ক্রায়োভিয়ালসসাধারণত তরল নাইট্রোজেন ভরা দেওয়ালে কোষ রেখা এবং অন্যান্য গুরুত্বপূর্ণ জৈবিক পদার্থের ক্রায়োজেনিক সঞ্চয়ের জন্য ব্যবহৃত হয়।

তরল নাইট্রোজেনে কোষের সফল সংরক্ষণের জন্য বেশ কয়েকটি ধাপ জড়িত। যদিও মূল নীতি হল ধীরগতিতে জমাট বাঁধা, তবে সঠিক কৌশলটি কীভাবে ব্যবহৃত হয় তা কোষের ধরণ এবং ব্যবহৃত ক্রায়োপ্রোটেক্ট্যান্টের উপর নির্ভর করে। এত কম তাপমাত্রায় কোষ সংরক্ষণের সময় বেশ কয়েকটি সুরক্ষা বিবেচনা এবং সর্বোত্তম অনুশীলন বিবেচনা করা উচিত।

এই পোস্টের লক্ষ্য হল তরল নাইট্রোজেনে ক্রায়োভিয়াল কীভাবে সংরক্ষণ করা হয় তার একটি সারসংক্ষেপ দেওয়া।

ক্রায়োভিয়াল কি?

ক্রায়োভিয়াল হল ছোট, ঢাকনাযুক্ত শিশি যা অত্যন্ত কম তাপমাত্রায় তরল নমুনা সংরক্ষণের জন্য ডিজাইন করা হয়েছে। এগুলি নিশ্চিত করে যে ক্রায়োপ্রোটেক্ট্যান্টে সংরক্ষিত কোষগুলি তরল নাইট্রোজেনের সরাসরি সংস্পর্শে না আসে, যার ফলে কোষ ভাঙার ঝুঁকি কম হয় এবং তরল নাইট্রোজেনের চরম শীতল প্রভাব থেকে উপকৃত হয়।

শিশিগুলি সাধারণত বিভিন্ন আকার এবং ডিজাইনে পাওয়া যায় - এগুলি ভিতরে বা বাইরে থেকে সমতল বা গোলাকার তলদেশে থ্রেড করা যেতে পারে। জীবাণুমুক্ত এবং অ-জীবাণুমুক্ত ফর্ম্যাটগুলিও পাওয়া যায়।

কে ব্যবহার করেসাইরোভিয়ালসতরল নাইট্রোজেনে কোষ সংরক্ষণ করা

বিভিন্ন জাতীয় স্বাস্থ্য সংস্থা এবং বেসরকারি গবেষণাগার, সেইসাথে কর্ড ব্লাড ব্যাংকিং, এপিথেলিয়াল সেল বায়োলজি, ইমিউনোলজি এবং স্টেম সেল বায়োলজিতে বিশেষজ্ঞ গবেষণা প্রতিষ্ঠানগুলি কোষগুলিকে ক্রায়োপ্রিজারভ করার জন্য ক্রায়োভিয়াল ব্যবহার করে।

এইভাবে সংরক্ষিত কোষগুলির মধ্যে রয়েছে B এবং T কোষ, CHO কোষ, হেমাটোপয়েটিক স্টেম এবং প্রোজেনিটর কোষ, হাইব্রিডোমাস, অন্ত্রের কোষ, ম্যাক্রোফেজ, মেসেনকাইমাল স্টেম এবং প্রোজেনিটর কোষ, মনোসাইট, মায়লোমা, NK কোষ এবং প্লুরিপোটেন্ট স্টেম কোষ।

তরল নাইট্রোজেনে ক্রায়োভিয়াল কীভাবে সংরক্ষণ করবেন তার সারসংক্ষেপ

ক্রিওপ্রিজারভেশন হলো এমন একটি প্রক্রিয়া যা কোষ এবং অন্যান্য জৈবিক গঠনগুলিকে খুব কম তাপমাত্রায় ঠান্ডা করে সংরক্ষণ করে। কোষের কার্যকারিতা নষ্ট না করেই কোষগুলিকে বছরের পর বছর ধরে তরল নাইট্রোজেনে সংরক্ষণ করা যেতে পারে। এটি ব্যবহৃত পদ্ধতিগুলির একটি রূপরেখা।

কোষ প্রস্তুতি

নমুনা প্রস্তুত করার সঠিক পদ্ধতি কোষের ধরণের উপর নির্ভর করে পরিবর্তিত হবে, তবে সাধারণভাবে, কোষগুলিকে সংগ্রহ করা হয় এবং সেন্ট্রিফিউজ করা হয় যাতে একটি কোষ-সমৃদ্ধ পেলেট তৈরি করা যায়। এই পেলেটটি তারপর ক্রায়োপ্রোটেক্ট্যান্ট বা ক্রায়োপ্রিজারভেশন মাধ্যমের সাথে মিশ্রিত সুপারন্যাট্যান্টে পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়।

ক্রিওপ্রিজারভেশন মাধ্যম

এই মাধ্যমটি কোষের অভ্যন্তরে এবং বহির্কোষীয় স্ফটিক গঠনে বাধা দিয়ে নিম্ন-তাপমাত্রার পরিবেশে কোষগুলিকে সংরক্ষণ করার জন্য ব্যবহৃত হয় এবং এর ফলে কোষের মৃত্যু ঘটে। হিমায়িত, সংরক্ষণ এবং গলানোর প্রক্রিয়ার সময় কোষ এবং টিস্যুগুলির জন্য একটি নিরাপদ, প্রতিরক্ষামূলক পরিবেশ প্রদান করা তাদের ভূমিকা।

ফ্রেশ ফ্রোজেন প্লাজমা (FFP), হেপারিনাইজড প্লাজমালাইট দ্রবণ বা সিরাম-মুক্ত, প্রাণীর উপাদান-মুক্ত দ্রবণের মতো একটি মাধ্যম ডাইমিথাইল সালফক্সাইড (DMSO) বা গ্লিসারলের মতো ক্রায়োপ্রোটেক্টেন্টের সাথে মিশ্রিত করা হয়।

পুনঃতরলীকৃত নমুনা পেলেটটি পলিপ্রোপিলিন ক্রায়োভিয়ালে রূপান্তরিত হয় যেমনসুঝো এস বায়োমেডিকেল কোম্পানি ক্রায়োজেনিক স্টোরেজ ভায়াল.

ক্রায়োভিয়ালগুলিকে অতিরিক্ত ভরাট না করা গুরুত্বপূর্ণ কারণ এটি ফাটল ধরার এবং বিষয়বস্তু বেরিয়ে যাওয়ার ঝুঁকি বাড়িয়ে দেবে (1)।

নিয়ন্ত্রিত হিমায়িত হার

সাধারণত, কোষের সফল ক্রায়োপ্রিজারভেশনের জন্য একটি ধীর নিয়ন্ত্রিত হিমায়িত হার ব্যবহার করা হয়।

নমুনাগুলি ক্রায়োজেনিক শিশিতে স্থানান্তরিত করার পর, সেগুলিকে ভেজা বরফের উপর অথবা 4℃ তাপমাত্রার রেফ্রিজারেটরে রাখা হয় এবং 5 মিনিটের মধ্যে হিমায়িত করার প্রক্রিয়া শুরু হয়। সাধারণ নির্দেশিকা হিসাবে, কোষগুলিকে প্রতি মিনিটে -1 থেকে -3 হারে ঠান্ডা করা হয় (2)। এটি একটি প্রোগ্রামেবল কুলার ব্যবহার করে বা -70°C থেকে -90°C নিয়ন্ত্রিত হারের ফ্রিজারে রাখা একটি উত্তাপযুক্ত বাক্সে শিশি স্থাপন করে অর্জন করা হয়।

তরল নাইট্রোজেনে স্থানান্তর করুন

হিমায়িত ক্রায়োজেনিক শিশিগুলিকে তারপর অনির্দিষ্ট সময়ের জন্য একটি তরল নাইট্রোজেন ট্যাঙ্কে স্থানান্তরিত করা হয়, যদি তাপমাত্রা -১৩৫℃ এর কম বজায় থাকে।

এই অতি-নিম্ন তাপমাত্রা তরল বা বাষ্প পর্যায়ের নাইট্রোজেনে নিমজ্জিত করে পাওয়া যেতে পারে।

তরল নাকি বাষ্পীয় পর্যায়?

তরল পর্যায়ে নাইট্রোজেন সংরক্ষণের ফলে ঠান্ডা তাপমাত্রা সম্পূর্ণ ধারাবাহিকতা বজায় থাকে বলে জানা যায়, তবে প্রায়শই নিম্নলিখিত কারণে এটি সুপারিশ করা হয় না:

• তরল নাইট্রোজেনের বৃহৎ পরিমাণে (গভীরতার) প্রয়োজন যা একটি সম্ভাব্য বিপদ। এর ফলে পোড়া বা শ্বাসরোধ একটি বাস্তব ঝুঁকি।
• অ্যাসপারগিলাস, হেপাটাইটিস বি এবং তরল নাইট্রোজেন মাধ্যমের মাধ্যমে ভাইরাস ছড়িয়ে পড়ার মতো সংক্রামক এজেন্টদের দ্বারা ক্রস-দূষণের নথিভুক্ত ঘটনা (২,৩)
• নিমজ্জনের সময় তরল নাইট্রোজেন শিশিতে লিক হওয়ার সম্ভাবনা। স্টোরেজ থেকে সরিয়ে ঘরের তাপমাত্রায় গরম করলে, নাইট্রোজেন দ্রুত প্রসারিত হয়। ফলস্বরূপ, তরল নাইট্রোজেন শিশি থেকে সরানোর সময় শিশিটি ভেঙে যেতে পারে, যা উড়ন্ত ধ্বংসাবশেষ এবং এর উপাদানের সংস্পর্শে আসার ঝুঁকি তৈরি করে (1, 4)।

এই কারণে, অতি-নিম্ন তাপমাত্রার সঞ্চয়স্থান সাধারণত বাষ্প পর্যায়ে নাইট্রোজেনে থাকে। যখন নমুনাগুলি তরল পর্যায়ে সংরক্ষণ করতে হয়, তখন বিশেষায়িত ক্রায়োফ্লেক্স টিউবিং ব্যবহার করা উচিত।

বাষ্প পর্যায়ের নেতিবাচক দিক হল, একটি উল্লম্ব তাপমাত্রার গ্রেডিয়েন্ট ঘটতে পারে যার ফলে তাপমাত্রা -১৩৫℃ এবং -১৯০℃ এর মধ্যে ওঠানামা হতে পারে। এর জন্য তরল নাইট্রোজেনের মাত্রা এবং তাপমাত্রার তারতম্যের যত্ন সহকারে এবং পরিশ্রমের সাথে পর্যবেক্ষণ করা প্রয়োজন (৫)।

অনেক নির্মাতারা সুপারিশ করেন যে ক্রায়োভিয়ালগুলি -১৩৫℃ তাপমাত্রায় সংরক্ষণের জন্য বা শুধুমাত্র বাষ্প পর্যায়ে ব্যবহারের জন্য উপযুক্ত।

আপনার ক্রিওপ্রিজারভড কোষগুলিকে গলানো

হিমায়িত কালচারের জন্য গলানোর পদ্ধতিটি চাপপূর্ণ, এবং কোষগুলির সর্বোত্তম কার্যকারিতা, পুনরুদ্ধার এবং কার্যকারিতা নিশ্চিত করার জন্য সঠিক পরিচালনা এবং কৌশল প্রয়োজন। গলানোর সঠিক নিয়মগুলি নির্দিষ্ট কোষের ধরণের উপর নির্ভর করবে। তবে, দ্রুত গলানোর মান নিম্নলিখিত ক্ষেত্রে বিবেচনা করা হয়:

• কোষ পুনরুদ্ধারের উপর যেকোনো প্রভাব হ্রাস করুন
• হিমায়িত মাধ্যমে উপস্থিত দ্রাবকগুলির সংস্পর্শে আসার সময় কমাতে সাহায্য করুন
• বরফ পুনঃক্রিস্টালাইজেশনের মাধ্যমে যেকোনো ক্ষতি কমিয়ে আনুন

নমুনা গলানোর জন্য সাধারণত জল স্নান, পুঁতির স্নান, অথবা বিশেষায়িত স্বয়ংক্রিয় যন্ত্র ব্যবহার করা হয়।

প্রায়শই ১টি কোষের লাইন ১-২ মিনিটের জন্য গলানো হয়, ৩৭℃ তাপমাত্রার জলের স্নানে আলতো করে ঘুরিয়ে যতক্ষণ না শিশিতে সামান্য বরফ অবশিষ্ট থাকে এবং তারপর একটি পূর্ব-উষ্ণ বৃদ্ধি মাধ্যমে ধুয়ে ফেলা হয়।

স্তন্যপায়ী ভ্রূণের মতো কিছু কোষের জন্য, তাদের বেঁচে থাকার জন্য ধীর উষ্ণতা অপরিহার্য।

কোষগুলি এখন কোষ সংস্কৃতি, কোষ বিচ্ছিন্নতা, অথবা হেমাটোপয়েটিক স্টেম সেলের ক্ষেত্রে প্রস্তুত - মায়োলোঅ্যাবলেটেটিভ থেরাপির আগে দাতা স্টেম সেলগুলির অখণ্ডতা নিশ্চিত করার জন্য কার্যকারিতা অধ্যয়ন।

প্রলেপ দেওয়ার জন্য কোষের ঘনত্ব নির্ধারণের জন্য কোষ গণনা করার জন্য ব্যবহৃত প্রি-ওয়াশ করা নমুনার ছোট ছোট অ্যালিকোট নেওয়া স্বাভাবিক অভ্যাস। এরপর আপনি কোষ বিচ্ছিন্নকরণ পদ্ধতির ফলাফল মূল্যায়ন করতে পারেন এবং কোষের কার্যকারিতা নির্ধারণ করতে পারেন।

ক্রায়োভিয়াল সংরক্ষণের জন্য সর্বোত্তম অনুশীলন

ক্রায়োভিয়ালে সংরক্ষিত নমুনার সফল ক্রিওপ্রিজারভেশন প্রোটোকলের অনেক উপাদানের উপর নির্ভর করে যার মধ্যে রয়েছে সঠিক সংরক্ষণ এবং রেকর্ড রাখা।

• স্টোরেজ অবস্থানের মধ্যে কোষ বিভক্ত করুন– যদি পরিমাণ অনুকূল থাকে, তাহলে সরঞ্জামের ব্যর্থতার কারণে নমুনা নষ্ট হওয়ার ঝুঁকি কমাতে কোষগুলিকে শিশির মধ্যে ভাগ করুন এবং আলাদা জায়গায় সংরক্ষণ করুন।
• ক্রস-দূষণ রোধ করুন- পরবর্তী ব্যবহারের আগে একবার ব্যবহারযোগ্য জীবাণুমুক্ত ক্রায়োজেনিক ভায়াল বা অটোক্লেভ বেছে নিন।
• আপনার কোষের জন্য উপযুক্ত আকারের শিশি ব্যবহার করুন- শিশি ১ থেকে ৫ মিলিলিটারের মধ্যে বিভিন্ন পরিমাণে পাওয়া যায়। ফাটার ঝুঁকি কমাতে শিশি অতিরিক্ত ভর্তি করা এড়িয়ে চলুন।
• অভ্যন্তরীণ বা বহিরাগত থ্রেডেড ক্রায়োজেনিক শিশি নির্বাচন করুন– কিছু বিশ্ববিদ্যালয় নিরাপত্তা ব্যবস্থার জন্য অভ্যন্তরীণভাবে থ্রেডেড শিশি ব্যবহারের পরামর্শ দেয় – এগুলি ভর্তি করার সময় বা তরল নাইট্রোজেনে সংরক্ষণ করার সময় দূষণ রোধ করতে পারে।
• ফুটো রোধ করুন- লিকেজ এবং দূষণ রোধ করতে স্ক্রু-ক্যাপ বা ও-রিং-এ ঢালাই করা দ্বি-ইনজেকশনযুক্ত সিল ব্যবহার করুন।
• 2D বারকোড এবং লেবেল ভায়াল ব্যবহার করুন- ট্রেসেবিলিটি নিশ্চিত করার জন্য, বড় লেখার জায়গা সহ ভায়াল প্রতিটি ভায়ালকে পর্যাপ্ত লেবেলযুক্ত করতে সক্ষম করে। 2D বারকোড স্টোরেজ ব্যবস্থাপনা এবং রেকর্ড রাখার ক্ষেত্রে সাহায্য করতে পারে। রঙিন কোডেড ক্যাপগুলি সহজে শনাক্তকরণের জন্য কার্যকর।
• পর্যাপ্ত সংরক্ষণ রক্ষণাবেক্ষণ- কোষগুলি যাতে নষ্ট না হয় তা নিশ্চিত করার জন্য, স্টোরেজ পাত্রগুলিতে তাপমাত্রা এবং তরল নাইট্রোজেনের মাত্রা ক্রমাগত পর্যবেক্ষণ করা উচিত। ব্যবহারকারীদের ত্রুটি সম্পর্কে সতর্ক করার জন্য অ্যালার্ম লাগানো উচিত।

নিরাপত্তা সতর্কতা

আধুনিক গবেষণায় তরল নাইট্রোজেন একটি সাধারণ অভ্যাস হয়ে উঠেছে, কিন্তু ভুলভাবে ব্যবহার করলে গুরুতর আঘাতের ঝুঁকি রয়েছে।

তরল নাইট্রোজেন ব্যবহার করার সময় তুষারপাত, পোড়া এবং অন্যান্য প্রতিকূল ঘটনার ঝুঁকি কমাতে যথাযথ ব্যক্তিগত সুরক্ষামূলক সরঞ্জাম (PPE) পরা উচিত।

• ক্রায়োজেনিক গ্লাভস
• ল্যাবরেটরি কোট
• প্রভাব প্রতিরোধী ফুল ফেস শিল্ড যা ঘাড়ও ঢেকে রাখে
• বন্ধ পায়ের জুতা
• স্প্ল্যাশপ্রুফ প্লাস্টিকের অ্যাপ্রোন

তরল নাইট্রোজেন রেফ্রিজারেটরগুলিকে ভাল বায়ুচলাচলযুক্ত জায়গায় স্থাপন করা উচিত যাতে শ্বাসরোধের ঝুঁকি কম হয় - বেরিয়ে যাওয়া নাইট্রোজেন বায়ুমণ্ডলীয় অক্সিজেনকে বাষ্পীভূত করে এবং স্থানচ্যুত করে। বড় আয়তনের দোকানগুলিতে কম অক্সিজেন অ্যালার্ম সিস্টেম থাকা উচিত।

তরল নাইট্রোজেন ব্যবহার করার সময় জোড়ায় জোড়ায় কাজ করা আদর্শ এবং স্বাভাবিক কর্মঘণ্টার বাইরে এর ব্যবহার নিষিদ্ধ করা উচিত।

আপনার কর্মপ্রবাহকে সমর্থন করার জন্য ক্রায়োভিয়াল

সুঝো এস বায়োমেডিকেল কোম্পানি বিভিন্ন ধরণের কোষের জন্য আপনার ক্রিওপ্রিজারভেশনের চাহিদা পূরণ করে এমন পণ্যের বিস্তৃত নির্বাচন অফার করে। পোর্টফোলিওতে বিভিন্ন ধরণের টিউবের পাশাপাশি জীবাণুমুক্ত ক্রায়োভিয়ালের একটি পরিসর অন্তর্ভুক্ত রয়েছে।

আমাদের ক্রায়োভিয়ালগুলি হল:

• ল্যাব স্ক্রু ক্যাপ ০.৫ মিলি ১.৫ মিলি ২.০ মিলি ক্রায়োভিয়াল ক্রায়োজেনিক ভায়ালস কনিকাল বটম ক্রায়োটিউব গ্যাসকেট সহ

  ● 0.5 মিলি, 1.5 মিলি, 2.0 মিলি স্পেসিফিকেশন, স্কার্ট সহ বা স্কার্ট ছাড়াই
  ● শঙ্কুযুক্ত বা স্ব-স্থায়ী নকশা, জীবাণুমুক্ত বা অ-জীবাণুমুক্ত উভয়ই উপলব্ধ
  ● স্ক্রু ক্যাপ টিউবগুলি মেডিকেল গ্রেড পলিপ্রোপিলিন দিয়ে তৈরি
  ● পিপি ক্রায়োটিউব ভায়াল বারবার হিমায়িত এবং গলানো যেতে পারে
  ● নমুনা চিকিৎসার সময় বহিরাগত ক্যাপ নকশা দূষণের সম্ভাবনা কমাতে পারে।
  ● স্ক্রু ক্যাপ ক্রায়োজেনিক টিউব ব্যবহারের জন্য ইউনিভার্সাল স্ক্রু থ্রেড
  ● টিউবগুলি সবচেয়ে সাধারণ রোটরগুলিতে ফিট করে
  ● ক্রায়োজেনিক টিউব ও-রিং টিউবগুলি স্ট্যান্ডার্ড 1-ইঞ্চি এবং 2-ইঞ্চি, 48well, 81well, 96well এবং 100well ফ্রিজার বাক্সের সাথে মানানসই।
  ● ১২১°C তাপমাত্রায় অটোক্লেভেবল এবং -৮৬°C তাপমাত্রায় ফ্রিজেবল

  অংশ নং	উপাদান	ভলিউম	ক্যাপরঙ	পিসিএস/ব্যাগ	ব্যাগ/কেস
  ACT05-BL-N এর বিশেষ উল্লেখ	PP	০.৫ মিলি	কালো, হলুদ, নীল, লাল, বেগুনি, সাদা	৫০০	10
  ACT15-BL-N লক্ষ্য করুন	PP	১.৫ মিলি	কালো, হলুদ, নীল, লাল, বেগুনি, সাদা	৫০০	10
  ACT15-BL-NW লক্ষ্য করুন	PP	১.৫ মিলি	কালো, হলুদ, নীল, লাল, বেগুনি, সাদা	৫০০	10
  ACT20-BL-N এর বিশেষ উল্লেখ	PP	২.০ মিলি	কালো, হলুদ, নীল, লাল, বেগুনি, সাদা	৫০০	10