ڪريوويئلزعام طور تي مائع نائٽروجن سان ڀريل ديوارن ۾ سيل لائينن ۽ ٻين نازڪ حياتياتي مواد جي ڪرائيوجينڪ اسٽوريج لاءِ استعمال ٿيندا آهن.

مائع نائٽروجن ۾ سيلز جي ڪامياب تحفظ ۾ ڪيترائي مرحلا شامل آهن. جڏهن ته بنيادي اصول سست منجمد آهي، استعمال ٿيندڙ صحيح ٽيڪنڪ سيل جي قسم ۽ استعمال ٿيل ڪريوپروٽيڪنٽ تي منحصر آهي. اهڙي گهٽ درجه حرارت تي سيلز کي ذخيرو ڪرڻ وقت ڪيترائي حفاظتي خيال ۽ بهترين طريقا آهن جن کي غور ۾ رکڻ گهرجي.

هن پوسٽ جو مقصد هڪ جائزو ڏيڻ آهي ته ڪيئن ڪرائوويلز کي مائع نائٽروجن ۾ ذخيرو ڪيو ويندو آهي.

ڪريوويئل ڇا آهن؟

ڪرايوويئل ننڍا، ڍڪيل شيشي آهن جيڪي انتهائي گهٽ درجه حرارت تي مائع نمونن کي ذخيرو ڪرڻ لاءِ ٺهيل آهن. اهي يقيني بڻائين ٿا ته ڪرايوپروٽيڪٽنٽ ۾ محفوظ ڪيل سيلز مائع نائٽروجن سان سڌو سنئون رابطي ۾ نه اچن، سيلولر ڀڃڻ جو خطرو گهٽائي ٿو جڏهن ته اڃا تائين مائع نائٽروجن جي انتهائي ٿڌي اثر مان فائدو حاصل ڪري ٿو.

شيشيون عام طور تي مختلف مقدارن ۽ ڊيزائنن ۾ موجود هونديون آهن - انهن کي اندروني يا ٻاهرين طور تي فليٽ يا گول تري سان ڌاڳو ڏئي سگهجي ٿو. جراثيم کان پاڪ ۽ غير جراثيم کان پاڪ فارميٽ پڻ موجود آهن.

ڪير استعمال ڪري ٿوسائروويئلزسيلز کي مائع نائٽروجن ۾ ذخيرو ڪرڻ لاءِ

NHS ۽ خانگي ليبارٽرين جو هڪ سلسلو، انهي سان گڏ تحقيقي ادارا جيڪي ڪنڊ بلڊ بينڪنگ، ايپيٿيليل سيل بائيولاجي، اميونولوجي ۽ اسٽيم سيل بائيولاجي ۾ ماهر آهن، سيلز کي محفوظ ڪرڻ لاءِ ڪرايوويئل استعمال ڪن ٿا.

هن طريقي سان محفوظ ڪيل سيلز ۾ بي ۽ ٽي سيلز، سي ايڇ او سيلز، هيماٽوپوئيٽڪ اسٽيم ۽ پروجينيٽر سيلز، هائبرڊوما، آنڊن جا سيلز، ميڪروفيجز، ميسينچيمل اسٽيم ۽ پروجينيٽر سيلز، مونوسائٽس، مائيلوما، اين ڪي سيلز ۽ پلوريپوٽنٽ اسٽيم سيلز شامل آهن.

مائع نائٽروجن ۾ ڪريوويئلز کي ڪيئن ذخيرو ڪجي جو جائزو

ڪرائوپريزرويشن هڪ اهڙو عمل آهي جيڪو سيلز ۽ ٻين حياتياتي بناوتن کي تمام گهٽ درجه حرارت تي ٿڌو ڪري محفوظ ڪري ٿو. سيلز کي سالن تائين مائع نائٽروجن ۾ سيلز جي حياتياتي صلاحيت کي نقصان پهچائڻ کان سواءِ ذخيرو ڪري سگهجي ٿو. هي استعمال ٿيندڙ طريقيڪار جو هڪ خاڪو آهي.

سيل تيار ڪرڻ

نموني تيار ڪرڻ جو صحيح طريقو سيل جي قسم جي لحاظ کان مختلف هوندو، پر عام طور تي، سيلز کي گڏ ڪيو ويندو آهي ۽ سينٽرفيوج ڪيو ويندو آهي ته جيئن سيل سان مالا مال پيلٽ تيار ڪيو وڃي. هن پيلٽ کي پوءِ سپرنيٽينٽ ۾ ڪرائيوپروٽيڪٽنٽ يا ڪرائيوپريزرويشن ميڊيم سان ملايو ويندو آهي.

ڪرائوپريزرويشن ميڊيم

هي وچولي سيلز کي گهٽ درجه حرارت واري ماحول ۾ محفوظ رکڻ لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي جنهن جي تابع اهي اندروني ۽ خارجي سيلولر ڪرسٽلز جي ٺهڻ کي روڪيندا آهن ۽ ان ڪري سيل جي موت. انهن جو ڪردار منجمد، اسٽوريج، ۽ پگھلڻ جي عملن دوران سيلز ۽ ٽشوز لاءِ هڪ محفوظ، حفاظتي ماحول فراهم ڪرڻ آهي.

هڪ وچولي جهڙوڪ تازو منجمد پلازما (FFP)، هيپرينائيزڊ پلازمالائيٽ محلول يا سيرم کان پاڪ، جانورن جي جزن کان پاڪ محلول کي ڊائي ميٿائل سلفوڪسائيڊ (DMSO) يا گليسرول جهڙن ڪرائوپروٽيڪٽينٽس سان ملايو ويندو آهي.

ٻيهر مائع ٿيل نموني پيلٽ کي پولي پروپيلين ڪرايوويلز ۾ شامل ڪيو ويندو آهي جهڙوڪسوزو ايس بايوميڊيڪل ڪمپني ڪرائوجينڪ اسٽوريج شيشيون.

اهو ضروري آهي ته ڪرائوويلز کي وڌيڪ نه ڀريو وڃي ڇاڪاڻ ته اهو ٽٽڻ ۽ مواد جي ممڪن ڇڏڻ جو خطرو وڌائيندو (1).

ڪنٽرول ٿيل منجمد شرح

عام طور تي، سيلز جي ڪامياب ڪرائوپريزرويشن لاءِ هڪ سست ڪنٽرول ٿيل فريز ريٽ استعمال ڪيو ويندو آهي.

نمونن کي ڪرائيوجينڪ شيشي ۾ تبديل ڪرڻ کان پوءِ، انهن کي گلي برف تي يا 4℃ ريفريجريٽر ۾ رکيو ويندو آهي ۽ منجمد ڪرڻ جو عمل 5 منٽن اندر شروع ڪيو ويندو آهي. هڪ عام گائيڊ جي طور تي، سيلز کي -1 کان -3 في منٽ جي شرح سان ٿڌو ڪيو ويندو آهي (2). اهو هڪ پروگراميبل ڪولر استعمال ڪندي يا شيشي کي -70°C کان -90°C ڪنٽرول ٿيل شرح فريزر ۾ رکيل هڪ موصل دٻي ۾ رکڻ سان حاصل ڪيو ويندو آهي.

مائع نائٽروجن ڏانهن منتقل ڪريو

پوءِ منجمد ڪرائيوجينڪ شيشي کي غير معين مدت لاءِ مائع نائٽروجن ٽينڪ ۾ منتقل ڪيو ويندو آهي بشرطيڪه -135 ℃ کان گهٽ گرمي پد برقرار رکيو وڃي.

اهي انتهائي گهٽ درجه حرارت مائع يا بخار واري مرحلي جي نائٽروجن ۾ غرق ڪري حاصل ڪري سگهجن ٿا.

مائع يا بخار جو مرحلو؟

مائع مرحلي ۾ نائٽروجن جي اسٽوريج کي ٿڌي گرمي پد کي مڪمل مستقل مزاجي سان برقرار رکڻ لاءِ سڃاتو وڃي ٿو، پر اڪثر ڪري هيٺين سببن جي ڪري سفارش نه ڪئي ويندي آهي:

• مائع نائٽروجن جي وڏي مقدار (گہرائي) جي ضرورت جيڪا هڪ امڪاني خطرو آهي. ان جي ڪري جلڻ يا دم گھٽجڻ هڪ حقيقي خطرو آهي.
• ايسپرگيلس، هيپاٽائيٽس بي ۽ مائع نائٽروجن ميڊيم ذريعي وائرل اسپريڊ جهڙن متعدي ايجنٽن جي ڪراس آلودگي جا دستاويزي ڪيس (2,3)
• وسرڻ دوران شيشي ۾ مائع نائٽروجن جي ليڪ ٿيڻ جو امڪان. جڏهن اسٽوريج مان ڪڍيو ويندو آهي ۽ ڪمري جي حرارت تي گرم ڪيو ويندو آهي، ته نائٽروجن تيزي سان وڌي ويندي آهي. نتيجي طور، شيشي کي مائع نائٽروجن اسٽوريج مان ڪڍڻ تي ٽٽي سگهي ٿو، جيڪو اڏامندڙ ملبي ۽ مواد جي نمائش ٻنهي کان خطرو پيدا ڪري ٿو (1، 4).

انهن سببن جي ڪري، الٽرا لو درجه حرارت جو ذخيرو عام طور تي وانپ فيز نائٽروجن ۾ هوندو آهي. جڏهن نمونن کي مائع فيز ۾ ذخيرو ڪرڻ گهرجي، ته خاص ڪرائوفلڪس ٽيوبنگ استعمال ڪرڻ گهرجي.

بخار جي مرحلي جو نقصان اهو آهي ته هڪ عمودي گرمي پد جي درجي بندي ٿي سگهي ٿي جنهن جي نتيجي ۾ -135 ℃ ۽ -190 ℃ جي وچ ۾ گرمي پد ۾ اتار چڙهاؤ اچي سگهي ٿو. ان لاءِ مائع نائٽروجن جي سطحن ۽ گرمي پد جي تبديلين جي محتاط ۽ محنتي نگراني جي ضرورت آهي (5).

ڪيترائي ٺاهيندڙ سفارش ڪن ٿا ته ڪرائوويئلز -135 ℃ تائين اسٽوريج لاءِ يا صرف بخار جي مرحلي ۾ استعمال لاءِ مناسب آهن.

توهان جي ڪرائوپريزرڊ سيلز کي پگھلائڻ

منجمد ڪلچر لاءِ پگھلائڻ جو عمل دٻاءُ وارو هوندو آهي، ۽ سيلز جي بهترين عملداري، بحالي ۽ ڪارڪردگي کي يقيني بڻائڻ لاءِ مناسب هٿ کڻڻ ۽ ٽيڪنڪ جي ضرورت هوندي آهي. پگھلائڻ جو صحيح پروٽوڪول مخصوص سيل جي قسمن تي منحصر هوندو. تاهم، تيز پگھلائڻ کي معياري سمجهيو ويندو آهي:

• سيلولر بحالي تي ڪنهن به اثر کي گهٽايو
• فريزنگ ميڊيا ۾ موجود محلولن جي نمائش جو وقت گهٽائڻ ۾ مدد ڪريو.
• برف جي ٻيهر ڪرسٽلائيزيشن سان ڪنهن به نقصان کي گهٽ ڪريو

نموني کي پگھلائڻ لاءِ عام طور تي پاڻي جا غسل، موتي جا غسل، يا خاص خودڪار اوزار استعمال ڪيا ويندا آهن.

گهڻو ڪري 1 سيل لائن کي هڪ وقت ۾ 1-2 منٽن لاءِ پگھلايو ويندو آهي، 37 ℃ پاڻي جي غسل ۾ نرميءَ سان گھمائيندي جيستائين شيشي ۾ صرف ٿوري برف باقي رهي ٿي ان کان اڳ جو انهن کي اڳ ۾ گرم ڪيل واڌ واري وچولي ۾ ڌوئي وڃي.

ڪجهه سيلن جهڙوڪ مماليا جي جنين لاءِ، سست گرمي انهن جي بقا لاءِ ضروري آهي.

سيل هاڻي سيل ڪلچر، سيل آئسوليشن، يا هيماتوپوئٽڪ اسٽيم سيلز جي صورت ۾ تيار آهن - مائيلوابليٽو ٿراپي کان اڳ ڊونر اسٽيم سيلز جي سالميت جي ضمانت لاءِ قابل عمل مطالعي.

ڪلچر ۾ پليٽنگ لاءِ سيل ڪنسنٽريشن کي طئي ڪرڻ لاءِ سيل ڳڻپ ڪرڻ لاءِ استعمال ٿيندڙ اڳواٽ ٿيل نموني جا ننڍا جزا وٺڻ عام عمل آهي. پوءِ توهان سيل آئسوليشن جي طريقيڪار جي نتيجن جو جائزو وٺي سگهو ٿا ۽ سيل جي حياتياتي هجڻ جو اندازو لڳائي سگهو ٿا.

ڪريوويئلز جي اسٽوريج لاءِ بهترين طريقا

ڪرائوويلز ۾ محفوظ ڪيل نمونن جي ڪامياب ڪرائوپريزرويشن پروٽوڪول ۾ ڪيترن ئي عنصرن تي منحصر آهي جنهن ۾ مناسب اسٽوريج ۽ رڪارڊ رکڻ شامل آهن.

• اسٽوريج جڳهن جي وچ ۾ سيلز کي ورهايو- جيڪڏهن مقدار اجازت ڏئي، شيشي جي وچ ۾ سيلز کي ورهايو ۽ انهن کي الڳ الڳ هنڌن تي ذخيرو ڪريو ته جيئن سامان جي ناڪامي جي ڪري نموني جي نقصان جو خطرو گهٽجي سگهي.
• ڪراس آلودگي کي روڪيو- بعد ۾ استعمال کان اڳ هڪ ڀيرو استعمال ٿيندڙ جراثيم کان پاڪ ڪرائيوجينڪ شيشي يا آٽو ڪليو چونڊيو.
• پنهنجي سيلن لاءِ مناسب سائيز جون شيشيون استعمال ڪريو.- شيشيون 1 ۽ 5 ملي ليٽر جي وچ ۾ مختلف مقدار ۾ اچن ٿيون. ٽٽڻ جي خطري کي گهٽائڻ لاءِ شيشيون وڌيڪ ڀرڻ کان پاسو ڪريو.
• اندروني يا ٻاهرين ڌاڳي وارا ڪرائيوجينڪ شيشي چونڊيو.- ڪجهه يونيورسٽين طرفان حفاظتي قدمن لاءِ اندروني طور تي ڌاڳي واري شيشي جي سفارش ڪئي وئي آهي - اهي ڀرڻ دوران يا مائع نائٽروجن ۾ ذخيرو ڪرڻ وقت آلودگي کي به روڪي سگهن ٿا.
• رساو کي روڪيو- ليڪ ٿيڻ ۽ آلودگي کي روڪڻ لاءِ اسڪرو ڪيپ يا او-رنگز ۾ ٺهيل ٻہ-انجيڪشن ٿيل سيل استعمال ڪريو.
• 2D بارڪوڊ ۽ ليبل شيشي استعمال ڪريو- ٽريڪ ايبلٽي کي يقيني بڻائڻ لاءِ، وڏي لکڻ واري علائقي سان شيشيون هر شيشي کي مناسب ليبل ڪرڻ جي قابل بڻائين ٿيون. 2D بارڪوڊ اسٽوريج مينيجمينٽ ۽ رڪارڊ رکڻ ۾ مدد ڪري سگھن ٿا. رنگين ڪوڊ ٿيل ڪيپس آسان سڃاڻپ لاءِ ڪارآمد آهن.
• مناسب اسٽوريج سار سنڀال- سيلز ضايع نه ٿيڻ کي يقيني بڻائڻ لاءِ، اسٽوريج برتنن کي مسلسل گرمي پد ۽ مائع نائٽروجن جي سطح جي نگراني ڪرڻ گهرجي. استعمال ڪندڙن کي غلطين کان خبردار ڪرڻ لاءِ الارم لڳائڻ گهرجن.

حفاظتي احتياط

جديد تحقيق ۾ مائع نائٽروجن عام عمل بڻجي چڪو آهي پر جيڪڏهن غلط استعمال ڪيو وڃي ته ان کي سنگين زخم جو خطرو آهي.

مائع نائٽروجن کي هٿ ڪرڻ وقت ٿڌ جي کاڄ، ساڙڻ ۽ ٻين خراب واقعن جي خطري کي گھٽ ڪرڻ لاءِ مناسب ذاتي حفاظتي سامان (PPE) پائڻ گهرجي. پائڻ

• ڪرائيوجينڪ دستانا
• ليبارٽري ڪوٽ
• اثر مزاحمتي مڪمل چهري واري شيلڊ جيڪا ڳچيءَ کي پڻ ڍڪي ٿي
• بند پيرن وارا بوٽ
• ڦڦڙن کان بچاءُ وارو پلاسٽڪ ايپرون

مائع نائٽروجن ريفريجريٽر کي سٺي هوادار علائقن ۾ رکڻ گهرجي ته جيئن دم گهٽجڻ جو خطرو گهٽجي وڃي - فرار ٿيل نائٽروجن هوا جي آڪسيجن کي بخارات بڻائي ٿو ۽ هٽائي ٿو. وڏي مقدار جي دڪانن ۾ گهٽ آڪسيجن الارم سسٽم هجڻ گهرجن.

مائع نائٽروجن کي هٿ ڪرڻ وقت جوڙي ۾ ڪم ڪرڻ مثالي آهي ۽ عام ڪم جي ڪلاڪن کان ٻاهر ان جو استعمال منع ڪيو وڃي.

توهان جي ڪم جي وهڪري کي سپورٽ ڪرڻ لاءِ ڪريوويئلز

سوزو ايس بايوميڊيڪل ڪمپني مختلف قسمن جي سيلز لاءِ توهان جي ڪرائوپريزرويشن جي ضرورتن کي پورو ڪندڙ شين جو وسيع انتخاب پيش ڪري ٿي. پورٽ فوليو ۾ ٽيوبن جي هڪ رينج ۽ جراثيم کان پاڪ ڪرائوويلز جي هڪ رينج شامل آهي.

اسان جا ڪرائوويئل آهن:

• ليب اسڪرو ڪيپ 0.5 ايم ايل 1.5 ايم ايل 2.0 ايم ايل ڪريووئل ڪرائيوجينڪ شيشي مخروطي هيٺان ڪريوٽيوب گيسڪٽ سان

  ● 0.5ml، 1.5ml، 2.0ml وضاحت، سکرٽ سان يا سکرٽ کان سواء
  ● مخروطي يا خود بيٺل ڊيزائن، جراثيم کان پاڪ يا غير جراثيم کان پاڪ ٻئي موجود آهن.
  ● اسڪرو ڪيپ ٽيوب طبي گريڊ پولي پروپيلين مان ٺهيل آهن.
  ● پي پي ڪريوٽيوب شيشي کي بار بار منجمد ۽ پگھلائي سگهجي ٿو.
  ● ٻاهرين ڪيپ ڊيزائن نموني جي علاج دوران آلودگي جي امڪان کي گهٽائي سگھي ٿي.
  ● اسڪرو ڪيپ ڪرائيوجينڪ ٽيوب استعمال لاءِ يونيورسل اسڪرو ڌاڳا
  ● ٽيوب سڀ کان عام روٽرز ۾ فٽ ٿين ٿا.
  ● ڪروجينڪ ٽيوب او-رنگ ٽيوب معياري 1 انچ ۽ 2 انچ، 48 ويل، 81 ويل، 96 ويل ۽ 100 ويل فريزر باڪس ۾ مناسب آهن.
  ● 121°C تائين آٽوڪليوبل ۽ -86°C تائين فريزيبل

  حصو نمبر	مواد	حجم	ڪيپرنگ	پي سي ايس/ٿيلهو	ٿيلها/ڪيس
  ACT05-BL-N جا حصا	PP	0.5 ايم ايل	ڪارو، پيلو، نيرو، ڳاڙهو، واڱڻائي، اڇو	500	10
  ACT15-BL-N جا حصا	PP	1.5 ايم ايل	ڪارو، پيلو، نيرو، ڳاڙهو، واڱڻائي، اڇو	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5 ايم ايل	ڪارو، پيلو، نيرو، ڳاڙهو، واڱڻائي، اڇو	500	10
  ACT20-BL-N جا حصا	PP	2.0 ايم ايل	ڪارو، پيلو، نيرو، ڳاڙهو، واڱڻائي، اڇو	500	10