఖచ్చితమైన కరిగించే ప్రోటోకాల్‌లు నిర్దిష్ట కణ రకాలపై ఆధారపడి ఉంటాయి. అయితే, వేగవంతమైన కరిగించడం దీనికి ప్రామాణికంగా పరిగణించబడుతుంది:

• సెల్యులార్ రికవరీపై ఏదైనా ప్రభావాన్ని తగ్గించండి
• ఘనీభవన మాధ్యమంలో ఉన్న ద్రావణాలకు బహిర్గత సమయాన్ని తగ్గించడంలో సహాయపడండి
• మంచు పునఃస్ఫటికీకరణ ద్వారా ఏదైనా నష్టాన్ని తగ్గించండి

నమూనాలను కరిగించడానికి నీటి స్నానాలు, పూసల స్నానాలు లేదా ప్రత్యేకమైన ఆటోమేటెడ్ పరికరాలను సాధారణంగా ఉపయోగిస్తారు.

చాలా తరచుగా, 1 కణ రేఖను 1-2 నిమిషాలు కరిగించి, 37°C నీటి స్నానంలో మెల్లగా తిప్పడం ద్వారా, సీసాలో కొంచెం మంచు మిగిలిపోయే వరకు వాటిని ముందుగా వేడి చేసిన పెరుగుదల మాధ్యమంలో కడగడం జరుగుతుంది.

క్షీరద పిండాల వంటి కొన్ని కణాలకు, వాటి మనుగడకు నెమ్మదిగా వేడెక్కడం చాలా అవసరం.

కణాలు ఇప్పుడు కణ సంస్కృతి, కణ ఐసోలేషన్ లేదా హెమటోపోయిటిక్ మూల కణాల విషయంలో సిద్ధంగా ఉన్నాయి - మైలోఅబ్లేటివ్ థెరపీకి ముందు దాత మూల కణాల సమగ్రతను హామీ ఇవ్వడానికి సాధ్యత అధ్యయనాలు.

కల్చర్‌లో ప్లేటింగ్ కోసం సెల్ సాంద్రతలను నిర్ణయించడానికి సెల్ కౌంట్ చేయడానికి ఉపయోగించే ప్రీవాష్ చేసిన నమూనా యొక్క చిన్న భాగాలను తీసుకోవడం సాధారణ పద్ధతి. అప్పుడు మీరు సెల్ ఐసోలేషన్ విధానాల ఫలితాలను అంచనా వేయవచ్చు మరియు సెల్ ఎబిబిలిటీని నిర్ణయించవచ్చు.

క్రయోవియల్స్ నిల్వ కోసం ఉత్తమ పద్ధతులు

క్రయోవియల్స్‌లో నిల్వ చేయబడిన నమూనాల విజయవంతమైన క్రయోప్రెజర్వేషన్ ప్రోటోకాల్‌లోని సరైన నిల్వ మరియు రికార్డ్ కీపింగ్‌తో సహా అనేక అంశాలపై ఆధారపడి ఉంటుంది.

• నిల్వ స్థానాల మధ్య సెల్‌లను విభజించండి– వాల్యూమ్‌లు అనుమతిస్తే, పరికరాల వైఫల్యాల కారణంగా నమూనా కోల్పోయే ప్రమాదాన్ని తగ్గించడానికి కణాలను వయల్‌ల మధ్య విభజించి, వాటిని ప్రత్యేక ప్రదేశాలలో నిల్వ చేయండి.
• క్రాస్-కాలుష్యాన్ని నిరోధించండి– తదుపరి ఉపయోగం ముందు సింగిల్-యూజ్ స్టెరైల్ క్రయోజెనిక్ వయల్స్ లేదా ఆటోక్లేవ్‌ను ఎంచుకోండి.
• మీ కణాలకు తగిన పరిమాణంలో ఉన్న వయల్స్ ఉపయోగించండి.– వయల్స్ 1 నుండి 5 మి.లీ.ల వరకు వివిధ పరిమాణాలలో వస్తాయి. పగుళ్లు వచ్చే ప్రమాదాన్ని తగ్గించడానికి వయల్స్‌ను ఎక్కువగా నింపకుండా ఉండండి.
• అంతర్గత లేదా బాహ్యంగా థ్రెడ్ చేయబడిన క్రయోజెనిక్ వయల్స్‌ను ఎంచుకోండి.– కొన్ని విశ్వవిద్యాలయాలు భద్రతా చర్యల కోసం అంతర్గతంగా థ్రెడ్ చేయబడిన వయల్స్‌ను సిఫార్సు చేస్తాయి – అవి నింపేటప్పుడు లేదా ద్రవ నైట్రోజన్‌లో నిల్వ చేసినప్పుడు కూడా కలుషితాన్ని నిరోధించగలవు.
• లీకేజీని నిరోధించండి- లీకేజీ మరియు కాలుష్యాన్ని నివారించడానికి స్క్రూ-క్యాప్ లేదా O-రింగ్‌లలోకి అచ్చు వేయబడిన బై-ఇంజెక్ట్ సీల్‌లను ఉపయోగించండి.
• 2D బార్‌కోడ్‌లు మరియు లేబుల్ వయల్‌లను ఉపయోగించండి- జాడను గుర్తించడానికి, పెద్ద వ్రాత ప్రాంతాలతో కూడిన వయల్‌లు ప్రతి వయల్‌ను తగినంతగా లేబుల్ చేయడానికి వీలు కల్పిస్తాయి. 2D బార్‌కోడ్‌లు నిల్వ నిర్వహణ మరియు రికార్డ్ కీపింగ్‌కు సహాయపడతాయి. సులభంగా గుర్తించడానికి రంగు కోడెడ్ క్యాప్‌లు ఉపయోగపడతాయి.
• తగినంత నిల్వ నిర్వహణ- కణాలు కోల్పోకుండా చూసుకోవడానికి, నిల్వ పాత్రలు ఉష్ణోగ్రత మరియు ద్రవ నత్రజని స్థాయిలను నిరంతరం పర్యవేక్షించాలి. లోపాల గురించి వినియోగదారులను అప్రమత్తం చేయడానికి అలారాలు అమర్చాలి.

ముందస్తు భద్రతా చర్యలు

ఆధునిక పరిశోధనలో ద్రవ నత్రజని సర్వసాధారణం అయిపోయింది, కానీ తప్పుగా ఉపయోగిస్తే తీవ్రమైన గాయం అయ్యే ప్రమాదం ఉంది.

ద్రవ నత్రజనిని నిర్వహించేటప్పుడు మంచు తుఫాను, కాలిన గాయాలు మరియు ఇతర ప్రతికూల సంఘటనల ప్రమాదాన్ని తగ్గించడానికి సరైన వ్యక్తిగత రక్షణ పరికరాలు (PPE) ధరించాలి.

• క్రయోజెనిక్ చేతి తొడుగులు
• ప్రయోగశాల కోటు
• మెడను కూడా కప్పి ఉంచే ఇంపాక్ట్ రెసిస్టెంట్ ఫుల్ ఫేస్ షీల్డ్
• మూసి ఉన్న బూట్లు
• స్ప్లాష్‌ప్రూఫ్ ప్లాస్టిక్ ఆప్రాన్

ద్రవ నైట్రోజన్ రిఫ్రిజిరేటర్లను బాగా వెంటిలేషన్ ఉన్న ప్రదేశాలలో ఉంచాలి, తద్వారా ఊపిరి ఆడకుండా పోతుంది - తప్పించుకున్న నైట్రోజన్ ఆవిరైపోతుంది మరియు వాతావరణ ఆక్సిజన్‌ను స్థానభ్రంశం చేస్తుంది. పెద్ద వాల్యూమ్ స్టోర్లలో తక్కువ ఆక్సిజన్ అలారం వ్యవస్థలు ఉండాలి.

ద్రవ నత్రజనిని నిర్వహించేటప్పుడు జంటగా పనిచేయడం అనువైనది మరియు సాధారణ పని గంటలకు వెలుపల దాని వాడకాన్ని నిషేధించాలి.

మీ వర్క్‌ఫ్లోకు మద్దతు ఇచ్చే క్రయోవియల్స్

సుజౌ ఏస్ బయోమెడికల్ కంపెనీ వివిధ రకాల కణాల కోసం మీ క్రయోప్రెజర్వేషన్ అవసరాలను తీర్చే ఉత్పత్తుల యొక్క విస్తృత ఎంపికను అందిస్తుంది. పోర్ట్‌ఫోలియోలో ట్యూబ్‌ల శ్రేణితో పాటు స్టెరైల్ క్రయోవియల్‌ల శ్రేణి కూడా ఉంది.

మా క్రయోవియల్స్:

• ల్యాబ్ స్క్రూ క్యాప్ 0.5mL 1.5mL 2.0mL క్రయోవియల్ క్రయోజెనిక్ వైల్స్ కోనికల్ బాటమ్ క్రయోట్యూబ్ విత్ గాస్కెట్

  ● 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml స్పెసిఫికేషన్, స్కర్ట్‌తో లేదా లేకుండా
  ● కోనికల్ లేదా సెల్ఫ్ స్టాండింగ్ డిజైన్, స్టెరైల్ లేదా నాన్-స్టెరైల్ రెండూ అందుబాటులో ఉన్నాయి.
  ● స్క్రూ క్యాప్ ట్యూబ్‌లు మెడికల్ గ్రేడ్ పాలీప్రొఫైలిన్‌తో తయారు చేయబడ్డాయి.
  ● PP క్రయోట్యూబ్ వైల్స్‌ను పదే పదే స్తంభింపజేయవచ్చు మరియు కరిగించవచ్చు.
  ●బాహ్య క్యాప్ డిజైన్ నమూనా చికిత్స సమయంలో కాలుష్య సంభావ్యతను తగ్గిస్తుంది.
  ● స్క్రూ క్యాప్ క్రయోజెనిక్ ట్యూబ్‌లు ఉపయోగం కోసం యూనివర్సల్ స్క్రూ థ్రెడ్‌లు
  ● ట్యూబ్‌లు చాలా సాధారణ రోటర్‌లకు సరిపోతాయి
  ● క్రయోజెనిక్ ట్యూబ్ ఓ-రింగ్ ట్యూబ్‌లు ప్రామాణిక 1-అంగుళాల మరియు 2-అంగుళాల, 48బావి, 81బావి, 96బావి మరియు 100బావి ఫ్రీజర్ బాక్స్‌లకు సరిపోతాయి.
  ● 121°C వరకు ఆటోక్లేవబుల్ మరియు -86°C వరకు ఫ్రీజ్ చేయగలదు

  భాగం సంఖ్య	మెటీరియల్	వాల్యూమ్	టోపీరంగు	పిసిఎస్/బ్యాగ్	బ్యాగులు/కేసు
  ACT05-BL-N యొక్క లక్షణాలు	PP	0.5మి.లీ.	నలుపు, పసుపు, నీలం, ఎరుపు, ఊదా, తెలుపు	500 డాలర్లు	10
  ACT15-BL-N యొక్క లక్షణాలు	PP	1.5మి.లీ	నలుపు, పసుపు, నీలం, ఎరుపు, ఊదా, తెలుపు	500 డాలర్లు	10
  ACT15-BL-NW యొక్క సంబంధిత ఉత్పత్తులు	PP	1.5మి.లీ	నలుపు, పసుపు, నీలం, ఎరుపు, ఊదా, తెలుపు	500 డాలర్లు	10
  ACT20-BL-N యొక్క లక్షణాలు	PP	2.0మి.లీ.	నలుపు, పసుపు, నీలం, ఎరుపు, ఊదా, తెలుపు	500 డాలర్లు	10