Կրիովիալներսովորաբար օգտագործվում են բջջային գծերի և այլ կարևոր կենսաբանական նյութերի կրիոգեն պահպանման համար՝ հեղուկ ազոտով լցված Դյուար տարաներում։

Բջիջների հեղուկ ազոտի մեջ հաջողությամբ պահպանման համար կան մի քանի փուլեր։ Չնայած հիմնական սկզբունքը դանդաղ սառեցումն է, կիրառվող ճշգրիտ տեխնիկան կախված է բջջի տեսակից և օգտագործված կրիոպաշտպանիչից։ Բջիջները նման ցածր ջերմաստիճաններում պահելիս կան մի շարք անվտանգության նկատառումներ և լավագույն գործելակերպեր, որոնք պետք է հաշվի առնել։

Այս գրառումը նպատակ ունի ներկայացնելու, թե ինչպես են կրիոօվիալները պահվում հեղուկ ազոտի մեջ։

Ի՞նչ են կրիովիալները

Կրիովիրալները փոքր, կափարիչով սրվակներ են, որոնք նախատեսված են հեղուկ նմուշները չափազանց ցածր ջերմաստիճաններում պահելու համար: Դրանք ապահովում են, որ կրիոպաշտպանիչ նյութում պահված բջիջները չմտնեն հեղուկ ազոտի հետ անմիջական շփման մեջ, նվազագույնի հասցնելով բջջային կոտրվածքների ռիսկը՝ միաժամանակ օգտվելով հեղուկ ազոտի ծայրահեղ սառեցման ազդեցությունից:

Սրվակները սովորաբար հասանելի են տարբեր ծավալներով և դիզայնով. դրանք կարող են ներքին կամ արտաքին պտուտակված լինել՝ հարթ կամ կլորացված հատակով: Հասանելի են նաև ստերիլ և ոչ ստերիլ ձևաչափեր:

Ո՞վ է օգտագործումՍիրովիալներբջիջները հեղուկ ազոտի մեջ պահելը

Ազգային առողջապահական ծառայության (NHS) և մասնավոր լաբորատորիաների մի շարք, ինչպես նաև պորտալարի արյան բանկային գործունեության, էպիթելային բջիջների կենսաբանության, իմունոլոգիայի և ցողունային բջիջների կենսաբանության մասնագիտացված հետազոտական ​​հաստատություններ օգտագործում են կրիովասպենսեր՝ բջիջները կրիոպահպանելու համար։

Այս կերպ պահպանված բջիջների թվում են B և T բջիջները, CHO բջիջները, արյունաստեղծ ցողունային և նախորդ բջիջները, հիբրիդոմները, աղիքային բջիջները, մակրոֆագերը, մեզենքիմալ ցողունային և նախորդ բջիջները, մոնոցիտները, միելոման, NK բջիջները և պլյուրիպոտենտ ցողունային բջիջները։

Հեղուկ ազոտի մեջ կրիովիալները պահելու ընդհանուր պատկերացում

Կրիոպահպանումը գործընթաց է, որը պահպանում է բջիջները և այլ կենսաբանական կառուցվածքները՝ դրանք սառեցնելով շատ ցածր ջերմաստիճաններում: Բջիջները կարող են տարիներ շարունակ պահվել հեղուկ ազոտի մեջ՝ առանց բջիջների կենսունակությունը կորցնելու: Սա կիրառվող ընթացակարգերի ուրվագիծն է:

Բջջային պատրաստում

Նմուշների պատրաստման ճշգրիտ մեթոդը կտարբերվի՝ կախված բջջի տեսակից, բայց ընդհանուր առմամբ, բջիջները հավաքվում և ցենտրիֆուգացվում են՝ բջիջներով հարուստ գնդիկ ստանալու համար: Այնուհետև այս գնդիկը վերստին սուսպենդացվում է կրիոպաշտպանիչի կամ կրիոպահպանման միջավայրի հետ խառնված վերին շերտում:

Կրիոպահպանման միջավայր

Այս միջավայրն օգտագործվում է բջիջները ցածր ջերմաստիճանային միջավայրերում պահպանելու համար, որոնց դրանք կենթարկվեն՝ կանխելով ներբջջային և արտաբջջային բյուրեղների առաջացումը և, հետևաբար, բջջային մահը: Դրանց դերն է բջիջների և հյուսվածքների համար անվտանգ, պաշտպանիչ միջավայր ապահովել սառեցման, պահպանման և հալեցման գործընթացների ընթացքում:

Թարմ սառեցված պլազման (FFP), հեպարինացված պլազմալիտի լուծույթը կամ շիճուկից զերծ, կենդանական բաղադրիչներից զերծ լուծույթները խառնվում են կրիոպաշտպանիչների, ինչպիսիք են դիմեթիլսուլֆօքսիդը (DMSO) կամ գլիցերինը, հետ։

Վերահեղուկացված նմուշի գնդիկը ալիքվոտավորվում է պոլիպրոպիլենային կրիոօվալների մեջ, ինչպիսիք են՝Suzhou Ace Biomedical ընկերության կրիոգենային պահեստավորման սրվակներ.

Կարևոր է չլցնել կրիոօվալները չափից շատ, քանի որ դա կմեծացնի ճաքերի առաջացման և պարունակության հնարավոր արտանետման ռիսկը (1):

Կառավարվող սառեցման արագություն

Ընդհանուր առմամբ, բջիջների հաջող կրիոպահպանման համար կիրառվում է դանդաղ, վերահսկվող սառեցման արագություն։

Նմուշները կրիոգեն սրվակների մեջ ալիքվոտավորելուց հետո, դրանք տեղադրվում են թաց սառույցի վրա կամ 4℃ ջերմաստիճանով սառնարանում, և սառեցման գործընթացը սկսվում է 5 րոպեի ընթացքում: Որպես ընդհանուր ուղեցույց, բջիջները սառեցվում են րոպեում -1-ից -3 արագությամբ (2): Սա իրականացվում է ծրագրավորվող սառեցուցիչի միջոցով կամ սրվակները տեղադրելով մեկուսացված տուփի մեջ, որը տեղադրված է -70°C-ից -90°C կարգավորվող արագությամբ սառնարանում:

Տեղափոխում հեղուկ ազոտի

Սառեցված կրիոգեն սրվակները այնուհետև անորոշ ժամանակով տեղափոխվում են հեղուկ ազոտի բաք, եթե պահպանվում է -135℃-ից ցածր ջերմաստիճան։

Այս գերցածր ջերմաստիճանները կարելի է ստանալ հեղուկ կամ գոլորշու փուլի ազոտի մեջ ընկղմելով։

Հեղուկ, թե՞ գոլորշու փուլ։

Հեղուկ փուլում ազոտի պահպանումը հայտնի է սառը ջերմաստիճանը բացարձակ կայունությամբ պահպանելու համար, բայց հաճախ խորհուրդ չի տրվում հետևյալ պատճառներով.

• Հեղուկ ազոտի մեծ ծավալների (խորության) անհրաժեշտությունը, որը պոտենցիալ վտանգ է ներկայացնում: Այրվածքները կամ շնչահեղձությունը իրական ռիսկ են:
• Հեղուկ ազոտային միջավայրի միջոցով վարակիչ նյութերի, ինչպիսիք են ասպերգիլուսը, հեպատիտ B-ն, և վիրուսի տարածման փաստաթղթավորված դեպքեր (2,3):
• Հեղուկ ազոտի ներթափանցման հավանականությունը սրվակների մեջ ընկղմման ընթացքում։ Պահեստից հանելուց և սենյակային ջերմաստիճանի հասցնելուց հետո ազոտը արագորեն ընդարձակվում է։ Հետևաբար, սրվակը կարող է կոտրվել հեղուկ ազոտի պահեստից հանելիս՝ ստեղծելով վտանգ ինչպես թռչող բեկորներից, այնպես էլ պարունակության հետ շփումից (1, 4):

Այս պատճառներով, գերցածր ջերմաստիճանում պահպանումը սովորաբար կատարվում է գոլորշու փուլում գտնվող ազոտի մեջ: Երբ նմուշները պետք է պահվեն հեղուկ փուլում, պետք է օգտագործվեն մասնագիտացված կրիոֆլեքսային խողովակներ:

Գոլորշու փուլի թերությունն այն է, որ կարող է առաջանալ ուղղահայաց ջերմաստիճանային գրադիենտ, որի արդյունքում ջերմաստիճանի տատանումները կարող են լինել -135℃-ից մինչև -190℃: Սա պահանջում է հեղուկ ազոտի մակարդակի և ջերմաստիճանի տատանումների ուշադիր և մանրակրկիտ մոնիթորինգ (5):

Շատ արտադրողներ խորհուրդ են տալիս, որ կրիովակուալները հարմար լինեն մինչև -135℃ ջերմաստիճանում պահպանման կամ միայն գոլորշու փուլում օգտագործելու համար։

Ձեր կրիոպահպանված բջիջների հալեցումը

Հալեցման գործընթացը սթրեսային է սառեցված մշակույթի համար, և բջիջների օպտիմալ կենսունակությունը, վերականգնումը և ֆունկցիոնալությունը ապահովելու համար անհրաժեշտ են պատշաճ մշակում և տեխնիկա: Հալեցման ճշգրիտ արձանագրությունները կախված կլինեն բջիջների կոնկրետ տեսակներից: Այնուամենայնիվ, արագ հալեցումը համարվում է ստանդարտ՝

• Նվազեցրեք բջջային վերականգնման վրա ցանկացած ազդեցություն
• Օգնեք կրճատել սառեցման միջավայրում առկա լուծիչների ազդեցության ժամանակը
• Նվազագույնի հասցրեք ցանկացած վնաս սառույցի վերաբյուրեղացման միջոցով

Նմուշները հալեցնելու համար սովորաբար օգտագործվում են ջրային լոգարաններ, ուլունքային լոգարաններ կամ մասնագիտացված ավտոմատացված գործիքներ:

Ամենից հաճախ մեկ բջջային գիծ հալեցվում է 1-2 րոպե՝ 37℃ ջրային բաղնիքում նրբորեն պտտեցնելով, մինչև սրվակի մեջ մնա մի փոքր սառույց, նախքան դրանք լվանալը նախապես տաքացրած աճեցման միջավայրում։

Որոշ բջիջների, ինչպիսիք են կաթնասունների սաղմերը, դանդաղ տաքացումը կարևոր է դրանց գոյատևման համար։

Բջիջներն այժմ պատրաստ են բջջային կուլտուրայի, բջիջների մեկուսացման, կամ, արյունաստեղծ ցողունային բջիջների դեպքում, կենսունակության ուսումնասիրությունների՝ միելոաբլատիվ թերապիայից առաջ դոնոր ցողունային բջիջների ամբողջականությունն ապահովելու համար։

Բջիջների կոնցենտրացիաները որոշելու համար բջիջների հաշվարկի համար օգտագործվող նախապես լվացված նմուշից սովորական պրակտիկա է վերցնել փոքր ալիքվոտներ՝ կուլտուրայում տեղադրելու համար: Այնուհետև կարող եք գնահատել բջիջների մեկուսացման ընթացակարգերի արդյունքները և որոշել բջիջների կենսունակությունը:

Կրիովիալների պահպանման լավագույն մեթոդները

Կրիոանոթներում պահվող նմուշների հաջող կրիոպահպանումը կախված է արձանագրության բազմաթիվ տարրերից, այդ թվում՝ պատշաճ պահպանումից և գրառումների պահպանումից:

• Բջիջները բաժանեք պահեստավորման վայրերի միջև– Եթե ծավալները թույլ են տալիս, բաժանեք բջիջները սրվակների միջև և պահեք դրանք առանձին վայրերում՝ սարքավորումների խափանումների պատճառով նմուշի կորստի ռիսկը նվազեցնելու համար։
• Կանխել խաչաձև աղտոտումը– Հետագա օգտագործումից առաջ ընտրեք միանգամյա օգտագործման ստերիլ կրիոգեն սրվակներ կամ ավտոկլավ
• Օգտագործեք համապատասխան չափի սրվակներ ձեր բջիջների համար– սրվակները լինում են 1-ից 5 մլ ծավալի։ Խուսափեք սրվակները չափից շատ լցնելուց՝ ճաքերի առաջացման ռիսկը նվազեցնելու համար։
• Ընտրեք ներքին կամ արտաքին պտուտակով կրիոգեն սրվակներ– Որոշ համալսարաններ անվտանգության նկատառումներից ելնելով խորհուրդ են տալիս օգտագործել ներքին պտուտակով սրվակներ, որոնք կարող են նաև կանխել աղտոտումը լցման ժամանակ կամ հեղուկ ազոտի մեջ պահելու ժամանակ։
• Կանխել արտահոսքը- Օգտագործեք պտուտակային կափարիչի կամ O-օղակների մեջ ձուլված երկկողմանի ներարկված կնիքներ՝ արտահոսքը և աղտոտումը կանխելու համար:
• Օգտագործեք 2D շտրիխ կոդեր և պիտակավորեք սրվակները– հետագծելիությունն ապահովելու համար, մեծ գրելու մակերեսով սրվակները հնարավորություն են տալիս յուրաքանչյուր սրվակի համար պատշաճ կերպով պիտակավորել: 2D շտրիխ կոդերը կարող են օգնել պահեստավորման կառավարմանը և գրառումների պահպանմանը: Գունավոր կոդավորված կափարիչները օգտակար են ավելի հեշտ նույնականացման համար:
• Պահեստավորման պատշաճ պահպանում- Բջիջների կորստից խուսափելու համար պահեստավորման տարաները պետք է անընդհատ վերահսկեն ջերմաստիճանը և հեղուկ ազոտի մակարդակը: Պետք է տեղադրվեն ազդանշանային սարքեր՝ օգտագործողներին սխալների մասին տեղեկացնելու համար:

Անվտանգության միջոցառումներ

Հեղուկ ազոտը ժամանակակից հետազոտություններում դարձել է տարածված պրակտիկա, բայց սխալ օգտագործման դեպքում այն ​​լուրջ վնասվածքի ռիսկ է պարունակում։

Հեղուկ ազոտի հետ աշխատելիս պետք է կրել համապատասխան անհատական ​​պաշտպանիչ միջոցներ (ԱՊՄ), որպեսզի նվազագույնի հասցվի ցրտահարության, այրվածքների և այլ անբարենպաստ միջադեպերի ռիսկը։

• Կրիոգեն ձեռնոցներ
• Լաբորատոր վերարկու
• Հարվածակայուն դեմքի ամբողջական վահան, որը նաև ծածկում է պարանոցը
• Փակ քթով կոշիկներ
• Ջրցողակայուն պլաստիկե գոգնոց

Հեղուկ ազոտ պարունակող սառնարանները պետք է տեղադրվեն լավ օդափոխվող տարածքներում՝ խեղդման ռիսկը նվազագույնի հասցնելու համար. արտահոսած ազոտը գոլորշիանում է և դուրս է մղում մթնոլորտային թթվածինը: Մեծ ծավալի պահեստները պետք է ունենան թթվածնի ցածր մակարդակի ահազանգման համակարգեր:

Հեղուկ ազոտի հետ աշխատելիս իդեալական է զույգերով աշխատելը, և դրա օգտագործումը աշխատանքային ժամերից դուրս պետք է արգելվի։

Կրիովիալներ՝ ձեր աշխատանքային հոսքը ապահովելու համար

«Սուչժոու Էյս» կենսաբժշկական ընկերությունն առաջարկում է արտադրանքի լայն տեսականի, որը բավարարում է ձեր տարբեր տեսակի բջիջների կրիոպահպանման կարիքները: Պորտֆոլիոն ներառում է ինչպես խողովակների, այնպես էլ ստերիլ կրիոօվիալների լայն տեսականի:

Մեր կրիովիալներն են՝

• Լաբորատոր պտուտակային կափարիչ 0.5 մլ 1.5 մլ 2.0 մլ կրիոգենային կրիոգեն սրվակներ կոնաձև հատակով կրիոխողովակ՝ միջադիրով

  ● 0.5մլ, 1.5մլ, 2.0մլ սպեցիֆիկացիա, կիսաշրջազգեստով կամ առանց կիսաշրջազգեստի
  ● Հասանելի են կոնաձև կամ ինքնուրույն կանգնած դիզայն, ստերիլ կամ ոչ ստերիլ
  ● Պտուտակային կափարիչով խողովակները պատրաստված են բժշկական որակի պոլիպրոպիլենից
  ● PP կրիոտուբային սրվակները կարող են բազմիցս սառեցվել և հալեցվել
  ● Արտաքին կափարիչի դիզայնը կարող է նվազեցնել աղտոտման հավանականությունը նմուշի մշակման ընթացքում։
  ● Պտուտակային կափարիչով կրիոգեն խողովակներ Օգտագործման համար ունիվերսալ պտուտակային պարույրներ
  ● Խողովակները համապատասխանում են ամենատարածված ռոտորներին
  ● Կրիոգենային խողովակաձև օղակաձև խողովակները համապատասխանում են ստանդարտ 1 դյույմանոց և 2 դյույմանոց, 48, 81, 96 և 100 խորանարդանոց սառցարանային տուփերին
  ● Ավտոկլավացվում է մինչև 121°C և սառեցվում է մինչև -86°C

  Մասի համարը	Նյութ	ՀԶՈՐՈՒԹՅՈՒՆ	ԳԱԱԳՈՒՅՆ	ՀԴՄ/ՊԱՅՈՒՍԱԿ	ՊԱՅՈՒՍԱԿՆԵՐ/ՊԱՏՅԱՆՆԵՐ
  ACT05-BL-N	PP	0.5 մլ	Սև, Դեղին, Կապույտ, Կարմիր, Մանուշակագույն, Սպիտակ	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5 մլ	Սև, Դեղին, Կապույտ, Կարմիր, Մանուշակագույն, Սպիտակ	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5 մլ	Սև, Դեղին, Կապույտ, Կարմիր, Մանուշակագույն, Սպիտակ	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0 մլ	Սև, Դեղին, Կապույտ, Կարմիր, Մանուշակագույն, Սպիտակ	500	10