Kryofläschenginn dacks fir d'kryogen Lagerung vu Zellkulturen an aner kritesche biologesche Materialien an Dewar-Kanäl mat flëssege Stéckstoff benotzt.

Et gi verschidde Schrëtt fir eng erfollegräich Konservéierung vun Zellen a flëssegem Stéckstoff. Wärend de Grondprinzip e luesen Afréiere ass, hänkt déi genee Technik vum Zelltyp an dem Kryoprotector of, deen benotzt gëtt. Et gi verschidde Sécherheetsaspekter a Best Practices, déi berécksiichtegt solle ginn, wann Zellen bei sou niddregen Temperaturen gelagert ginn.

Dëse Beitrag zielt drop of, en Iwwerbléck ze ginn, wéi Kryofläschen a flëssege Stéckstoff gelagert ginn.

Wat sinn Kryoflaschen

Kryo-Fläschchen si kleng, zougemaach Fläschchen, déi fir d'Lagerung vu flëssege Proben bei extrem niddregen Temperaturen entwéckelt sinn. Si suergen dofir, datt Zellen, déi am Kryoprotektiounsmëttel konservéiert sinn, net a direkten Kontakt mam flëssege Stéckstoff kommen, wouduerch de Risiko vu Zellfrakturen miniméiert gëtt a gläichzäiteg vum extremen Ofkillungseffekt vum flëssege Stéckstoff profitéiert gëtt.

D'Fläsche si meeschtens a verschiddene Volumen an Designen verfügbar – si kënnen intern oder extern mat engem Gewënn ausgestatt sinn, mat flaachem oder gerundetem Buedem. Steril an net-steril Formater si och verfügbar.

Wien benotztCyrovialenZellen a flëssege Stéckstoff späicheren

Eng Rei vun NHS- a private Laboratoiren, souwéi Fuerschungsinstituter, déi sech op Naselbstblutbanken, Epithelzellbiologie, Immunologie a Stammzellbiologie spezialiséiert hunn, benotze Kryofläschen fir Zellen ze kryokonservéieren.

Zellen, déi op dës Manéier konservéiert ginn, enthalen B- an T-Zellen, CHO-Zellen, hämatopoetesch Stamm- a Progenitorzellen, Hybridome, Darmzellen, Makrophagen, mesenchymal Stamm- a Progenitorzellen, Monozyten, Myelom, NK-Zellen a pluripotent Stammzellen.

Iwwersiicht iwwer d'Lagerung vu Kryofläschen a flëssegem Stéckstoff

Kryokonservatioun ass e Prozess, bei deem Zellen an aner biologesch Konstruktiounen duerch Ofkille op ganz niddreg Temperaturen erhale bleiwen. Zellen kënne Joer laang a flëssegem Stéckstoff gelagert ginn, ouni datt hir Zellvitalitéit verluer geet. Dëst ass eng Iwwersiicht vun de Prozeduren, déi benotzt ginn.

Zellvirbereedung

Déi genee Method fir d'Virbereedung vu Proben hänkt vum Zelltyp of, awer am Allgemengen ginn d'Zellen gesammelt a zentrifugéiert fir e zellräiche Pellet z'entwéckelen. Dëse Pellet gëtt dann am Iwwerstand resuspendéiert, gemëscht mat Kryoprotektant oder engem Kryokonservéierungsmedium.

Kryokonservatiounsmedium

Dëst Medium gëtt benotzt fir Zellen an den Niddregtemperaturëmfeld ze konservéieren, deenen se ausgesat sinn, andeems d'Bildung vun intra- an extrazelluläre Kristaller an domat den Zelltod hemmt. Hir Roll ass et, eng sécher, schützend Ëmwelt fir Zellen a Gewëss während dem Afréieren, Lagern an Optaue ze bidden.

E Medium wéi frësch gefruer Plasma (FFP), hepariniséiert Plasmalyt-Léisung oder serumfräi Léisunge ouni Déierkomponenten gëtt mat Kryoprotektiven wéi Dimethylsulfoxid (DMSO) oder Glycerol gemëscht.

De nei verflëssege Proufpellet gëtt a Polypropylen-Kryofläschen, wéi z. B.Kryogenesch Späicherfläschchen fir Suzhou Ace Biomedical Company.

Et ass wichteg, d'Kryofläschen net ze iwwerfëllen, well dëst de Risiko vu Rëss an dem méigleche Fräiloosse vum Inhalt erhéicht (1).

Kontrolléiert Gefrierquote

Am Allgemengen gëtt eng lues kontrolléiert Gefrierquote fir déi erfollegräich Kryokonservatioun vun Zellen benotzt.

Nodeems d'Prouwe a kryogen Fläschchen opgedeelt goufen, gi se op naass Äis oder an engem 4℃ Frigo geluecht an d'Afréiere gëtt bannent 5 Minutten ugefaangen. Als allgemeng Richtlinn ginn d'Zellen mat enger Geschwindegkeet vun -1 bis -3 pro Minutt ofgekillt (2). Dëst gëtt mat engem programméierbare Killsystem erreecht oder andeems d'Fläschchen an eng isoléiert Këscht an engem kontrolléierte Gefrierschrank mat -70°C bis -90°C placéiert ginn.

Transfer op flëssege Stéckstoff

Déi gefruer kryogen Fläsche ginn dann fir onbestëmmt Zäit an en Tank mat flëssegem Stéckstoff transferéiert, virausgesat datt eng Temperatur vun ënner -135 ℃ bäibehale gëtt.

Dës ultra-niddreg Temperaturen kënnen duerch Tauchen an de flëssegen oder Gasphas-Stickstoff erreecht ginn.

Flësseg oder Dampphas?

D'Lagerung a flësseger Phas-Stickstoff ass bekannt dofir, datt d'Kalttemperatur absolut konsequent ass, awer gëtt dacks aus de folgende Grënn net recommandéiert:

• De Besoin fir grouss Quantitéiten (Déift) vu flëssegem Stéckstoff, wat eng potenziell Gefor duerstellt. Verbrennunge oder Erstickung doduerch sinn e reellt Risiko.
• Dokumentéiert Fäll vu Kräizkontaminatioun duerch infektiéis Agenten wéi Aspergillus, Hep B a Virusverbreedung iwwer flëssegt Stéckstoffmedium (2,3)
• D'Méiglechkeet, datt flëssege Stéckstoff beim Tauchen an d'Fläschchen leckt. Wann en aus dem Lager geholl a bis op Raumtemperatur erhëtzt gëtt, dehnt sech de Stéckstoff séier aus. Dofir kann d'Fläschchen zerbriechen, wann se aus dem Lager mat flëssegem Stéckstoff erausgeholl gëtt, wat zu enger Gefor féiert, souwuel duerch fléiend Brochstécker wéi och duerch den Inhalt (1, 4).

Aus dëse Grënn ass d'Lagerung bei ultra-niddreger Temperatur meeschtens a Gasphas-Stickstoff. Wann d'Prouwe flësseg gelagert musse ginn, solle speziell Kryoflex-Schläich benotzt ginn.

Den Nodeel vun der Gasphas ass, datt e vertikale Temperaturgradient optriede kann, wat zu Temperaturschwankungen tëscht -135℃ an -190℃ féiert. Dëst erfuerdert eng virsiichteg an suergfälteg Iwwerwaachung vum flëssege Stéckstoffniveau an den Temperaturschwankungen (5).

Vill Hiersteller empfeelen, datt Kryofläschen fir d'Lagerung bis zu -135 ℃ oder nëmme fir d'Benotzung an der Gasphas gëeegent sinn.

Är kryokonservéiert Zellen opdauen

D'Optauprozedur ass stresseg fir eng gefruer Kultur, an eng korrekt Handhabung an Technik si noutwendeg fir eng optimal Viabilitéit, Erhuelung a Funktionalitéit vun den Zellen ze garantéieren. Déi genee Optauprotokoller hänken vun de spezifeschen Zelltypen of. Wéi och ëmmer, e séiert Optau gëllt als Standard fir:

• Reduzéiert all Impakt op d'zellulär Erhuelung
• Hëlleft d'Beliichtungszäit mat de geléisten Substanzen am Gefriermedium ze reduzéieren
• Miniméiert all Schued duerch Äisrekristalliséierung

Waasserbäder, Perlbäder oder spezialiséiert automatiséiert Instrumenter ginn dacks benotzt fir Proben opzedauen.

Meeschtens gëtt 1 Zelllinn gläichzäiteg fir 1-2 Minutten opgetaut, andeems se sanft an engem 37℃ Waasserbad gedréint gëtt, bis just nach e bëssen Äis am Fläschchen ass, ier se an engem virgewiermten Wuesstumsmedium gewäsch ginn.

Fir verschidde Zellen, wéi zum Beispill Säugetierembryoen, ass eng lues Erwiermung essentiell fir hiert Iwwerliewe.

D'Zellen sinn elo prett fir Zellkultur, Zellisolatioun oder, am Fall vun hämatopoetesche Stammzellen, Viabilitéitsstudien, fir d'Integritéit vun den Donorstammzellen virun der myeloablativer Therapie ze garantéieren.

Et ass üblech, kleng Aliquoten vun der virgewaschener Prouf ze huelen, déi fir eng Zellzuelung benotzt gëtt, fir d'Zellkonzentratioune fir d'Ausplattung an der Kultur ze bestëmmen. Dir kënnt dann d'Resultater vun den Zellisolatiounsprozedure bewäerten an d'Zellviabilitéit bestëmmen.

Best Practices fir d'Lagerung vu Kryofläschen

Déi erfollegräich Kryokonservatioun vu Proben, déi a Kryofläschen gelagert sinn, hänkt vu ville Elementer am Protokoll of, dorënner déi richteg Lagerung an d'Opzeechnunge vun de Protokoller.

• Zellen tëscht Späicherplazen opdeelen– Wann d'Volumen et erlaben, trennt d'Zellen tëscht de Fläschchen a späichert se op getrennten Plazen, fir de Risiko vu Proufverloscht wéinst Ausrüstungsausfäll ze reduzéieren.
• Kräizkontaminatioun verhënneren– Wielt steril kryogen Fläschchen fir een eenzege Gebrauch oder en Autoklav ier Dir et spéider benotzt
• Benotzt Fläschchen vun der richteger Gréisst fir Är Zellen– Fläschchen ginn et a Volumen tëscht 1 a 5 ml. Vermeit et, d'Fläschchen ze iwwerfëllen, fir de Risiko vu Rëss ze reduzéieren.
• Wielt kryogen Fläschchen mat internen oder externen Gewinde– Fläsche mat bannenzegem Gewinde gi vu verschiddenen Universitéiten aus Sécherheetsmoossname recommandéiert – si kënnen och Kontaminatioun beim Fëllen oder bei der Lagerung am flëssege Stéckstoff verhënneren.
• Leckage verhënneren- Benotzt bi-injizéiert Dichtungen, déi an de Schraufverschluss oder O-Réng gegoss sinn, fir Leckage a Kontaminatioun ze vermeiden.
• Benotzt 2D-Barcoden a etikettéiert Fläschchen– fir d'Verfolgbarkeet ze garantéieren, erlaben Fläschchen mat grousse Schreifflächen, all Fläsch adäquat ze beschrëften. 2D-Barcoden kënnen beim Lagerverwaltung an der Opzeechnung hëllefen. Faarfkodéiert Deckel si nëtzlech fir eng méi einfach Identifikatioun.
• Ausreechend Ënnerhalt vum Lager- Fir sécherzestellen, datt Zellen net verluer ginn, sollten d'Späicherbehälter d'Temperatur an den Niveau vu flëssegem Stéckstoff permanent iwwerwaachen. Et sollten Alarmer installéiert ginn, fir d'Benotzer iwwer Feeler z'informéieren.

Sécherheetsmoossnamen

Flëssege Stickstoff ass an der moderner Fuerschung üblech Praxis ginn, awer bréngt e Risiko vu schwéiere Verletzungen mat sech, wann et falsch benotzt gëtt.

Déi entspriechend perséinlech Schutzausrüstung (PSA) soll gedroe ginn, fir de Risiko vu Frascht, Verbrennungen an aner negativen Incidenter beim Ëmgang mat flëssege Stéckstoff ze minimiséieren.

• Kryogen Handschuesch
• Labormantel
• Schlagfeste Vollgesiichtsschutz, deen och den Hals ofdeckt
• Zougemaach Schong
• Spritzwasserdichte Plastikschürze

Flëssege Stéckstoff-Kühlschränke sollten a gutt gelëfte Beräicher placéiert ginn, fir de Risiko vun Erstickung ze minimiséieren – entkomm Stéckstoff verdampft a verdrängt atmosphäresche Sauerstoff. Grouss Lagerraim sollten Alarmsystemer fir Sauerstoffmangel hunn.

D'Zesummenaarbecht zu zwee beim Ëmgang mat flëssege Stéckstoff ass ideal an d'Benotzung ausserhalb vun den normalen Aarbechtszäiten sollt verbueden sinn.

Kryofläschen fir Äre Workflow z'ënnerstëtzen

D'Firma Suzhou Ace Biomedical bitt eng grouss Auswiel u Produkter, déi Är Kryokonservéierungsbedürfnisser fir verschidden Zelltypen erfëllen. D'Portfolio enthält eng Rei vu Réier souwéi eng Rei vu sterile Kryoflaschen.

Eis Kryofläschen sinn:

• Laborschraufverschluss 0,5 ml 1,5 ml 2,0 ml Kryoflasche Kryogenfläschchen Konischen Buedem Kryoréier mat Dichtung

  ● Spezifikatioun vun 0,5 ml, 1,5 ml, 2,0 ml, mat oder ouni Rock
  ● Konischen oder selwerstännegen Design, steril oder net steril sinn allebéid verfügbar
  ● Schraufverschlussröhrchen sinn aus Polypropylen vun medizinescher Qualitéit gemaach
  ● PP Kryotube-Fläschcher kënnen ëmmer erëm agefruer an opgetaut ginn
  ● Den Design vum externen Deckel kann d'Wahrscheinlechkeet vun der Kontaminatioun während der Proufbehandlung reduzéieren.
  ● Kryogenröhrchen mat Schraufverschluss Universalgewinde fir d'Benotzung
  ● Réier passen op déi meescht üblech Rotoren
  ● Kryogenesch Réier-O-Réng passen zu Standard-1-Zoll- an 2-Zoll-, 48-Well-, 81-Well-, 96-Well- an 100-Well-Gefrierschranken
  ● Autoklavéierbar bis 121°C a gefrierbar bis -86°C

  DEEL NR.	MATERIAL	VOLUME	CAPFAARW	Stéck/Täsch	Täsch/Këscht
  ACT05-BL-N	PP	0,5 ml	Schwaarz, Giel, Blo, Rout, Violett, Wäiss	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1,5 ml	Schwaarz, Giel, Blo, Rout, Violett, Wäiss	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1,5 ml	Schwaarz, Giel, Blo, Rout, Violett, Wäiss	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2,0 ml	Schwaarz, Giel, Blo, Rout, Violett, Wäiss	500	10