ක්‍රයෝවියල්ද්‍රව නයිට්‍රජන් වලින් පුරවන ලද ඩිවර් වල, සෛල රේඛා සහ අනෙකුත් තීරණාත්මක ජීව විද්‍යාත්මක ද්‍රව්‍ය ක්‍රයෝජනික් ගබඩා කිරීම සඳහා බහුලව භාවිතා වේ.

ද්‍රව නයිට්‍රජන් වල සෛල සාර්ථකව සංරක්ෂණය කිරීම සඳහා අදියර කිහිපයක් ඇතුළත් වේ. මූලික මූලධර්මය මන්දගාමී කැටි කිරීමක් වුවද, භාවිතා කරන නිශ්චිත තාක්ෂණය සෛල වර්ගය සහ භාවිතා කරන ක්‍රයෝප්‍රොටෙක්ටන්ට් මත රඳා පවතී. එවැනි අඩු උෂ්ණත්වවලදී සෛල ගබඩා කිරීමේදී සැලකිල්ලට ගත යුතු ආරක්ෂිත සලකා බැලීම් සහ හොඳම පිළිවෙත් කිහිපයක් තිබේ.

ද්‍රව නයිට්‍රජන් තුළ ක්‍රයෝවියල් ගබඩා කරන ආකාරය පිළිබඳ දළ විශ්ලේෂණයක් ලබා දීම මෙම සටහනේ අරමුණයි.

ක්‍රියෝවියල් යනු කුමක්ද?

ක්‍රයෝවියල් යනු ඉතා අඩු උෂ්ණත්වවලදී ද්‍රව සාම්පල ගබඩා කිරීම සඳහා නිර්මාණය කර ඇති කුඩා, පියනක් සහිත කුප්පි වේ. ක්‍රයෝප්‍රොටෙක්ටන්ට් තුළ සංරක්ෂණය කර ඇති සෛල ද්‍රව නයිට්‍රජන් සමඟ සෘජුව සම්බන්ධ නොවන බව ඒවා සහතික කරයි, ද්‍රව නයිට්‍රජන් වල අධික සිසිලන බලපෑමෙන් ප්‍රතිලාභ ලබන අතරම සෛලීය අස්ථි බිඳීම් අවදානම අවම කරයි.

කුප්පි සාමාන්‍යයෙන් විවිධ වෙළුම් සහ මෝස්තර වලින් ලබා ගත හැකිය - ඒවා පැතලි හෝ වටකුරු පතුලකින් අභ්‍යන්තරව හෝ බාහිරව නූල් කළ හැකිය. වඳ සහ වඳ නොවන ආකෘති ද ඇත.

කවුද භාවිතා කරන්නේසයිරෝවියල්ද්‍රව නයිට්‍රජන් වල සෛල ගබඩා කිරීමට

NHS සහ පෞද්ගලික රසායනාගාර පරාසයක් මෙන්ම ලණු රුධිර බැංකුකරණය, එපිටිලියල් සෛල ජීව විද්‍යාව, ප්‍රතිශක්තිකරණ විද්‍යාව සහ ප්‍රාථමික සෛල ජීව විද්‍යාව පිළිබඳ විශේෂඥ පර්යේෂණ ආයතන ද සෛල ක්‍රියෝප්‍රෙසර්ව් කිරීමට ක්‍රියෝවියල් භාවිතා කරයි.

මේ ආකාරයෙන් සංරක්ෂණය කරන ලද සෛල අතරට B සහ T සෛල, CHO සෛල, රක්තපාත කඳ සහ ප්‍රජනක සෛල, දෙමුහුන් සෛල, බඩවැල් සෛල, මැක්‍රෝෆේජ්, මෙසෙන්චයිමල් කඳ සහ ප්‍රජනක සෛල, මොනොසයිට්, මයිලෝමා, NK සෛල සහ ප්ලූරිපොටෙන්ට් කඳ සෛල ඇතුළත් වේ.

ද්‍රව නයිට්‍රජන් වල ක්‍රියෝවියල් ගබඩා කරන්නේ කෙසේද යන්න පිළිබඳ දළ විශ්ලේෂණය

Cryopreservation යනු සෛල සහ අනෙකුත් ජීව විද්‍යාත්මක ව්‍යුහයන් ඉතා අඩු උෂ්ණත්වයකට සිසිල් කිරීමෙන් සංරක්ෂණය කරන ක්‍රියාවලියකි. සෛල ශක්‍යතාව නැති නොවී වසර ගණනාවක් ද්‍රව නයිට්‍රජන් තුළ සෛල ගබඩා කළ හැකිය. මෙය භාවිතා කරන ක්‍රියා පටිපාටිවල දළ සටහනකි.

සෛල සකස් කිරීම

සාම්පල සකස් කිරීමේ නිශ්චිත ක්‍රමය සෛල වර්ගය අනුව වෙනස් වේ, නමුත් සාමාන්‍යයෙන්, සෛල එකතු කර කේන්ද්‍රාපසාරී කර සෛල බහුල පෙල්ට් එකක් වර්ධනය කරයි. පසුව මෙම පෙල්ට් එක ක්‍රියෝප්‍රොටෙක්ටන්ට් හෝ ක්‍රියෝප්‍රෙසර්වේෂන් මාධ්‍යයක් සමඟ මිශ්‍ර කළ සුපිරි ද්‍රව්‍යයක නැවත අවලම්බනය කරනු ලැබේ.

ක්‍රයෝප්‍රෙසර්වේෂන් මාධ්‍යය

මෙම මාධ්‍යය භාවිතා කරනු ලබන්නේ සෛල අඩු උෂ්ණත්ව පරිසරයන් තුළ සංරක්ෂණය කිරීම සඳහා වන අතර එමඟින් අභ්‍යන්තර හා බාහිර සෛලීය ස්ඵටික සෑදීම වළක්වන අතර එම නිසා සෛල මිය යාම වළක්වයි. ඔවුන්ගේ කාර්යභාරය වන්නේ කැටි කිරීම, ගබඩා කිරීම සහ දියවන ක්‍රියාවලීන්හිදී සෛල හා පටක සඳහා ආරක්ෂිත, ආරක්ෂිත පරිසරයක් සැපයීමයි.

නැවුම් ශීත කළ ප්ලාස්මා (FFP), හෙපරිනිස් කරන ලද ප්ලාස්මාලිට් ද්‍රාවණය හෝ සෙරුමය-නිදහස්, සත්ව සංරචක-නිදහස් ද්‍රාවණ වැනි මාධ්‍යයක් ඩයිමෙතිල් සල්ෆොසයිඩ් (DMSO) හෝ ග්ලිසරෝල් වැනි ක්‍රයෝප්‍රොටෙක්ටර් සමඟ මිශ්‍ර කරනු ලැබේ.

නැවත ද්‍රවීකරණය කරන ලද සාම්පල පෙලට් පොලිප්‍රොපිලීන් ක්‍රයෝවියල් බවට පරිවර්තනය කරනු ලැබේ, උදාහරණයක් ලෙසSuzhou Ace ජෛව වෛද්‍ය සමාගම Cryogenic ගබඩා කුප්පි.

ක්‍රයෝවියල් අධික ලෙස පුරවා නොගැනීම වැදගත් වන්නේ මෙය ඉරිතැලීමේ අවදානම සහ අන්තර්ගතය මුදා හැරීමේ හැකියාව වැඩි කරන බැවිනි (1).

පාලිත කැටිකිරීමේ අනුපාතය

සාමාන්‍යයෙන්, සෛල සාර්ථක ලෙස ක්‍රයෝප්‍රෙසර්වේෂන් කිරීම සඳහා මන්දගාමී පාලිත කැටි කිරීමේ අනුපාතයක් භාවිතා කරයි.

සාම්පල ක්‍රයෝජනික් කුප්පි වලට එකතු කිරීමෙන් පසු, ඒවා තෙත් අයිස් මත හෝ 4℃ ශීතකරණයක් තුළ තබා විනාඩි 5ක් ඇතුළත කැටි කිරීමේ ක්‍රියාවලිය ආරම්භ කෙරේ. සාමාන්‍ය මාර්ගෝපදේශයක් ලෙස, සෛල විනාඩියකට -1 සිට -3 දක්වා අනුපාතයකින් සිසිල් කරනු ලැබේ (2). මෙය සාක්ෂාත් කරගනු ලබන්නේ වැඩසටහන්ගත කළ හැකි සිසිලනකාරකයක් භාවිතයෙන් හෝ –70°C සිට –90°C දක්වා පාලිත අනුපාත ශීතකරණයක තබා ඇති පරිවරණය කළ පෙට්ටියක කුප්පි තැබීමෙනි.

ද්‍රව නයිට්‍රජන් වෙත මාරු කිරීම

ඉන්පසු ශීත කළ ක්‍රයෝජනික් කුප්පි, -135°C ට අඩු උෂ්ණත්වයක් පවත්වා ගෙන යන තාක් කල්, අවිනිශ්චිත කාලයක් සඳහා ද්‍රව නයිට්‍රජන් ටැංකියකට මාරු කරනු ලැබේ.

මෙම අතිශය අඩු උෂ්ණත්ව ද්‍රව හෝ වාෂ්ප අවධියේ නයිට්‍රජන් ගිල්වීමෙන් ලබා ගත හැක.

ද්‍රව අවධියද වාෂ්ප අවධියද?

ද්‍රව අවධියේ නයිට්‍රජන් ගබඩා කිරීම නිරපේක්ෂ අනුකූලතාවයකින් සීතල උෂ්ණත්වය පවත්වා ගැනීමට දන්නා නමුත්, බොහෝ විට පහත සඳහන් හේතූන් මත නිර්දේශ නොකරයි:

• ද්‍රව නයිට්‍රජන් විශාල පරිමාවකින් (ගැඹුර) අවශ්‍ය වීම විභව අනතුරකි. මේ හේතුවෙන් පිළිස්සුම් හෝ හුස්ම හිරවීම සැබෑ අවදානමකි.
• ඇස්පර්ගිලස්, හෙපටයිටිස් බී වැනි බෝවන කාරක මගින් හරස් දූෂණය වීම සහ ද්‍රව නයිට්‍රජන් මාධ්‍යය හරහා වෛරස් පැතිරීම පිළිබඳ ලේඛනගත අවස්ථා (2,3)
• ගිල්වීමේදී ද්‍රව නයිට්‍රජන් කුප්පි තුළට කාන්දු වීමේ හැකියාව. ගබඩාවෙන් ඉවත් කර කාමර උෂ්ණත්වයට රත් කළ විට, නයිට්‍රජන් වේගයෙන් ප්‍රසාරණය වේ. එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස, ද්‍රව නයිට්‍රජන් ගබඩාවෙන් ඉවත් කළ විට කුප්පිය කැඩී යා හැකි අතර, පියාසර කරන සුන්බුන් සහ අන්තර්ගතයට නිරාවරණය වීමෙන් අනතුරක් ඇති කරයි (1, 4).

මෙම හේතූන් නිසා, අතිශය අඩු උෂ්ණත්ව ගබඩා කිරීම බොහෝ විට වාෂ්ප අවධියේ නයිට්‍රජන් වල පවතී. සාම්පල ද්‍රව අවධියේ ගබඩා කළ යුතු විට, විශේෂිත ක්‍රයෝෆ්ලෙක්ස් නල භාවිතා කළ යුතුය.

වාෂ්ප අවධියේ අවාසිය නම් සිරස් උෂ්ණත්ව අනුක්‍රමණයක් ඇති විය හැකි අතර එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස -135℃ සහ -190℃ අතර උෂ්ණත්ව උච්චාවචනයන් සිදුවිය හැකිය. මේ සඳහා ද්‍රව නයිට්‍රජන් මට්ටම් සහ උෂ්ණත්ව විචලනයන් ප්‍රවේශමෙන් සහ කඩිසරව නිරීක්ෂණය කිරීම අවශ්‍ය වේ (5).

බොහෝ නිෂ්පාදකයින් නිර්දේශ කරන්නේ ක්‍රයෝවියල් -135°C දක්වා ගබඩා කිරීම සඳහා හෝ වාෂ්ප අවධියේදී පමණක් භාවිතා කිරීම සඳහා සුදුසු බවයි.

ඔබේ ක්‍රයෝප්‍රෙසර්ඩ් සෛල දියවීම

ශීත කළ සංස්කෘතියක් සඳහා දියවන ක්‍රියා පටිපාටිය ආතතියට කරුණක් වන අතර, සෛලවල ප්‍රශස්ත ශක්‍යතාව, ප්‍රකෘතිමත් වීම සහ ක්‍රියාකාරීත්වය සහතික කිරීම සඳහා නිසි ලෙස හැසිරවීම සහ තාක්ෂණය අවශ්‍ය වේ. නිශ්චිත දියවන ප්‍රොටෝකෝල නිශ්චිත සෛල වර්ග මත රඳා පවතී. කෙසේ වෙතත්, වේගවත් දියවන ප්‍රමිතිය ලෙස සැලකේ:

• සෛලීය ප්‍රතිසාධනය කෙරෙහි ඇතිවන ඕනෑම බලපෑමක් අඩු කරන්න.
• කැටි කිරීමේ මාධ්‍යයේ පවතින ද්‍රාව්‍යවලට නිරාවරණය වන කාලය අඩු කිරීමට උපකාරී වේ.
• අයිස් නැවත ස්ඵටිකීකරණයෙන් සිදුවන ඕනෑම හානියක් අවම කරන්න.

සාම්පල දියවීම සඳහා ජල ස්නාන, පබළු ස්නාන හෝ විශේෂිත ස්වයංක්‍රීය උපකරණ බහුලව භාවිතා වේ.

බොහෝ විට, වරකට සෛල රේඛාවක් මිනිත්තු 1-2 ක් දියකරනු ලැබේ, පෙර රත් කළ වර්ධන මාධ්‍යයකින් සේදීමට පෙර කුප්පියේ අයිස් ස්වල්පයක් ඉතිරි වන තෙක් 37ºC ජල ස්නානයක මෘදු ලෙස කරකවනු ලැබේ.

ක්ෂීරපායී කළල වැනි සමහර සෛල සඳහා, ඒවායේ පැවැත්ම සඳහා මන්දගාමී උණුසුම අත්‍යවශ්‍ය වේ.

සෛල දැන් සෛල සංස්කෘතිය, සෛල හුදකලා කිරීම හෝ රක්තපාත කඳ සෛල සම්බන්ධයෙන් - මයිලෝඅබ්ලේටිව් චිකිත්සාවට පෙර පරිත්‍යාගශීලියාගේ කඳ සෛලවල අඛණ්ඩතාව සහතික කිරීම සඳහා ශක්‍යතා අධ්‍යයනයන් සඳහා සූදානම්ය.

සංස්කෘතියේ ආලේපනය සඳහා සෛල සාන්ද්‍රණය තීරණය කිරීම සඳහා සෛල ගණන සිදු කිරීම සඳහා භාවිතා කරන පෙර සෝදාගත් සාම්පලයෙන් කුඩා කොටස් ගැනීම සාමාන්‍ය පිළිවෙතකි. එවිට ඔබට සෛල හුදකලා කිරීමේ ක්‍රියා පටිපාටිවල ප්‍රතිඵල තක්සේරු කර සෛල ශක්‍යතාව තීරණය කළ හැකිය.

ක්‍රියෝවියල් ගබඩා කිරීම සඳහා හොඳම පිළිවෙත්

ක්‍රයෝවියල් වල ගබඩා කර ඇති සාම්පලවල සාර්ථක ක්‍රයෝප්‍රෙසර්වීකරණය නිසි ගබඩා කිරීම සහ වාර්තා තබා ගැනීම ඇතුළු ප්‍රොටෝකෝලයේ බොහෝ අංග මත රඳා පවතී.

• ගබඩා ස්ථාන අතර සෛල බෙදන්න- පරිමාවන් ඉඩ දෙන්නේ නම්, උපකරණ අසමත්වීම් හේතුවෙන් සාම්පල අහිමි වීමේ අවදානම අවම කිරීම සඳහා කුප්පි අතර සෛල බෙදා වෙනම ස්ථානවල ගබඩා කරන්න.
• හරස් දූෂණය වැළැක්වීම- පසුව භාවිතා කිරීමට පෙර තනි-භාවිත වඳ ක්‍රයොජනික් කුප්පි හෝ ස්වයංක්‍රීය ක්ලේව් තෝරා ගන්න.
• ඔබේ සෛල සඳහා සුදුසු ප්‍රමාණයේ කුප්පි භාවිතා කරන්න.- කුප්පි 1 සිට 5ml දක්වා පරිමාවන්ගෙන් යුක්ත වේ. ඉරිතැලීමේ අවදානම අවම කිරීම සඳහා කුප්පි අධික ලෙස පිරවීමෙන් වළකින්න.
• අභ්‍යන්තර හෝ බාහිරව නූල් සහිත ක්‍රයෝජනික් කුප්පි තෝරන්න.- සමහර විශ්ව විද්‍යාල විසින් ආරක්ෂිත පියවර සඳහා අභ්‍යන්තරව නූල් සහිත කුප්පි නිර්දේශ කරනු ලැබේ - ඒවා පිරවීමේදී හෝ ද්‍රව නයිට්‍රජන් තුළ ගබඩා කිරීමේදී දූෂණය වීම වළක්වා ගත හැකිය.
• කාන්දු වීම වැළැක්වීම- කාන්දු වීම හා දූෂණය වීම වැළැක්වීම සඳහා ඉස්කුරුප්පු-තොප්පිය හෝ O-මුදු වලට අච්චු කරන ලද ද්වි-එන්නත් කරන ලද මුද්‍රා භාවිතා කරන්න.
• 2D තීරු කේත සහ ලේබල් කුප්පි භාවිතා කරන්න- සොයා ගැනීමේ හැකියාව සහතික කිරීම සඳහා, විශාල ලිවීමේ ප්‍රදේශ සහිත කුප්පි මඟින් සෑම කුප්පියක්ම ප්‍රමාණවත් ලෙස ලේබල් කිරීමට හැකි වේ. 2D තීරු කේත ගබඩා කළමනාකරණය සහ වාර්තා තබා ගැනීම සඳහා උපකාරී වේ. පහසුවෙන් හඳුනා ගැනීම සඳහා වර්ණ කේතනය කරන ලද කැප් ප්‍රයෝජනවත් වේ.
• ප්‍රමාණවත් ගබඩා නඩත්තුව- සෛල නැති නොවන බව සහතික කිරීම සඳහා, ගබඩා භාජන නිරන්තරයෙන් උෂ්ණත්වය සහ ද්‍රව නයිට්‍රජන් මට්ටම් නිරීක්ෂණය කළ යුතුය. දෝෂ පිළිබඳව පරිශීලකයින් දැනුවත් කිරීම සඳහා අනතුරු ඇඟවීම් සවි කළ යුතුය.

ආරක්ෂිත පූර්වාරක්ෂාව

නූතන පර්යේෂණවල ද්‍රව නයිට්‍රජන් සාමාන්‍ය භාවිතයක් බවට පත්ව ඇත, නමුත් වැරදි ලෙස භාවිතා කළහොත් බරපතල තුවාල සිදුවීමේ අවදානමක් ඇත.

දියර නයිට්‍රජන් හැසිරවීමේදී හිම කැට, පිළිස්සුම් සහ අනෙකුත් අහිතකර සිදුවීම් අවම කිරීම සඳහා නිසි පුද්ගලික ආරක්ෂක උපකරණ (PPE) පැළඳිය යුතුය.

• ක්‍රයෝජනික් අත්වැසුම්
• රසායනාගාර කබාය
• බෙල්ලද ආවරණය කරන බලපෑමට ඔරොත්තු දෙන සම්පූර්ණ මුහුණු ආවරණයක්
• සංවෘත පාද සපත්තු
• ඉසින ආරක්ෂිත ප්ලාස්ටික් ඒප්‍රොන් එකක්

හුස්ම හිරවීමේ අවදානම අවම කිරීම සඳහා ද්‍රව නයිට්‍රජන් ශීතකරණ හොඳින් වාතාශ්‍රය ඇති ප්‍රදේශවල තැබිය යුතුය - ගැලවී ගිය නයිට්‍රජන් වායුගෝලීය ඔක්සිජන් වාෂ්ප වී විස්ථාපනය කරයි. විශාල පරිමාවක් ඇති ගබඩාවල අඩු ඔක්සිජන් අනතුරු ඇඟවීමේ පද්ධති තිබිය යුතුය.

ද්‍රව නයිට්‍රජන් හැසිරවීමේදී යුගල වශයෙන් වැඩ කිරීම වඩාත් සුදුසු වන අතර සාමාන්‍ය වැඩ කරන වේලාවෙන් පිටත එය භාවිතා කිරීම තහනම් කළ යුතුය.

ඔබේ කාර්ය ප්‍රවාහයට සහාය වීමට ක්‍රයෝවියල්

Suzhou Ace Biomedical සමාගම විවිධ වර්ගයේ සෛල සඳහා ඔබේ ක්‍රයෝප්‍රෙසර්වේෂන් අවශ්‍යතා සපුරාලන පුළුල් පරාසයක නිෂ්පාදන ඉදිරිපත් කරයි. කළඹට නල පරාසයක් මෙන්ම වඳ ක්‍රයෝවියල් පරාසයක් ද ඇතුළත් වේ.

අපගේ ක්‍රයෝවියල්:

• රසායනාගාර ඉස්කුරුප්පු කැප් 0.5mL 1.5mL 2.0mL ක්‍රයෝවියල් ක්‍රයොජනික් කුප්පි කේතුකාකාර පහළ ක්‍රයෝටියුබ් ගෑස්කට් සමඟ

  ● 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml පිරිවිතර, සායක් සහිත හෝ රහිත
  ● කේතුකාකාර හෝ ස්වයං-ස්ථාවර නිර්මාණය, වඳ හෝ වඳ නොවන දෙකම ලබා ගත හැකිය.
  ● ඉස්කුරුප්පු කැප් නල වෛද්‍ය ශ්‍රේණියේ පොලිප්‍රොපිලීන් වලින් සාදා ඇත.
  ● PP Cryotube කුප්පි නැවත නැවතත් ශීත කළ හැකි අතර දිය කළ හැක.
  ●බාහිර ආවරණ සැලසුම මඟින් සාම්පල ප්‍රතිකාර කිරීමේදී දූෂණය වීමේ සම්භාවිතාව අඩු කළ හැකිය.
  ● ඉස්කුරුප්පු කැප් ක්‍රයොජනික් නල භාවිතය සඳහා විශ්ව ඉස්කුරුප්පු නූල්
  ● නල බොහෝ පොදු භ්‍රමකවලට ගැලපේ
  ● ක්‍රයෝජනික් නල o-මුදු නල සම්මත අඟල් 1 සහ අඟල් 2, ළිං 48, ළිං 81, ළිං 96 සහ ළිං 100 අධිශීතකරණ පෙට්ටිවලට ගැලපේ.
  ● 121°C දක්වා ස්වයංක්‍රීයව ක්ලේව් කළ හැකි අතර -86°C දක්වා කැටි කළ හැකිය.

  කොටස අංක	ද්‍රව්‍ය	වෙළුම	කැප්වර්ණය	පීසීඑස්/බෑගය	බෑග්/නඩුව
  ACT05-BL-N හඳුන්වා දීම	PP	0.5මිලි	කළු, කහ, නිල්, රතු, දම්, සුදු	500 යි	10
  ACT15-BL-N හඳුන්වා දීම	PP	මිලි ලීටර් 1.5	කළු, කහ, නිල්, රතු, දම්, සුදු	500 යි	10
  ACT15-BL-NW හඳුන්වා දීම	PP	මිලි ලීටර් 1.5	කළු, කහ, නිල්, රතු, දම්, සුදු	500 යි	10
  ACT20-BL-N හඳුන්වා දීම	PP	2.0මිලි	කළු, කහ, නිල්, රතු, දම්, සුදු	500 යි	10