ક્રાયોવિયલસામાન્ય રીતે પ્રવાહી નાઇટ્રોજનથી ભરેલા દેવરમાં કોષ રેખાઓ અને અન્ય મહત્વપૂર્ણ જૈવિક પદાર્થોના ક્રાયોજેનિક સંગ્રહ માટે ઉપયોગમાં લેવાય છે.

પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં કોષોના સફળ જાળવણીમાં ઘણા તબક્કાઓ સામેલ છે. જ્યારે મૂળભૂત સિદ્ધાંત ધીમા ફ્રીઝિંગનો છે, ત્યારે ઉપયોગમાં લેવાતી ચોક્કસ તકનીક કોષના પ્રકાર અને ઉપયોગમાં લેવાતા ક્રાયોપ્રોટેક્ટન્ટ પર આધાર રાખે છે. આવા નીચા તાપમાને કોષોનો સંગ્રહ કરતી વખતે ધ્યાનમાં લેવા માટે ઘણી સલામતી બાબતો અને શ્રેષ્ઠ પદ્ધતિઓ છે.

આ પોસ્ટનો હેતુ ક્રાયોવિયલ્સને પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં કેવી રીતે સંગ્રહિત કરવામાં આવે છે તેની ઝાંખી આપવાનો છે.

ક્રાયોવિયલ શું છે?

ક્રાયોવિયલ એ નાના, ઢાંકેલા શીશીઓ છે જે અત્યંત નીચા તાપમાને પ્રવાહી નમૂનાઓ સંગ્રહિત કરવા માટે રચાયેલ છે. તેઓ ખાતરી કરે છે કે ક્રાયોપ્રોટેક્ટન્ટમાં સાચવેલ કોષો પ્રવાહી નાઇટ્રોજનના સીધા સંપર્કમાં ન આવે, જે કોષીય ફ્રેક્ચરનું જોખમ ઘટાડે છે જ્યારે પ્રવાહી નાઇટ્રોજનની ભારે ઠંડક અસરથી લાભ મેળવે છે.

આ શીશીઓ સામાન્ય રીતે વિવિધ કદ અને ડિઝાઇનમાં ઉપલબ્ધ હોય છે - તે સપાટ અથવા ગોળાકાર તળિયા સાથે આંતરિક અથવા બાહ્ય રીતે થ્રેડેડ હોઈ શકે છે. જંતુરહિત અને બિન-જંતુરહિત ફોર્મેટ પણ ઉપલબ્ધ છે.

કોણ વાપરે છેસાયરોવિયલ્સપ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં કોષોનો સંગ્રહ કરવો

NHS અને ખાનગી પ્રયોગશાળાઓની શ્રેણી, તેમજ કોર્ડ બ્લડ બેંકિંગ, એપિથેલિયલ સેલ બાયોલોજી, ઇમ્યુનોલોજી અને સ્ટેમ સેલ બાયોલોજીમાં વિશેષતા ધરાવતી સંશોધન સંસ્થાઓ કોષોને ક્રાયોપ્રિઝર્વ કરવા માટે ક્રાયોવિયલનો ઉપયોગ કરે છે.

આ રીતે સાચવવામાં આવેલા કોષોમાં B અને T કોષો, CHO કોષો, હિમેટોપોએટીક સ્ટેમ અને પ્રોજેનિટર કોષો, હાઇબ્રિડોમાસ, આંતરડાના કોષો, મેક્રોફેજ, મેસેનકાયમલ સ્ટેમ અને પ્રોજેનિટર કોષો, મોનોસાઇટ્સ, માયલોમા, NK કોષો અને પ્લુરીપોટેન્ટ સ્ટેમ કોષોનો સમાવેશ થાય છે.

પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં ક્રાયોવિયલ્સને કેવી રીતે સંગ્રહિત કરવા તેની ઝાંખી

ક્રાયોપ્રિઝર્વેશન એ એક પ્રક્રિયા છે જે કોષો અને અન્ય જૈવિક રચનાઓને ખૂબ જ ઓછા તાપમાને ઠંડુ કરીને સાચવે છે. કોષોને પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં વર્ષો સુધી સંગ્રહિત કરી શકાય છે અને કોષની કાર્યક્ષમતા ગુમાવી શકાતી નથી. આ ઉપયોગમાં લેવાતી પ્રક્રિયાઓની રૂપરેખા છે.

કોષ તૈયારી

નમૂનાઓ તૈયાર કરવાની ચોક્કસ પદ્ધતિ કોષના પ્રકાર પર આધાર રાખીને બદલાય છે, પરંતુ સામાન્ય રીતે, કોષો એકત્રિત કરવામાં આવે છે અને કોષ-સમૃદ્ધ પેલેટ વિકસાવવા માટે સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવે છે. આ પેલેટને પછી ક્રાયોપ્રોટેક્ટન્ટ અથવા ક્રાયોપ્રિઝર્વેશન માધ્યમ સાથે મિશ્રિત સુપરનેટન્ટમાં ફરીથી સસ્પેન્ડ કરવામાં આવે છે.

ક્રાયોપ્રિઝર્વેશન માધ્યમ

આ માધ્યમનો ઉપયોગ કોષોને નીચા-તાપમાનવાળા વાતાવરણમાં સાચવવા માટે થાય છે જેનાથી તેઓ કોષની અંદર અને બાહ્યકોષીય સ્ફટિકોના નિર્માણને અટકાવી શકે છે અને પરિણામે કોષ મૃત્યુ પામે છે. તેમની ભૂમિકા ઠંડક, સંગ્રહ અને પીગળવાની પ્રક્રિયાઓ દરમિયાન કોષો અને પેશીઓ માટે સલામત, રક્ષણાત્મક વાતાવરણ પૂરું પાડવાની છે.

ફ્રેશ ફ્રોઝન પ્લાઝ્મા (FFP), હેપરિનાઇઝ્ડ પ્લાઝ્માલાઇટ સોલ્યુશન અથવા સીરમ-મુક્ત, પ્રાણી ઘટક-મુક્ત સોલ્યુશન જેવા માધ્યમને ડાયમિથાઇલ સલ્ફોક્સાઇડ (DMSO) અથવા ગ્લિસરોલ જેવા ક્રાયોપ્રોટેક્ટન્ટ્સ સાથે મિશ્રિત કરવામાં આવે છે.

રિ-લિક્વિફાઇડ સેમ્પલ પેલેટને પોલીપ્રોપીલિન ક્રાયોવિયલ્સમાં વિભાજીત કરવામાં આવે છે જેમ કેસુઝોઉ એસ બાયોમેડિકલ કંપની ક્રાયોજેનિક સ્ટોરેજ શીશીઓ.

ક્રાયોવિયલ્સને વધુ પડતું ન ભરવું મહત્વપૂર્ણ છે કારણ કે આનાથી તિરાડ પડવાનું અને સામગ્રી બહાર આવવાનું જોખમ વધશે (1).

નિયંત્રિત ફ્રીઝ રેટ

સામાન્ય રીતે, કોષોના સફળ ક્રાયોપ્રિઝર્વેશન માટે ધીમા નિયંત્રિત ફ્રીઝ રેટનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે.

નમૂનાઓને ક્રાયોજેનિક શીશીઓમાં ઓગાળ્યા પછી, તેમને ભીના બરફ પર અથવા 4℃ રેફ્રિજરેટરમાં મૂકવામાં આવે છે અને 5 મિનિટમાં ફ્રીઝિંગ પ્રક્રિયા શરૂ થાય છે. સામાન્ય માર્ગદર્શિકા તરીકે, કોષોને -1 થી -3 પ્રતિ મિનિટના દરે ઠંડુ કરવામાં આવે છે (2). આ પ્રોગ્રામેબલ કુલરનો ઉપયોગ કરીને અથવા -70°C થી -90°C નિયંત્રિત દર ફ્રીઝરમાં મૂકવામાં આવેલા ઇન્સ્યુલેટેડ બોક્સમાં શીશીઓ મૂકીને પ્રાપ્ત થાય છે.

પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં સ્થાનાંતરિત કરો

ત્યારબાદ થીજી ગયેલા ક્રાયોજેનિક શીશીઓને અનિશ્ચિત સમય માટે પ્રવાહી નાઇટ્રોજન ટાંકીમાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવે છે, જો તાપમાન -૧૩૫℃ કરતા ઓછું જાળવવામાં આવે.

આ અતિ-નીચું તાપમાન પ્રવાહી અથવા વરાળ તબક્કાના નાઇટ્રોજનમાં નિમજ્જન દ્વારા મેળવી શકાય છે.

પ્રવાહી કે વરાળ તબક્કો?

પ્રવાહી તબક્કામાં નાઇટ્રોજનનો સંગ્રહ ઠંડા તાપમાનને સંપૂર્ણ સુસંગતતા સાથે જાળવવા માટે જાણીતો છે, પરંતુ નીચેના કારણોસર ઘણીવાર તેની ભલામણ કરવામાં આવતી નથી:

• પ્રવાહી નાઇટ્રોજનના મોટા જથ્થા (ઊંડાઈ) ની જરૂરિયાત જે સંભવિત ખતરો છે. આના કારણે બળી જવું અથવા ગૂંગળામણ એક વાસ્તવિક જોખમ છે.
• એસ્પરગિલસ, હેપેટાઇટિસ બી અને પ્રવાહી નાઇટ્રોજન માધ્યમ દ્વારા વાયરલ ફેલાવા જેવા ચેપી એજન્ટો દ્વારા ક્રોસ-દૂષણના દસ્તાવેજીકૃત કેસો (2,3)
• નિમજ્જન દરમિયાન પ્રવાહી નાઇટ્રોજન શીશીઓમાં લીક થવાની સંભાવના. જ્યારે સંગ્રહમાંથી દૂર કરવામાં આવે છે અને ઓરડાના તાપમાને ગરમ કરવામાં આવે છે, ત્યારે નાઇટ્રોજન ઝડપથી વિસ્તરે છે. પરિણામે, પ્રવાહી નાઇટ્રોજન સંગ્રહમાંથી દૂર કરવામાં આવે ત્યારે શીશી તૂટી શકે છે, જે ઉડતા કાટમાળ અને સામગ્રીના સંપર્કમાં આવવાથી જોખમ ઊભું કરે છે (1, 4).

આ કારણોસર, અતિ-નીચા તાપમાનનો સંગ્રહ સામાન્ય રીતે વરાળ તબક્કાના નાઇટ્રોજનમાં થાય છે. જ્યારે નમૂનાઓ પ્રવાહી તબક્કામાં સંગ્રહિત કરવા પડે છે, ત્યારે વિશિષ્ટ ક્રાયોફ્લેક્સ ટ્યુબિંગનો ઉપયોગ કરવો જોઈએ.

બાષ્પ તબક્કાનો ગેરલાભ એ છે કે એક ઊભી તાપમાન ઢાળ બની શકે છે જેના પરિણામે તાપમાનમાં -135℃ અને -190℃ વચ્ચે વધઘટ થઈ શકે છે. આના માટે પ્રવાહી નાઇટ્રોજન સ્તર અને તાપમાનમાં ફેરફારનું કાળજીપૂર્વક અને ખંતપૂર્વક નિરીક્ષણ જરૂરી છે (5).

ઘણા ઉત્પાદકો ભલામણ કરે છે કે ક્રાયોવિયલ -135℃ સુધી સંગ્રહ માટે અથવા ફક્ત વરાળ તબક્કામાં ઉપયોગ માટે યોગ્ય છે.

તમારા ક્રાયોપ્રીઝર્વ્ડ કોષોને પીગળી રહ્યા છે

સ્થિર સંસ્કૃતિ માટે પીગળવાની પ્રક્રિયા તણાવપૂર્ણ હોય છે, અને કોષોની શ્રેષ્ઠ સધ્ધરતા, પુનઃપ્રાપ્તિ અને કાર્યક્ષમતા સુનિશ્ચિત કરવા માટે યોગ્ય સંચાલન અને તકનીક જરૂરી છે. પીગળવાના ચોક્કસ પ્રોટોકોલ ચોક્કસ કોષોના પ્રકારો પર આધાર રાખે છે. જોકે, ઝડપી પીગળવાની પ્રક્રિયાને માનક માનવામાં આવે છે:

• સેલ્યુલર પુનઃપ્રાપ્તિ પર કોઈપણ અસર ઘટાડો
• ફ્રીઝિંગ મીડિયામાં હાજર દ્રાવ્ય પદાર્થોના સંપર્કમાં આવવાનો સમય ઘટાડવામાં મદદ કરો.
• બરફના પુનઃસ્ફટિકીકરણ દ્વારા કોઈપણ નુકસાનને ઓછું કરો

નમૂનાઓ પીગળવા માટે સામાન્ય રીતે પાણીના સ્નાન, મણકાના સ્નાન અથવા વિશિષ્ટ સ્વચાલિત સાધનોનો ઉપયોગ થાય છે.

મોટાભાગે 1 કોષ રેખાને 1-2 મિનિટ માટે એક સમયે પીગળીને 37℃ પાણીના સ્નાનમાં ધીમેધીમે ફેરવવામાં આવે છે જ્યાં સુધી શીશીમાં થોડો બરફ બાકી ન રહે ત્યાં સુધી તેને પહેલાથી ગરમ કરેલા વૃદ્ધિ માધ્યમમાં ધોવામાં આવે છે.

સસ્તન પ્રાણીઓના ગર્ભ જેવા કેટલાક કોષો માટે, તેમના અસ્તિત્વ માટે ધીમી ગરમી જરૂરી છે.

કોષો હવે કોષ સંસ્કૃતિ, કોષ અલગતા, અથવા હિમેટોપોએટીક સ્ટેમ સેલ્સના કિસ્સામાં - માયલોએબ્લેટિવ થેરાપી પહેલાં દાતા સ્ટેમ સેલ્સની અખંડિતતાની ખાતરી આપવા માટે સધ્ધરતા અભ્યાસ માટે તૈયાર છે.

પ્લેટિંગ ઇન કલ્ચર માટે કોષની સાંદ્રતા નક્કી કરવા માટે કોષ ગણતરી કરવા માટે ઉપયોગમાં લેવાતા પ્રીવોશ કરેલા નમૂનાના નાના અંશ લેવા એ સામાન્ય પ્રથા છે. પછી તમે કોષ અલગતા પ્રક્રિયાઓના પરિણામોનું મૂલ્યાંકન કરી શકો છો અને કોષની સધ્ધરતા નક્કી કરી શકો છો.

ક્રાયોવિયલ્સના સંગ્રહ માટે શ્રેષ્ઠ પદ્ધતિઓ

ક્રાયોવિયલ્સમાં સંગ્રહિત નમૂનાઓનું સફળ ક્રાયોપ્રીઝર્વેશન યોગ્ય સંગ્રહ અને રેકોર્ડ રાખવા સહિત પ્રોટોકોલમાં ઘણા ઘટકો પર આધાર રાખે છે.

• સંગ્રહ સ્થાનો વચ્ચે કોષો વિભાજીત કરો- જો વોલ્યુમ પરવાનગી આપે, તો શીશીઓ વચ્ચે કોષોને વિભાજીત કરો અને તેમને અલગ અલગ જગ્યાએ સંગ્રહિત કરો જેથી સાધન નિષ્ફળતાને કારણે નમૂના ગુમાવવાનું જોખમ ઓછું થાય.
• ક્રોસ-પ્રદૂષણ અટકાવો- અનુગામી ઉપયોગ પહેલાં સિંગલ-યુઝ જંતુરહિત ક્રાયોજેનિક શીશીઓ અથવા ઓટોક્લેવ પસંદ કરો.
• તમારા કોષો માટે યોગ્ય કદની શીશીઓ વાપરો.- શીશીઓ 1 થી 5 મિલી સુધીના જથ્થામાં આવે છે. શીશીઓ ફાટવાનું જોખમ ઘટાડવા માટે તેમને વધુ પડતા ભરવાનું ટાળો.
• આંતરિક અથવા બાહ્ય થ્રેડેડ ક્રાયોજેનિક શીશીઓ પસંદ કરો- કેટલીક યુનિવર્સિટીઓ દ્વારા સલામતીના પગલાં માટે આંતરિક થ્રેડેડ શીશીઓ લેવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે - તે ભરણ દરમિયાન અથવા પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં સંગ્રહિત થાય ત્યારે પણ દૂષણને અટકાવી શકે છે.
• લિકેજ અટકાવો- લીકેજ અને દૂષણ અટકાવવા માટે સ્ક્રુ-કેપ અથવા ઓ-રિંગ્સમાં મોલ્ડેડ બાય-ઇન્જેક્ટેડ સીલનો ઉપયોગ કરો.
• 2D બારકોડ અને લેબલ શીશીઓ વાપરો- ટ્રેસેબિલિટી સુનિશ્ચિત કરવા માટે, મોટા લેખન ક્ષેત્રોવાળી શીશીઓ દરેક શીશીને યોગ્ય રીતે લેબલ કરવામાં સક્ષમ બનાવે છે. 2D બારકોડ સ્ટોરેજ મેનેજમેન્ટ અને રેકોર્ડ રાખવા માટે મદદ કરી શકે છે. રંગ કોડેડ કેપ્સ સરળ ઓળખ માટે ઉપયોગી છે.
• પર્યાપ્ત સંગ્રહ જાળવણી- કોષો નષ્ટ ન થાય તેની ખાતરી કરવા માટે, સંગ્રહ વાસણોએ તાપમાન અને પ્રવાહી નાઇટ્રોજનના સ્તરનું સતત નિરીક્ષણ કરવું જોઈએ. ભૂલો વિશે વપરાશકર્તાઓને ચેતવણી આપવા માટે એલાર્મ ફીટ કરવા જોઈએ.

સલામતીની સાવચેતીઓ

આધુનિક સંશોધનમાં પ્રવાહી નાઇટ્રોજન સામાન્ય પ્રથા બની ગઈ છે પરંતુ જો ખોટી રીતે ઉપયોગ કરવામાં આવે તો ગંભીર ઈજા થવાનું જોખમ રહેલું છે.

પ્રવાહી નાઇટ્રોજનનો ઉપયોગ કરતી વખતે હિમ લાગવાથી ચામડીનું સૂજવું, દાઝવું અને અન્ય પ્રતિકૂળ ઘટનાઓનું જોખમ ઓછું કરવા માટે યોગ્ય વ્યક્તિગત રક્ષણાત્મક ઉપકરણો (PPE) પહેરવા જોઈએ. પહેરો

• ક્રાયોજેનિક મોજા
• લેબોરેટરી કોટ
• અસર પ્રતિરોધક ફુલ ફેસ શિલ્ડ જે ગરદનને પણ ઢાંકે છે
• બંધ પગના જૂતા
• સ્પ્લેશપ્રૂફ પ્લાસ્ટિક એપ્રોન

શ્વાસ રૂંધાઈ જવાના જોખમને ઘટાડવા માટે પ્રવાહી નાઇટ્રોજન રેફ્રિજરેટર્સ સારી રીતે હવાની અવરજવરવાળા વિસ્તારોમાં મૂકવા જોઈએ - બહાર નીકળેલો નાઇટ્રોજન વાતાવરણીય ઓક્સિજનનું બાષ્પીભવન કરે છે અને તેને વિસ્થાપિત કરે છે. મોટા જથ્થાના સ્ટોર્સમાં ઓછી ઓક્સિજન એલાર્મ સિસ્ટમ હોવી જોઈએ.

પ્રવાહી નાઇટ્રોજનનું સંચાલન કરતી વખતે જોડીમાં કામ કરવું આદર્શ છે અને સામાન્ય કામના કલાકો સિવાય તેનો ઉપયોગ પ્રતિબંધિત હોવો જોઈએ.

તમારા કાર્યપ્રવાહને ટેકો આપવા માટે ક્રાયોવિયલ

સુઝોઉ એસ બાયોમેડિકલ કંપની વિવિધ પ્રકારના કોષો માટે તમારી ક્રાયોપ્રિઝર્વેશન જરૂરિયાતોને પૂર્ણ કરતા ઉત્પાદનોની વિશાળ પસંદગી પ્રદાન કરે છે. પોર્ટફોલિયોમાં ટ્યુબની શ્રેણી તેમજ જંતુરહિત ક્રાયોવિયલ્સની શ્રેણીનો સમાવેશ થાય છે.

અમારા ક્રાયોવિયલ છે:

• લેબ સ્ક્રુ કેપ 0.5mL 1.5mL 2.0mL ક્રાયોવિયલ ક્રાયોજેનિક શીશીઓ કોનિકલ બોટમ ક્રાયોટ્યુબ ગાસ્કેટ સાથે

  ● 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml સ્પષ્ટીકરણ, સ્કર્ટ સાથે અથવા સ્કર્ટ વગર
  ● શંકુ અથવા સ્વ-સ્થાયી ડિઝાઇન, જંતુરહિત અથવા બિન-જંતુરહિત બંને ઉપલબ્ધ છે
  ● સ્ક્રુ કેપ ટ્યુબ મેડિકલ ગ્રેડ પોલીપ્રોપીલીનથી બનેલી હોય છે.
  ● પીપી ક્રાયોટ્યુબ શીશીઓ વારંવાર સ્થિર અને પીગળી શકાય છે
  ● બાહ્ય કેપ ડિઝાઇન નમૂના સારવાર દરમિયાન દૂષણની સંભાવના ઘટાડી શકે છે.
  ● સ્ક્રુ કેપ ક્રાયોજેનિક ટ્યુબ્સ ઉપયોગ માટે યુનિવર્સલ સ્ક્રુ થ્રેડો
  ● ટ્યુબ્સ સૌથી સામાન્ય રોટર્સમાં ફિટ થાય છે
  ● ક્રાયોજેનિક ટ્યુબ ઓ-રિંગ ટ્યુબ પ્રમાણભૂત 1-ઇંચ અને 2-ઇંચ, 48વેલ, 81વેલ, 96વેલ અને 100વેલ ફ્રીઝર બોક્સમાં ફિટ થાય છે.
  ● ૧૨૧°C સુધી ઓટોક્લેવેબલ અને -૮૬°C સુધી ફ્રીઝેબલ

  ભાગ નં.	સામગ્રી	વોલ્યુમ	કેપરંગ	પીસીએસ/બેગ	બેગ/કેસ
  ACT05-BL-N ની વિશિષ્ટતાઓ	PP	૦.૫ મિલી	કાળો, પીળો, વાદળી, લાલ, જાંબલી, સફેદ	૫૦૦	10
  ACT15-BL-N ની વિશિષ્ટતાઓ	PP	૧.૫ મિલી	કાળો, પીળો, વાદળી, લાલ, જાંબલી, સફેદ	૫૦૦	10
  ACT15-BL-NW માટે તપાસ સબમિટ કરો, અમે 24 કલાકમાં તમારો સંપર્ક કરીશું.	PP	૧.૫ મિલી	કાળો, પીળો, વાદળી, લાલ, જાંબલી, સફેદ	૫૦૦	10
  ACT20-BL-N ની વિશિષ્ટતાઓ	PP	૨.૦ મિલી	કાળો, પીળો, વાદળી, લાલ, જાંબલી, સફેદ	૫૦૦	10