Cryofiolauyn cael eu defnyddio'n gyffredin ar gyfer storio cryogenig llinellau celloedd a deunyddiau biolegol hanfodol eraill, mewn dewars sy'n llawn nitrogen hylifol.

Mae sawl cam yn gysylltiedig â chadw celloedd yn llwyddiannus mewn nitrogen hylifol. Er mai rhewi araf yw'r egwyddor sylfaenol, mae'r union dechneg a ddefnyddir yn dibynnu ar y math o gell a'r cryo-amddiffynnydd a ddefnyddir. Mae sawl ystyriaeth diogelwch ac arferion gorau i'w hystyried wrth storio celloedd ar dymheredd mor isel.

Nod y cofnod hwn yw rhoi trosolwg o sut mae cryo-fiolau yn cael eu storio mewn nitrogen hylifol.

Beth yw Cryofiolau

Ffiolau bach, wedi'u capio yw cryo-fiolau sydd wedi'u cynllunio ar gyfer storio samplau hylif ar dymheredd isel iawn. Maent yn sicrhau nad yw celloedd sydd wedi'u cadw mewn cryo-amddiffynnydd yn dod i gysylltiad uniongyrchol â'r nitrogen hylifol, gan leihau'r risg o doriadau cellog tra'n dal i elwa o effaith oeri eithafol nitrogen hylifol.

Mae'r ffiolau fel arfer ar gael mewn amrywiaeth o gyfrolau a dyluniadau – gellir eu hedafu'n fewnol neu'n allanol gyda gwaelodion gwastad neu grwn. Mae fformatau di-haint ac an-haint hefyd ar gael.

Pwy sy'n DefnyddioCyrovialsStorio Celloedd mewn Nitrogen Hylifol

Mae amrywiaeth o labordai'r GIG a labordai preifat, yn ogystal â sefydliadau ymchwil sy'n arbenigo mewn bancio gwaed llinyn, bioleg celloedd epithelaidd, imiwnoleg a bioleg celloedd bonyn yn defnyddio cryo-fiolau i rew-gadw celloedd.

Mae celloedd sy'n cael eu cadw yn y ffordd hon yn cynnwys Celloedd B a T, Celloedd CHO, Celloedd Coesyn a Rhagflaenydd Hematopoietig, Hybridomas, Celloedd Berfeddol, Macroffagau, Celloedd Coesyn a Rhagflaenydd Mesenchymal, Monocytau, Myeloma, Celloedd NK a Chelloedd Coesyn Plwripotent.

Trosolwg o Sut i Storio Cryofiolau mewn Nitrogen Hylifol

Mae cryopreservation yn broses sy'n cadw celloedd ac adeiladwaith biolegol eraill trwy eu hoeri i dymheredd isel iawn. Gellir storio celloedd mewn nitrogen hylifol am flynyddoedd heb golli hyfywedd celloedd. Dyma amlinelliad o'r gweithdrefnau a ddefnyddir.

Paratoi Celloedd

Bydd y dull union ar gyfer paratoi samplau yn amrywio yn dibynnu ar y math o gell, ond yn gyffredinol, mae'r celloedd yn cael eu casglu a'u hallgyrchu i ddatblygu pelen sy'n llawn celloedd. Yna caiff y belen hon ei hail-atal yn yr uwchnofiant wedi'i gymysgu â chryo-amddiffynnydd neu gyfrwng rhew-gadw.

Cyfrwng Cryopreservation

Defnyddir y cyfrwng hwn i gadw celloedd yn yr amgylcheddau tymheredd isel y byddant yn agored iddynt trwy atal ffurfio crisialau mewngorfforol ac allgellog ac felly marwolaeth celloedd. Eu rôl yw darparu amgylchedd diogel ac amddiffynnol ar gyfer celloedd a meinweoedd yn ystod y prosesau rhewi, storio a dadmer.

Mae cyfrwng fel plasma ffres wedi'i rewi (FFP), toddiant plasmalyte wedi'i heparineiddio neu doddiannau heb serwm, heb gydrannau anifeiliaid yn cael ei gymysgu â chryo-amddiffynyddion fel dimethyl sylffocsid (DMSO) neu glyserol.

Caiff y belen sampl wedi'i hail-hylifio ei rhoi mewn cryo-fiolau polypropylen felFfiolau Storio Cryogenig Cwmni Biofeddygol Suzhou Ace.

Mae'n bwysig peidio â gorlenwi'r cryo-fiolau gan y bydd hyn yn cynyddu'r risg o gracio a'r posibilrwydd o ryddhau cynnwys (1).

Cyfradd Rhewi Rheoledig

Yn gyffredinol, defnyddir cyfradd rhewi araf a reolir ar gyfer rhewgadwraeth celloedd yn llwyddiannus.

Ar ôl i samplau gael eu rhannu'n ffiolau cryogenig, cânt eu rhoi ar rew gwlyb neu mewn oergell 4℃ a dechreuir y weithdrefn rewi o fewn 5 munud. Fel canllaw cyffredinol, caiff celloedd eu hoeri ar gyfradd o -1 i -3 y funud (2). Cyflawnir hyn gan ddefnyddio oerydd rhaglennadwy neu drwy osod ffiolau mewn blwch wedi'i inswleiddio wedi'i osod mewn rhewgell cyfradd reoledig o –70°C i –90°C.

Trosglwyddo i Nitrogen Hylifol

Yna caiff y ffiolau cryogenig wedi'u rhewi eu trosglwyddo i danc nitrogen hylif am gyfnodau amhenodol cyn belled â bod tymheredd o lai na -135 ℃ yn cael ei gynnal.

Gellir cael y tymereddau uwch-isel hyn trwy drochi yn y nitrogen cyfnod hylif neu anwedd.

Cyfnod Hylif neu Anwedd?

Mae storio mewn nitrogen cyfnod hylif yn hysbys am gynnal y tymheredd oer gyda chysondeb llwyr, ond yn aml ni chaiff ei argymell am y rhesymau canlynol:

• Yr angen am gyfrolau mawr (dyfnder) o nitrogen hylif sy'n berygl posibl. Mae llosgiadau neu fygu oherwydd hyn yn risg wirioneddol.
• Achosion wedi'u dogfennu o groeshalogi gan asiantau heintus fel aspergillus, hep B a lledaeniad firaol trwy'r cyfrwng nitrogen hylifol (2,3)
• Y potensial i nitrogen hylifol ollwng i'r ffiolau wrth eu trochi. Pan gaiff ei dynnu o'r storfa a'i gynhesu i dymheredd ystafell, mae'r nitrogen yn ehangu'n gyflym. O ganlyniad, gall y ffiol chwalu pan gaiff ei dynnu o'r storfa nitrogen hylifol, gan greu perygl o falurion yn hedfan ac amlygiad i'r cynnwys (1, 4).

Am y rhesymau hyn, mae storio tymheredd uwch-isel fel arfer mewn nitrogen cyfnod anwedd. Pan fo'n rhaid storio samplau yn y cyfnod hylif, dylid defnyddio tiwbiau cryoflex arbenigol.

Yr anfantais i'r cyfnod anwedd yw y gall graddiant tymheredd fertigol ddigwydd gan arwain at amrywiadau tymheredd rhwng -135℃ a -190℃. Mae hyn yn golygu bod angen monitro lefelau'r nitrogen hylifol a'r amrywiadau tymheredd yn ofalus ac yn ddiwyd (5).

Mae llawer o weithgynhyrchwyr yn argymell bod cryo-fiolau yn addas i'w storio i lawr i -135 ℃ neu i'w defnyddio yn y cyfnod anwedd yn unig.

Dadmer Eich Celloedd Cryopreserved

Mae'r weithdrefn ddadmer yn llawn straen ar gyfer diwylliant wedi'i rewi, ac mae angen trin a thechneg briodol i sicrhau hyfywedd, adferiad a swyddogaeth orau posibl y celloedd. Bydd y protocolau dadmer union yn dibynnu ar fathau penodol o gelloedd. Fodd bynnag, ystyrir bod dadmer cyflym yn safonol i:

• Lleihau unrhyw effaith ar adferiad cellog
• Helpu i leihau'r amser dod i gysylltiad â'r hydoddion sy'n bresennol yn y cyfryngau rhewi
• Lleihau unrhyw ddifrod trwy ailgrisialu iâ

Defnyddir baddonau dŵr, baddonau gleiniau, neu offerynnau awtomataidd arbenigol yn gyffredin i ddadmer samplau.

Yn amlaf, caiff 1 llinell gell ei dadmer ar y tro am 1-2 funud, trwy ei throelli'n ysgafn mewn baddon dŵr 37℃ nes bod ychydig bach o iâ ar ôl yn y ffiol cyn iddynt gael eu golchi mewn cyfrwng twf wedi'i gynhesu ymlaen llaw.

I rai celloedd fel embryonau mamaliaid, mae cynhesu araf yn hanfodol er mwyn iddynt oroesi.

Mae'r celloedd bellach yn barod ar gyfer diwylliant celloedd, ynysu celloedd, neu yn achos celloedd bonyn hematopoietig – astudiaethau hyfywedd i warantu cyfanrwydd celloedd bonyn y rhoddwr cyn therapi myeloabladol.

Mae'n arfer arferol cymryd darnau bach o'r sampl wedi'i golchi ymlaen llaw a ddefnyddir i gyfrif celloedd i bennu crynodiadau celloedd ar gyfer eu platio mewn diwylliant. Yna gallwch asesu canlyniadau gweithdrefnau ynysu celloedd a phennu hyfywedd celloedd.

Arferion Gorau ar gyfer Storio Cryofiolau

Mae cryopreservation llwyddiannus samplau sydd wedi'u storio mewn cryo-fiolau yn dibynnu ar lawer o elfennau yn y protocol gan gynnwys storio a chadw cofnodion priodol.

• Rhannwch gelloedd rhwng lleoliadau storio– Os yw'r cyfeintiau'n caniatáu, rhannwch y celloedd rhwng y ffiolau a'u storio mewn lleoliadau ar wahân i leihau'r risg o golli sampl oherwydd methiannau offer.
• Atal croeshalogi– Dewiswch ffiolau cryogenig di-haint untro neu awtoclaf cyn eu defnyddio wedyn
• Defnyddiwch ffiolau o'r maint priodol ar gyfer eich celloedd.– mae ffiolau ar gael mewn amrywiaeth o gyfrolau rhwng 1 a 5ml. Osgowch orlenwi ffiolau i leihau'r risg o gracio.
• Dewiswch ffiolau cryogenig wedi'u edafu'n fewnol neu'n allanol– Mae rhai prifysgolion yn argymell ffiolau ag edau fewnol ar gyfer mesurau diogelwch – gallant hefyd atal halogiad wrth eu llenwi neu wrth eu storio yn y nitrogen hylifol.
• Atal Gollyngiadau- Defnyddiwch seliau wedi'u chwistrellu'n ddwbl wedi'u mowldio i'r cap sgriw neu'r cylchoedd-O i atal gollyngiadau a halogiad.
• Defnyddiwch godau bar 2D a labelwch fiolau– er mwyn sicrhau olrhain, mae ffiolau gydag ardaloedd ysgrifennu mawr yn galluogi labelu digonol ar bob ffiol. Gall codau bar 2D helpu gyda rheoli storio a chadw cofnodion. Mae capiau â chod lliw yn ddefnyddiol ar gyfer adnabod haws.
• Cynnal a chadw storio digonol- Er mwyn sicrhau nad yw celloedd yn cael eu colli, dylai llestri storio fonitro'r tymheredd a lefelau'r nitrogen hylif yn gyson. Dylid gosod larymau i rybuddio defnyddwyr am wallau.

Rhagofalon Diogelwch

Mae nitrogen hylifol wedi dod yn arfer cyffredin mewn ymchwil fodern ond mae'n cario'r risg o anaf difrifol os caiff ei ddefnyddio'n anghywir.

Dylid gwisgo offer amddiffynnol personol (PPE) priodol i leihau'r risg o ewinedd rhew, llosgiadau a digwyddiadau niweidiol eraill wrth drin nitrogen hylifol. Gwisgwch

• Menig cryogenig
• Cot labordy
• Tarian wyneb lawn sy'n gwrthsefyll effaith sydd hefyd yn gorchuddio'r gwddf
• Esgidiau â bysedd traed caeedig
• Ffedog blastig gwrth-sblas

Dylid gosod oergelloedd nitrogen hylif mewn mannau sydd wedi'u hawyru'n dda i leihau'r risg o dagu – mae nitrogen sy'n dianc yn anweddu ac yn dadleoli ocsigen atmosfferig. Dylai fod gan siopau cyfaint mawr systemau larwm ocsigen isel.

Mae gweithio mewn parau wrth drin nitrogen hylifol yn ddelfrydol a dylid gwahardd ei ddefnyddio y tu allan i oriau gwaith arferol.

Cryofiolau i Gefnogi Eich Llif Gwaith

Mae cwmni Suzhou Ace Biomedical yn cynnig detholiad eang o gynhyrchion sy'n diwallu eich anghenion cryopreservation ar gyfer gwahanol fathau o gelloedd. Mae'r portffolio yn cynnwys amrywiaeth o diwbiau yn ogystal ag amrywiaeth o cryo-fiolau di-haint.

Ein cryo-fiolau yw:

• Cap Sgriw Lab 0.5mL 1.5mL 2.0mL Ffiolau Cryogenig Cryofial Gwaelod Conigol gyda Gasged

  ● Manyleb 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml, gyda sgert neu heb sgert
  ● Mae dyluniad conigol neu hunan-sefyll, di-haint neu an-haint ar gael
  ● Mae tiwbiau cap sgriw wedi'u gwneud o polypropylen gradd feddygol
  ● Gellir rhewi a dadmer ffiolau cryotiwb PP dro ar ôl tro
  ●Gall dyluniad y cap allanol leihau'r tebygolrwydd o halogiad yn ystod triniaeth sampl.
  ● Tiwbiau cryogenig cap sgriw Edau sgriw cyffredinol i'w defnyddio
  ● Mae tiwbiau'n ffitio'r rotorau mwyaf cyffredin
  ● Mae tiwbiau O-ring tiwb cryogenig yn ffitio blychau rhewgell safonol 1 modfedd a 2 fodfedd, 48 ffynnon, 81 ffynnon, 96 ffynnon a 100 ffynnon
  ● Gellir ei awtoclafio hyd at 121°C a'i rewi hyd at -86°C

  RHIF RHAN	DEUNYDD	CYFROL	PACLLIW	PCS/BAG	BAGIAU/CAS
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Du, Melyn, Glas, Coch, Porffor, Gwyn	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Du, Melyn, Glas, Coch, Porffor, Gwyn	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Du, Melyn, Glas, Coch, Porffor, Gwyn	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Du, Melyn, Glas, Coch, Porffor, Gwyn	500	10