Kriofiolojestas ofte uzataj por la kriogena stokado de ĉellinioj kaj aliaj kritikaj biologiaj materialoj, en deŭaroj plenigitaj per likva nitrogeno.

Pluraj etapoj estas implikitaj en la sukcesa konservado de ĉeloj en likva nitrogeno. Kvankam la baza principo estas malrapida frostigado, la preciza uzata tekniko dependas de la ĉeltipo kaj uzata krioprotektanto. Ekzistas pluraj sekurecaj konsideroj kaj plej bonaj praktikoj por konsideri dum stokado de ĉeloj je tiaj malaltaj temperaturoj.

Ĉi tiu afiŝo celas doni superrigardon pri kiel kriofioloj estas konservataj en likva nitrogeno.

Kio estas kriovioj?

Kriofioletoj estas malgrandaj, kovritaj fioletoj desegnitaj por konservi likvajn specimenojn je ekstreme malaltaj temperaturoj. Ili certigas, ke ĉeloj konservitaj en krioprotektanto ne venu en rektan kontakton kun la likva nitrogeno, minimumigante la riskon de ĉelaj frakturoj dum ankoraŭ profitante de la ekstrema malvarmiga efiko de likva nitrogeno.

La fioletoj kutime haveblas en diversaj volumoj kaj dezajnoj - ili povas esti interne aŭ ekstere surfadenigitaj kun plataj aŭ rondaj fundoj. Sterilaj kaj nesterilaj formatoj ankaŭ haveblas.

Kiu UzasCirovialojStoki Ĉelojn en Likva Nitrogeno

Gamo da NHS kaj privataj laboratorioj, same kiel esplorinstitucioj specialiĝantaj pri umbilikkordosangobankado, epitelia ĉelbiologio, imunologio kaj stamĉelbiologio uzas kriofioletojn por kriokonservi ĉelojn.

Ĉeloj konservitaj tiamaniere inkluzivas B- kaj T-ĉelojn, CHO-ĉelojn, hematopoezajn tigĉelojn kaj praĉelojn, hibridomojn, intestajn ĉelojn, makrofagojn, mezenkimajn tigĉelojn kaj praĉelojn, monocitojn, mielomon, NK-ĉelojn kaj pluripotencajn tigĉelojn.

Superrigardo pri kiel konservi kriofiolojn en likva nitrogeno

Kriokonservado estas procezo kiu konservas ĉelojn kaj aliajn biologiajn konstrukciojn per malvarmigo de ili ĝis tre malaltaj temperaturoj. Ĉeloj povas esti konservitaj en likva nitrogeno dum jaroj sen perdo de ĉelvivebleco. Jen skizo de la uzataj proceduroj.

Ĉelpreparado

La preciza metodo por prepari specimenojn varios depende de la ĉeltipo, sed ĝenerale, la ĉeloj estas kolektitaj kaj centrifugitaj por disvolvi ĉelriĉan buleton. Ĉi tiu buleto estas poste resuspendita en la supernatanto miksita kun krioprotektanto aŭ kriokonserva medio.

Kriokonservada Medio

Ĉi tiu medio estas uzata por konservi ĉelojn en la malalt-temperaturaj medioj, al kiuj ili estos submetitaj, per inhibicio de la formado de intra- kaj eksterĉelaj kristaloj kaj tial ĉelmorto. Ilia rolo estas provizi sekuran, protektan medion por ĉeloj kaj histoj dum la frostigado, stokado kaj degelado.

Medio kiel freŝa frostigita plasmo (FFP), heparinigita plasmalita solvaĵo aŭ serum-liberaj, bestaj komponent-liberaj solvaĵoj estas miksita kun krioprotektantoj kiel dimetilsulfoksido (DMSO) aŭ glicerolo.

La relikvigita provaĵa buleto estas alikvotita en polipropilenajn kriofioletojn kiel ekzempleSuzhou Ace Biomedical kompanio Kriogenaj Stokado-Fioletoj.

Gravas ne troplenigi la kriofiolojn, ĉar tio pliigos la riskon de fendiĝo kaj la eblan liberigon de la enhavo (1).

Kontrolita Frostorapideco

Ĝenerale, malrapida kontrolita frostorapideco estas uzata por la sukcesa kriokonservado de ĉeloj.

Post kiam specimenoj estas disigitaj en kriogenajn fiolojn, ili estas metitaj sur malsekan glacion aŭ en 4℃-fridujon kaj la frostigado komenciĝas ene de 5 minutoj. Ĝenerale, ĉeloj estas malvarmigitaj je rapideco de -1 ĝis -3 minute (2). Ĉi tio estas atingita per programebla malvarmigilo aŭ metante fiolojn en izolitan skatolon metitan en frostujon kun kontrolita rapideco de –70°C ĝis –90°C.

Translokigo al Likva Nitrogeno

La frostaj kriogenaj fioletoj estas poste translokigitaj al likva nitrogena tanko por nedifinitaj periodoj, kondiĉe ke temperaturo malpli ol -135℃ estas konservata.

Tiujn ultramalaltajn temperaturojn oni povas atingi per mergado en la likvan aŭ vaporan fazon de nitrogeno.

Likva aŭ Vapora Fazo?

Stokado en likva faza nitrogeno estas konata pro konservado de la malvarma temperaturo kun absoluta konsistenco, sed ofte ne estas rekomendinda pro la jenaj kialoj:

• La bezono de grandaj volumoj (profundo) de likva nitrogeno, kio estas ebla danĝero. Brulvundoj aŭ sufokado pro tio estas reala risko.
• Dokumentitaj kazoj de kruc-poluado per infektaj agentoj kiel aspergilo, hepatito B kaj virusa disvastiĝo per la likva nitrogena medio (2,3)
• La ebleco, ke likva nitrogeno liku en la fiolojn dum mergado. Kiam forigita el la stokado kaj varmigita ĝis ĉambra temperaturo, la nitrogeno rapide disetendiĝas. Sekve, la fiolo povas frakasi kiam forigita el la stokado de likva nitrogeno, kreante danĝeron pro kaj flugantaj derompaĵoj kaj eksponiĝo al la enhavo (1, 4).

Pro ĉi tiuj kialoj, stokado je ultramalalta temperaturo plej ofte okazas en vapora fazo de nitrogeno. Kiam specimenoj devas esti stokitaj en la likva fazo, oni uzu specialan kriofleksan tubon.

La malavantaĝo de la vapora fazo estas, ke vertikala temperaturgradiento povas okazi, rezultante en temperaturfluktuoj inter -135℃ kaj -190℃. Tio necesigas zorgeman kaj diligentan monitoradon de la niveloj de likva nitrogeno kaj temperaturvarioj (5).

Multaj fabrikantoj rekomendas, ke kriofioletoj taŭgas por stokado ĝis -135℃ aŭ por uzo nur en la vapora fazo.

Degelo de viaj kriokonservitaj ĉeloj

La degela proceduro estas streĉa por frostigita kulturo, kaj taŭga manipulado kaj tekniko estas necesaj por certigi optimuman viveblecon, resaniĝon kaj funkciecon de la ĉeloj. La precizaj degelaj protokoloj dependos de specifaj ĉeltipoj. Tamen, rapida degelado estas konsiderata norma por:

• Malpliigu ajnan efikon sur ĉelan resaniĝon
• Helpu redukti la ekspontempon al la solvaĵoj ĉeestantaj en la frostiga medio
• Minimumigu ajnan damaĝon per glacirekristaliĝo

Akvobanoj, perlbanoj, aŭ specialigitaj aŭtomataj instrumentoj estas ofte uzataj por degeli specimenojn.

Plej ofte oni degelas po 1 ĉellinio dum 1-2 minutoj, milde kirlante ĝin en akvobano je 37℃ ĝis restas nur iomete da glacio en la fiolo, antaŭ ol oni lavas ĝin en antaŭvarmigita kreskomedio.

Por iuj ĉeloj kiel ekzemple mamulaj embrioj, malrapida varmiĝo estas esenca por ilia supervivo.

La ĉeloj nun estas pretaj por ĉelkultivado, ĉelizolado, aŭ, en la kazo de hematopoezaj stamĉeloj - por viveblecstudoj por garantii la integrecon de la donacantaj stamĉeloj antaŭ mieloablativa terapio.

Estas normala praktiko preni malgrandajn alikvotojn de la antaŭlavita specimeno uzata por plenumi ĉelkalkulon por determini ĉelkoncentriĝojn por kultivado. Vi povas tiam taksi la rezultojn de ĉelizoladproceduroj kaj determini ĉelviveblecon.

Plej Bonaj Praktikoj por la Stokado de Kriofioloj

La sukcesa kriokonservado de specimenoj konservitaj en kriofioletoj dependas de multaj elementoj en la protokolo, inkluzive de ĝusta stokado kaj librotenado.

• Dividi ĉelojn inter stokadlokoj– Se la volumoj permesas, dividu la ĉelojn inter la fioletojn kaj konservu ilin en apartaj lokoj por redukti la riskon de specimenperdo pro ekipaĵpaneoj.
• Malhelpi krucpoluadon– Elektu unuuzajn sterilajn kriogenajn fioletojn aŭ aŭtoklavon antaŭ posta uzo
• Uzu taŭgajn grandajn fiolojn por viaj ĉeloj– fioletoj haveblas en gamo da volumoj inter 1 kaj 5 ml. Evitu troplenigi fioletojn por redukti la riskon de fendetiĝo.
• Elektu internajn aŭ eksterajn kriogenajn fiolojn– Kelkaj universitatoj rekomendas fiolojn kun interna surfadeniĝo pro sekurecaj rimedoj – ili ankaŭ povas malhelpi poluadon dum plenigo aŭ kiam ili estas konservitaj en likva nitrogeno.
• Malhelpi Elfluon- Uzu du-injektitajn sigelojn mulditajn en la ŝraŭbkovrilon aŭ O-ringojn por malhelpi elfluadon kaj poluadon.
• Uzu 2D-strekkodojn kaj etikedu fiolojn– por certigi spureblecon, fioletoj kun grandaj skribareoj ebligas adekvate etikedi ĉiun fioleton. 2D-strekkodoj povas helpi kun stokadadministrado kaj registrotenado. Kolorkoditaj ĉapoj estas utilaj por pli facila identigo.
• Adekvata stokada bontenado- Por certigi, ke ĉeloj ne perdiĝas, stokujoj devas konstante monitori la temperaturon kaj nivelojn de likva nitrogeno. Alarmoj devas esti instalitaj por averti uzantojn pri eraroj.

Sekurecaj Antaŭzorgoj

Likva nitrogeno fariĝis ofta praktiko en moderna esplorado sed portas la riskon de grava vundo se uzata neĝuste.

Oni devus porti taŭgan personan protektan ekipaĵon (PPE) por minimumigi la riskon de frostodifekto, brulvundoj kaj aliaj negativaj okazaĵoj dum manipulado de likva nitrogeno. Portu

• Kriogenaj gantoj
• Laboratoria kitelo
• Plena vizaĝŝildo rezistema al ŝokoj, kiu ankaŭ kovras la kolon
• Fermit-piedfingraj ŝuoj
• Ŝprucrezista plasta antaŭtuko

Fridujoj kun likva nitrogeno devus esti lokitaj en bone ventolitaj lokoj por minimumigi la riskon de sufokado - la eskapinta nitrogeno vaporiĝas kaj forigas atmosferan oksigenon. Grandvolumenaj vendejoj devus havi alarmsistemojn por malalta oksigeno.

Labori duope dum manipulado de likva nitrogeno estas ideala kaj ĝia uzo ekster normalaj laborhoroj devus esti malpermesita.

Kriofioloj por Subteni Vian Laborfluon

La biomedicina kompanio Suzhou Ace ofertas vastan elekton de produktoj, kiuj plenumas viajn kriokonservadajn bezonojn por malsamaj ĉeltipoj. La portfolio inkluzivas gamon da tuboj kaj ankaŭ gamon da sterilaj kriofioletoj.

Niaj kriofioloj estas:

• Laboratoria Ŝraŭba Ĉapo 0.5mL 1.5mL 2.0mL Kriofiolo Kriogenaj Fioloj Konusa Funda Kriotubo kun Pakado

  ● Specifo de 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml, kun jupo aŭ sen jupo
  ● Konusa aŭ memstara dezajno, sterila aŭ nesterila estas ambaŭ haveblaj
  ● Ŝraŭbkovrilaj tuboj estas faritaj el medicina polipropileno
  ● PP-Cryotube-fioloj povas esti plurfoje frostigitaj kaj degelitaj
  ●La ekstera ĉapdezajno povas redukti la poluadprobablecon dum provaĵtraktado.
  ● Ŝraŭbĉapaj kriogenaj tuboj Universalaj ŝraŭbaj fadenoj por uzo
  ● Tuboj taŭgas por plej oftaj rotoroj
  ● Kriogenaj tuboj kun o-ringoj taŭgas por normaj 1-colaj kaj 2-colaj, 48-putaj, 81-putaj, 96-putaj kaj 100-putaj frostujoj
  ● Aŭtoklavebla ĝis 121°C kaj frostigebla ĝis -86°C

  PARTA NUMERO	MATERIALO	VOLUMO	ĈAPOKOLORO	PCS/SAKO	SAKOJ/UJO
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Nigra, Flava, Blua, Ruĝa, Purpura, Blanka	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Nigra, Flava, Blua, Ruĝa, Purpura, Blanka	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Nigra, Flava, Blua, Ruĝa, Purpura, Blanka	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Nigra, Flava, Blua, Ruĝa, Purpura, Blanka	500	10