Nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን፡ እየተጠቀሙበት ያለው የአሳሽ ስሪት ለCSS የተገደበ ድጋፍ አለው። ለምርጥ ተሞክሮ የተሻሻለ አሳሽ (ወይም የተኳሃኝነት ሁነታን በInternet Explorer ውስጥ እንዲያጠፉት) እንመክርዎታለን። እስከዚያው ድረስ ለማረጋገጥ። ቀጣይነት ያለው ድጋፍ, ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናሳያለን.
የኮቪድ-19 ወረርሽኝ ወረርሽኝ ከጀመረበት ጊዜ አንስቶ የአካባቢ ናሙናዎችን የመከታተል አስፈላጊነት በጣም አድናቆት የተቸረው ሲሆን አንዳንድ የክትትል ጥረቶች የወርቅ ደረጃን በመጠቀም በመከናወን ላይ ናቸው፣ ምንም እንኳን qPCR ላይ የተመሰረቱ ቴክኒኮች ውድ ቢሆኑም ኤሌክትሮኬሚካል የዲ ኤን ኤ ባዮሴንሰር ወጪ ቆጣቢ ሊሆን ይችላል። ዝቅተኛ እና መካከለኛ ገቢ ባላቸው አገሮች ውስጥ የአካባቢ የውሃ ናሙናዎችን ለመቆጣጠር መፍትሄ በዚህ ሥራ ፣ ENIG ን በመጠቀም ከ Phi6 phage የተገኙትን አምፖሎች ከፋይ ሀይቅ ውሃ ናሙናዎች (ለ SARS-CoV-2 ታዋቂ ምትክ) የኤሌክትሮኬሚካላዊ ግኝትን እናሳያለን። ያለ ወለል ማሻሻያ PCB ኤሌክትሮዶችን ለማጠናቀቅ.sex. የኤሌክትሮኬሚካላዊ ዳሳሽ ምላሽ ለሁለት ዲኤንኤ ቁርጥራጮች የተለያየ ርዝመት (\({117}\,\hbox {bp}\) እና \({503}\,\hbox {bp}\)) እና በ PCR ውስጥ ያለው የጨው ውጤት በሜቲሊን ሰማያዊ (ኤምቢ) - ዲ ኤን ኤ መስተጋብር ላይ ይደባለቃል.የእኛ ውጤቶች እንደሚያሳዩት የዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮች ርዝመት የኤሌክትሮኬሚካላዊ ስሜትን በእጅጉ እንደሚወስን እና የ PCR ምርቶችን ጄል ሳያጸዳ ረጅም አምፖሎችን የመለየት ችሎታ በዚህ ሥራ ውስጥ ያሳያል ። በቦታው ውስጥ የውሃ ናሙናዎችን ለመለካት አስፈላጊ ነው.ለቫይረስ ሎድ ሙሉ በሙሉ በራስ-ሰር የሚሰራ መፍትሄ በደንብ ይሸፍናል.
የውሃ ወለድ ቫይረስ ስርጭት ከ1940ዎቹ ጀምሮ በህብረተሰብ ጤና ጠንቅነት ይታወቃል።በመጀመሪያው ማስረጃ በውሃ ወለድ የሚተላለፉ የፖሊዮ እና ሄፓታይተስ ኢ1 ናቸው።የአለም ጤና ድርጅት ከመካከለኛ እስከ ከፍተኛ የጤና ጠቀሜታ ያላቸውን በርካታ የውሃ ወለድ በሽታ አምጪ ተህዋሲያን መድቧል። የማወቂያ ዘዴዎች በወርቅ ደረጃ qPCR ላይ የተመሰረቱ ቴክኒኮች በጣም ሚስጥራዊነት ያላቸው እና ልዩ ናቸው ነገር ግን የተካኑ ባለሙያዎች ውድ መሳሪያዎችን በመጠቀም በቤተ ሙከራ ውስጥ እንዲሞክሩ ይጠይቃሉ። የናሙና ምርመራ ከአካባቢ ውሀ ናሙና ክትትል ቀዳሚ ሊሆን ይችላል።ስለዚህ በዝቅተኛ እና መካከለኛ ገቢ ባላቸው ሀገራት የውሃ እና ቆሻሻ ውሃ ናሙናዎችን በዘላቂነት ለመከታተል አማራጭ ዝቅተኛ ወጭ ዘዴዎች ያስፈልጋሉ የበሽታ ወረርሽኝ ቅድመ ማስጠንቀቂያ። በዚህም ከቫይረሱ ወረርሽኙ ከሚያስከትላቸው ማህበራዊ ኢኮኖሚያዊ ተፅእኖዎች ይጠብቃቸዋል።ለኒውክሊክ አሲዶች አነስተኛ ዋጋ ያላቸው ኤሌክትሮኬሚካላዊ ባዮሴንሰርዎች ለዚህ ያልተሟላ ፍላጎት ተስፋ ሰጪ መፍትሄ ሊሰጡ ይችላሉ።ከእነዚህ አብዛኛዎቹ የዲኤንኤ ባዮሴንሰሮች የሚሠሩት ተጨማሪ የዲ ኤን ኤ ክሮች በኤሌክትሮድ ላይ የማይንቀሳቀሱ በመሆናቸው ነው። በናሙናው ውስጥ የሚዛመደው ቅደም ተከተል በሚኖርበት ጊዜ ላይ ላዩን እና ማዳቀል።ይህም በተለያዩ ኤሌክትሮኬሚካላዊ ቴክኒኮች እንደ ፖታሲየም ብረት/ፌሮሲያናይድ ያሉ ሬዶክስ አስታራቂዎችን በመጠቀም ወደ ሲግናል ሊቀየር ይችላል።ሚቲሊን ሰማያዊ (ኤምቢ) ከእንደዚህ አይነት ሬዶክስ አክቲቭ ሞለኪውል ውስጥ አንዱ ነው። ወደ ባለ ሁለት ፈትል ዲ ኤን ኤ (ዲኤስዲኤንኤ) መጠላለፉ ተዘግቧል። ዳሳሽ ውቅሮች5,6,7,8,9. ምንም እንኳን የሜባ ወደ ዲ ኤን ኤ መካከል ያለው ግንኙነት ልዩ ባይሆንም, እና የዚህ ኤሌክትሮኬሚካላዊ ዳሳሽ ልዩነት በአብዛኛው የተመካው ለ PCR ወይም ለ isothermal ማጉላት ጥቅም ላይ በሚውሉት የፕሪሚየር ንፅህና ላይ ነው, እውነተኛውን ለመተግበር በጣም ተስማሚ ነው. -Time electrochemical-based qPCR ወይም fluorescence isothermal amplification ከዲኤንኤ ማጎሪያ ልኬት 9 እንደ አማራጭ .በአንዱ እንደዚህ አይነት አተገባበር ውስጥ ዎን እና ሌሎች የወርቅ ኤሌክትሮዶች ገጽታ በ6-mercapto-1-hexanol (MCH) ለእውነተኛ ጊዜ ተስተካክሏል። የ PCR amplicons በ MB መለካት ልዩነት የ pulse voltammetry (DPV) 9. በሌሎች ሁኔታዎች, ራሚሬዝ እና ሌሎች በ ‹SARS-CoV-2› ቆሻሻ ውሃ ውስጥ በ RT-LAMP ምላሽ በኤምቢ በስክሪን የታተሙ ኤሌክትሮዶችን መለየት ። የፕላቲኒየም ኤሌክትሮዶች እንዲሁ ተደርገዋል ። በምላሾች ጊዜ በኤሌክትሮኬሚካላዊ ሁኔታ ለመለየት በተዘጋጀው በማይክሮፍሉይዲክ ፒሲአር መድረክ ውስጥ እንደ ቦታው ኤሌክትሮዶች ጥቅም ላይ ይውላሉ ። እነዚህ ሁሉ ጥናቶች የኤሌክትሮዶችን ወለል ማሻሻያ ይፈልጋሉ ፣ ይህም ለእነዚህ ተግባራዊ ኤሌክትሮዶች መረጋጋት ልዩ የማከማቻ መስፈርቶች ምክንያት የምርት እና የሥራ ማስኬጃ ወጪዎችን ይጨምራል ።
በሐይቅ ውሃ ናሙናዎች ውስጥ ከተከማቹ የቫይረስ ቅንጣቶች የተገኙ አምፖሎችን በኤሌክትሮኬሚካላዊ ሁኔታ ለመለየት የሥራው ሂደት መርሃ ግብር።
በቅርብ ጊዜ የ SARS-CoV-2 ampliconsን በዝቅተኛ ወጪ የታተመ የወረዳ ሰሌዳ (ፒሲቢ) ኤሌክትሮዶች በዲፒቪ እና ሳይክሊክ ቮልታሜትሪ (ሲቪ) ላይ የኤምቢ-ዲኤንኤ ውህዶች ባልተሻሻሉ ኤሌክትሮዶች ወለል ላይ በማስተዋወቅ የኤሌክትሮኬሚካላዊ ዳሳሾችን አሳይተናል ) ከፍተኛ ለውጦች ወቅታዊ11.ረዣዥም የዲኤንኤ ቁርጥራጮች (N1-N2፣ \({943}\፣ \hbox) በሲዲሲ የሚመከር N1 ወደፊት እና N2 ተቃራኒ ፕሪመር በመጠቀም የተፈጠሩት ከአጫጭር ቁርጥራጮች {bp}\)) በሴንሰሩ ምላሽ ላይ የተሻለ መስመራዊነት እንዳሳዩ ሪፖርት እናደርጋለን። (N1, \(72\,\hbox {bp}\)) N1 forward and N1 reverse primer sets በመጠቀም ተፈጠረ።እነዚህ ጥናቶች የተዘገቡት ከኒውክሊየስ ነፃ በሆነ ውሃ ውስጥ የተዘጋጁ የዲ ኤን ኤ ውህዶችን በመጠቀም ነው። የመሳሪያ ስርዓቱ SARS-CoVን ለመለየትም ጥቅም ላይ ውሏል። -2 amplicons በተመሰለው የቆሻሻ ውሃ ናሙናዎች (ጠቅላላ የአር ኤን ኤ ናሙናዎችን ከ SARS-CoV-2 አር ኤን ኤ በመምጠጥ የተገኘ)።አር ኤን ኤ በገለልተኛ እና በታችኛው ተፋሰስ ሂደት ጊዜ ለመላጨት የተጋለጠ ስለሆነ፣12,13 በዚህ የተለያዩ ናሙናዎች ረዘም ያሉ ቁርጥራጮችን ማጉላት ከባድ ነው። ስለዚህ በቆሻሻ ውሃ ውስጥ የ SARS-CoV-2 amplicon የኤሌክትሮኬሚካላዊ ዳሰሳ ማሳያ በትንሹ \(72 \ ፣ \ hbox {bp} \) N1 ቁራጭ ብቻ የተገደበ ነው።
በዚህ ሥራ በ ENIG PCB ላይ የተመሰረተ ኤሌክትሮኬሚካላዊ ዳሰሳ phage Phi6 ኮንሰንትሬትድ እና ከሐይቅ ውሃ ናሙናዎች (ምስል 1) የተገለለ መሆኑን መርምረናል.Phi6 phages በመጠን (80-100 nm) ከ SARS-CoV-2 እና ጋር ይነጻጸራሉ. በተጨማሪም የሊፕድ ሽፋን እና የሾል ፕሮቲን አላቸው ። በእነዚህ ምክንያቶች ባክቴሪዮፋጅ Phi6 ለ SARS-CoV-2 ታዋቂ ምትክ ነው እና ሌሎች የታሸጉ በሽታ አምጪ አር ኤን ኤ ቫይረሶች 14,15.አር ኤን ኤ ከፋጌ ቅንጣቶች ተለይቶ ለ cDNA ውህደት አብነት ጥቅም ላይ ውሏል ። PCR የ 117 እና 503 ቤዝ ጥንድ ጥንድ ርዝመት ያላቸውን ሁለት የዲኤንኤ ቁርጥራጮች ለማግኘት \(943 \,\ hbox {bp}\) N1-N2 ቁርጥራጮችን በቀደመው ሥራችን የማጉላት ፈታኝ ሁኔታን ከግምት ውስጥ በማስገባት መካከለኛ ርዝመት ቁርጥራጮችን (\(117) \፣\hbox {bp} \hbox {pg}/{\upmu \hbox {l}}}\) ወደ \({20}\, {\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\)) ለሁለቱም ቁርጥራጮች በ ውስጥ የሜባ መገኘት, የጨው ተጽእኖ በሴንሰሩ ምላሽ ላይ ተለይቷል እና በ spectrophotometric መመዘኛዎች ተሻግሯል. የዚህ ሥራ ዋና አስተዋፅኦዎች እንደሚከተለው ናቸው.
የዲ ኤን ኤ ቁራጭ ርዝመት እና በናሙናው ውስጥ ያለው የጨው መኖር ስሜትን በእጅጉ ይጎዳል።ውጤታችን እንደሚያሳየው የኤሌክትሮኬሚካላዊ እንቅስቃሴ በኤምቢ ፣ ዲ ኤን ኤ እና በቮልታሜትሪክ ምላሽ ውስጥ ያለው ዳሳሽ በዲ ኤን ኤ ትኩረት እና ርዝማኔ ላይ ባለው ግንኙነት በተለያዩ ዘዴዎች ላይ የተመረኮዘ ነው ፣ ረዘም ያለ ቁርጥራጮች ከፍተኛ ትብነት ያሳያሉ ፣ ምንም እንኳን ጨው በኤሌክትሮስታቲክ ግንኙነቶች ላይ አሉታዊ ተጽዕኖ ያሳድራል። ሜባ እና ዲ ኤን ኤ.
የዲ ኤን ኤ ክምችት ባልተለወጠ ኤሌክትሮዶች ውስጥ የ MB-DNA መስተጋብር ዘዴን ይወስናል የተለያዩ የ MB-DNA መስተጋብር ዘዴዎች በዲ ኤን ኤ ትኩረት ላይ የተመሰረቱ መሆናቸውን እናሳያለን. የዲ ኤን ኤ ክምችት ከትንሽ የ \({\hbox {ng}/{\upmu \hbox) መጠን በታች ነው {l}}}\)፣ የኤሌክትሮኬሚካላዊ ወቅታዊ ምላሽ በዋናነት የሚወሰነው በኤምባ-ዲኤንኤ በኤሌክትሮድ ላይ በማስተዋወቅ ሲሆን በዝቅተኛ መጠን ደግሞ በከፍተኛ የዲ ኤን ኤ ክምችት ላይ የኤሌክትሮኬሚካላዊ ወቅታዊ ምላሽ የሚወሰነው በ redox steric inhibition ነው በዲኤንኤ ቤዝ ጥንዶች መካከል በኤምቢ በማስገባቱ ምክንያት እንቅስቃሴ።
በ ENIG PCB ላይ የተመሰረተ ኤሌክትሮኬሚካላዊ የቫይራል ኑክሊክ አሲዶች በሐይቅ የውሃ ናሙናዎች ምልከታዎቹ የተረጋገጡት በPhi6-added \(503\,\hbox {bp}\) የዲኤንኤ ቁርጥራጮች ከፖዋይ ሐይቅ፣ IIT ሙምባይ ካምፓስ የውሃ ናሙናዎች የተገኙ በኤሌክትሮኬሚካል ማወቂያ ነው። የውጤት ገፅ።
አነስተኛ የአተገባበር ዋጋ እና ወደ ሙሉ በሙሉ አውቶማቲክ የክትትል ስርዓቶች ፣ ኦሊጎኑክሊዮታይዶች ወይም አፕታመሮች በኤሌክትሮዶች ላይ ረዘም ያለ የመቆያ ጊዜ የመቀላቀል አቅም።
Phage Phi6 በሳይቶቪሪዳ ቤተሰብ የተሸፈነ የ DSRNA ቫይረስ Pseudomonas syringae ን ይጎዳል። \፣\hbox {Kb} እና በቀላሉ በቤተ ሙከራ ውስጥ ሊበቅል ይችላል.Phage Phi6 እና አስተናጋጁ Pseudomonas ሲሪንጋ የተገዙት ከፊሊክስ ዲ ሄሬሌ የባክቴሪያ ቫይረስ ማጣቀሻ ማዕከል, ላቫል ዩኒቨርሲቲ, ካናዳ (የማጣቀሻ ማእከል ካታሎግ ቁጥሮች HER-102 እና HER-1102, በቅደም ተከተል) .Phi6 phage እና አስተናጋጁ በማመሳከሪያ ማዕከሉ እንደተነገረው ታድሰዋል።Phage Phi6 በፕላስቲን ሊሲስ እና በኤሌሽን የጸዳ በ \(\ about 10^{12}\,{\hbox {PFU}/\hbox { ml}}\) (ፕላክ ፎርሚንግ አሃዶች/ሚሊሊተሮች)።አር ኤን ኤ በአምራቹ መመሪያ መሰረት GenElute™ Universal Total RNA Purification Kit (ሲግማ-አልድሪች) በመጠቀም ከተጣራ phage ቅንጣቶች ተለይቷል። 100}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) lysed ተደረገ እና አር ኤን ኤ ከሬዚን አምድ ጋር እንዲተሳሰር ለማስቻል ሊይዛቱ በአከርካሪ አምድ ላይ ተጭኗል። 50}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) የቀረበው በኪት ነው። የአር ኤን ኤውን መጠን በመምጠጥ በ \(260\,\hbox {nm}\) ይገምቱ።አር ኤን ኤ በ \ (260\,\hbox {nm})) ውስጥ ተከማችቷል ። ({-80}\,{^{\circ }\hbox {C}}\) ተጨማሪ ጥቅም ላይ እስኪውል ድረስ።\({2}\,{\upmu \hbox {g}}\) የ iScript cDNA Synthesis Kit (ባዮ) -ራድ ላቦራቶሪዎች) የአምራቹን መመሪያ በመከተል ለ cDNA ውህደት እንደ አብነት ጥቅም ላይ ውሏል።በአጭሩ የሲዲኤንኤ ውህደት ምላሽ 3 ደረጃዎችን ያቀፈ ነው፡ priming በ \({25}\,{^{\circ }\hbox {C}}\) )\({5}\,{\hbox {ደቂቃ} } }\hbox {C}} }}\) በ1% አጋሮዝ ጄል ላይ ሲኬድ ሲዲኤንኤ ከተጠበቀው ሶስት የአር ኤን ኤ ቁርጥራጮች ጋር የሚዛመዱ ሶስት ባንዶችን አሳይቷል (መረጃው አልተገለጸም)። የሚከተሉት ፕሪመርሮች የ 117 እና 503 bp ርዝመት ያላቸውን ሁለት የዲኤንኤ ቁርጥራጮች ለማጉላት ይጠቅማሉ። በ miniPCR® mini8 thermal cycler ውስጥ cDNA እንደ አብነት PCR በመጠቀም፡-
የ \(117\,\hbox {bp}\) እና \(503\,\hbox {bp}\) ፕሪመርስ ከ1476-1575 ኑክሊዮታይድ የኤም ክፍል እና 458-943 ኑክሊዮታይድ የኤል ክፍል፣ በቅደም ተከተል አሲድ ጋር ይዛመዳሉ። ሁሉም የተጠናከረ PCR ምርቶች በ 1% አጋሮዝ ጄል ላይ በኤሌክትሮፊዮራይዝድ ተቀርፀዋል፣ እና የተጠናከረ ኢላማ ዲ ኤን ኤ በጄኔጄት ጄል ኤክስትራክሽን ኪት (ቴርሞ ፊሸር ሳይንቲፊክ) ተጠቅሟል።
በ IIT ሙምባይ ካምፓስ (Powai Lake፣ Powai፣ Mumbai) ላይ ያለ ሐይቅ የፋጌ ቅንጣቶችን ለመጨመር ጥቅም ላይ ውሏል።የሐይቁ ውሃ በ \({5}\፣{\upmu \hbox {m}}\) ሽፋን ተጣርቶ እንዲወገድ ተደርጓል። የታገዱ ቅንጣቶች፣ እና ከዚያ Phi6 phage ተጨምሯል። \) ወደ \( {100}\ , {\hbox {ml}} ለቫይራል ሎድ ልኬት በፕላክ አሴይ ተወስኗል።የተሾሙ የPhi6 ቫይረስ ቅንጣቶችን ለማሰባሰብ ሁለት የተለያዩ ዘዴዎችን ሞክረናል፡(1)የአልሙኒየም ሃይድሮክሳይድ ማስታወቂያ-የዝናብ ዘዴ፣19 በርካታ የታሸጉ አር ኤን ኤ ቫይረሶች ከአካባቢያዊ ናሙናዎች በመሰብሰብ የተረጋገጠ (2)) ፖሊ polyethylene glycol (PEG) ላይ የተመሰረተ የቫይረስ ማጎሪያ ዘዴ ከ Flood et al.20. የ PEG-based ዘዴ መልሶ ማግኘቱ ከአሉሚኒየም ሃይድሮክሳይድ ዘዴ የተሻለ ሆኖ ስለተገኘ PEG ላይ የተመሰረተ ዘዴ የ Phi6 ቅንጣቶችን ከሃይቅ ውሃ ናሙናዎች ለማሰባሰብ ጥቅም ላይ ይውላል.
ጥቅም ላይ የዋለው የPEG ዘዴ እንደሚከተለው ነበር፡- PEG 8000 እና \(\hbox {NaCl} \ hbox {NaCl}\) ናሙናዎች በሻከር ላይ ተቀርፀዋል({4}\,{^{\circ}\hbox {C}}\)\({4}\,{\hbox {h}}\) ), ከዚያም በ \(4700 \,\hbox {g}\) \({45}\,{\hbox {min}}\) ላይ ያተኮረ። ከፍተኛውን አስወግድ እና እንክብሉን በ \({1}\, {\hbox {ml}}\) በተመሳሳዩ ሱፐርናታንት ውስጥ ሁሉም የስፒኪንግ እና የቫይረስ ማጎሪያ ሙከራዎች በሶስት እጥፍ ተካሂደዋል። ትኩረትን ከሰጡ በኋላ የመልሶ ማግኛ ቅልጥፍናን በፕላክ assay ለመለካት ትንሽ አሊኮት ተይዟል። አር ኤን ኤ ቀደም ሲል እንደተገለፀው ተነጥሎ ወጥቷል። በ Kit-supplied elution buffer\({40}\,{\upmu \hbox {l}}\)።የአር ኤን ኤ ትኩረቱ ከናሙና እስከ ናሙና በሶስት ቅጂ ስለሚለያይ \({2}\,{\upmu \) hbox {l}}\) አር ኤን ኤ ትኩረቱ ምንም ይሁን ምን ለሦስቱም ጥቅም ላይ ይውላል። ለ \({20}\,{\upmu \hbox {l}}\) PCR ለ35 ዑደቶች \(117\,\hbox {bp}\) እና \(503\,\hbox {bp}\) ለማጉላት እንደ አብነት ጥቅም ላይ ውሏል። bp}\) ቁርጥራጭ።እነዚህ ናሙናዎች እንደ “1፡1″፣ ማለትም ያለመሟሟት ተወክለዋል። አብነት የሌለበት ቁጥጥር (ኤንቲሲ) እንደ አሉታዊ ቁጥጥር ተዋቅሯል፣ ሲዲ ኤን ኤ ደግሞ ከተጣራ phage የነጠለ አር ኤን ኤ በመጠቀም የተቀናበረ ነው። እንደ አብነት ለአዎንታዊ ቁጥጥር (ፒሲ)።Quantitative PCR (qPCR) በ Stratagene Mx3000P RT-PCR መሣሪያ የተከናወነው Brilliant III Ultra-Fast SYBR Green QPCR Master Mix (Agilent Technologies) በመጠቀም ነው።ምላሾች እንደቀድሞው በሶስት መልክ ተቀምጠዋል። የዑደት ገደብ (ሲቲ) ለሁሉም ናሙናዎች ተመዝግቧል። በተጨማሪም፣ የተቀበሩት ናሙናዎች \({1}\,{\upmu \hbox {l}}\) ነበሩ ሲዲ ኤን ኤ 1:100 በተጣራ የሐይቅ ውሃ ውስጥ ተበርዟል \({20}\,{\upmu \hbox {l}}\) PCR ለ35 ዑደቶች። እነዚህ ናሙናዎች እንደ “1፡100″ ነው የሚወከሉት።
የፒሲቢ ኤሌትሮዶች የሚሠሩት በዝቅተኛ ወጪ የኤሌክትሮል አልባ ኒኬል ኢመርሽን ወርቅ (ENIG) ሂደትን በመጠቀም ተጨማሪ የወርቅ ፕላትቲንግ ሳያስፈልግ ነው።ENIG PCB electrode specifications በቀደመው ሥራችን ላይ ተዘርዝረዋል። የፒራንሃ መፍትሄ ወይም የሰልፈሪክ አሲድ ሳይክሊክ ቮልታሜትሪ አይመከሩም ምክንያቱም ቀጭን የወርቅ ንብርብር (ውፍረት \(\ግምት\) \(100\,\hbox {nm }\) ልጣጭ ስለሚያደርጉ እና የተጋለጡትን የመዳብ ንብርብሮች ያጋልጣሉ. ወደ ዝገት 21, 22, 23, 24, 25. ስለዚህ ኤሌክትሮዶችን ከአይ.ፒ.አይ. ጋር በተሸፈነ ጨርቅ ያጸዱ. የሚፈተነው ናሙና በ \({50}\,{\upmu \hbox {M}) ተቀርጿል. }\) ሜባ በ \({4}\,{^{\circ }\hbox {C}}\)\({1}\,{\hbox {h}}\) በቀላሉ ለማስገባት።በቀደመው ስራችን የሜባ ትኩረትን 11 በመጨመር የሴንሴቲቭ እና የሊኒየርነት መሻሻልን አስተውለናል.በቀደምት ስራችን ላይ በተገለጹት ማመቻቸት ላይ በመመስረት \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB እንጠቀማለን. በዚህ ጥናት ውስጥ ዲ ኤን ኤ ለመክተት ትኩረት ይስጡ። በኤሌክትሮኬሚካላዊ የዲ ኤን ኤ ዲ ኤን ኤ (ዲ ኤን ኤ) መለየት አኒዮኒክ ወይም cationic intercalators በመጠቀም ሊገኝ ይችላል ። ምንም እንኳን አኒዮኒክ ኢንተርካለተሮች ዲ ኤን ኤ በተሻለ መራጭነት ቢያገኙም በአንድ ሌሊት መፈልፈያ ያስፈልጋቸዋል ፣ በዚህም ምክንያት ረዘም ያለ ጊዜ የመለየት ጊዜ ያስከትላል ። በሌላ በኩል፣ እንደ ሜባ ያሉ cationic intercalators ds-DNA6 ኤሌክትሮኬሚካል ለማግኘት በግምት \({1}\፣{\hbox {h}}\) አጭር የመታቀፊያ ጊዜ ያስፈልጋቸዋል። እያንዳንዱ መለኪያ በ electrode\({5}\,{{\upmu \hbox {l}}}\)፣ ከዚያም ሌላ ናሙና ከመቀጠልዎ በፊት በአይፒኤ እርጥብ ጨርቅ ያፅዱ።አንድ መለኪያ.እያንዳንዱ ናሙና በ 5 የተለያዩ ኤሌክትሮዶች ላይ የተሞከረው በሌላ መልኩ ካልሆነ በቀር የዲቪዲ እና የሲቪ ልኬቶች የተከናወኑት PalmSens Sensit Smart potentiostat በመጠቀም ነው፣ እና PSTrace ሶፍትዌር ለፖታቲዮስታት ውቅር እና መረጃ ለማግኘት ያገለግል ነበር፣ የአሁኑን ከፍተኛ ስሌቶች ጨምሮ። የሚከተሉት መቼቶች ጥቅም ላይ ይውላሉ። ለDPV እና CV መለኪያዎች፡-
DPV፡ ሚዛናዊ ጊዜ = \(8\,\hbox {s}\)፣ የቮልቴጅ ደረጃ = \(3\,\hbox {mV}\)፣ Pulse Voltage = \(25\,\hbox {mV}\)፣ የ pulse duration = \(50\,\hbox {ms}\), የፍተሻ መጠን = \({20}\,\hbox {mV/s}\)
CV፡ ሚዛናዊ ጊዜ = \(8\,\hbox {s}\)፣ የቮልቴጅ ደረጃ = \(3\,\hbox {mV}\)፣ የመጥረግ መጠን = \({300}\,\hbox {mV/ s) }\)
በ \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB: (a) \(503\,\hbox {bp}\) DPV, (b) (503 \,\hbox {bp}\) CV, (c) \(117\,\hbox {bp}
DPV እና ሲቪ ቮልታሞግራም የተገኙት በENIG PCB ኤሌክትሮዶች \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) ሜባ ከዲኤንኤ ጋር የተዋሃደ (በ10–\({20}\,{\hbox {ng ብዛቶች) }/{\upmu \hbox {l}}}\) ማለትም 0.13–\({0.26}\፣{\upmu \hbox {M}} -\({0.06}\,{\upmu \hbox {M}}\) ለ \(503\,\hbox {bp}\))።ወኪል ቮልታሞግራም በስእል S1 ተጨማሪ መረጃ ላይ ይታያል።ስእል 2 ውጤቱን ያሳያል። ጄል-የተጣራ PCR ምርቶችን በመጠቀም የዲፒቪ እና የሲቪ ልኬቶች (ከፍተኛ ወቅታዊ) ከሲቪ መለኪያዎች ጋር ሲነፃፀሩ የዲፒቪ ልኬቶች ከፍተኛ የስሜት ሕዋሳትን ያሳያሉ (የአሁኑ የዲኤንኤ ትኩረት ተግባር) በቦክስፕሎቱ ውስጥ ላለው እያንዳንዱ ሳጥን ከ 5 ኤሌክትሮዶች ውስጥ መለኪያዎችን ይይዛል. ሁሉም መለኪያዎች በኤሌክትሮድ-ኤሌክትሮድ ልዩነት ምክንያት የመለኪያ ስህተቶችን ለማስወገድ ተመሳሳይ የኤሌክትሮዶች ስብስብ ይጠቀማሉ.በዲፒቪ እና በሲቪ ውስጥ ከፍተኛ መጠን ያለው የዲ ኤን ኤ ክምችት መጠን እየጨመረ መሄዱን ተመልክተናል. , ረዘም (\(503 \, \ hbox {bp}\)) \,\hbox {bp}\ ከ \(117)) ቁርጥራጭ ጋር ሲነጻጸር. ይህ በቀደመው ሥራችን ውስጥ ከተዘገበው የኤሌክትሮድ ማስተዋወቅ አዝማሚያ ጋር የሚስማማ ነው. የኤምባ-ዲ ኤን ኤ ውስብስብነት ማመቻቸት በኤሌክትሮል ላይ ያለውን የኃይል መሙያ ማስተላለፍን ያመቻቻል, ይህም ለከፍተኛው የአሁኑ ጊዜ መጨመር አስተዋፅኦ ያደርጋል.ሌሎች ጥናቶች የኦሊጎኑክሊዮታይድ መጠን እና ቅደም ተከተል በ MB-DNA intercalation27,28,29,30 ላይ ያለውን ተጽእኖ ያሳያሉ.ጉዋኒን -ሳይቶሲን (ጂሲ) የሁለቱ amplicons ይዘት (\(117 \,\hbox {bp}\) እና \(503\,\hbox {bp}\)) በግምት 50% ነበር, ይህም ምልከቱ ልዩነቱ ምክንያት መሆኑን ያሳያል. ወደ አምፕሊኮን ርዝመት።ነገር ግን ለከፍተኛ የዲኤንኤ ውህዶች (\(>{2}\,{\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\)፣ ለ \(503\,\hbox {bp}) \) እና \( > {10} በሁለቱም የዲፒቪ እና ሲቪ መለኪያዎች ውስጥ የንዑስ ዑደቶች ከፍተኛ ሞገድ ቀንሷል።ይህም ምክንያቱ ሜባ ስለሚጠግብ እና በዲ ኤን ኤ ጥንዶች መካከል ስለሚጣመር በ MB31,32 ውስጥ የሚቀነሰው ቡድን የሪዶክ እንቅስቃሴን በከፍተኛ ሁኔታ የሚገታ ነው።
在存在 \(2\,\hbox {mM}\) \({\hbox {MgCl }_2}\): (a) \(503\,\hbox {bp}\) DPV, (b) \(503) \,\hbox {bp}\) CV፣ (c) \(117\,\hbox {bp}
በ PCR ዋና ድብልቅ ውስጥ የሚገኙት ጨዎች በኤምቢ እና ዲ ኤን ኤ መካከል ያለውን ኤሌክትሮስታቲክ መስተጋብር ያበላሻሉ፣ ስለዚህ \(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl }_2\) በ \({50} \,{\) በመጨመር upmu \hbox {M}}\) ሜባ ጄል-የተጣራ ምርት ጨው በ MB-DNA መስተጋብር ላይ ያለውን ተጽእኖ ለማጥናት.በስእል 3 ላይ እንደሚታየው ለከፍተኛ የዲ ኤን ኤ ክምችቶች (\(>{2}\,{\) አስተውለናል. hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) (503\,\hbox {bp }\) እና \(>{10}\,{\hbox {ng}/{\upmu \hbox { l}}}\) ለ \(117\,\hbox {bp} \))፣ በዲፒቪ እና ሲቪ ውስጥ የጨው መጨመር በመለኪያዎቹ ላይ ከፍተኛ ተጽዕኖ አላሳደረም (ለተወካይ ቮልታሞግራም ተጨማሪ መረጃ በስእል S2 ይመልከቱ)።ነገር ግን በ ዝቅተኛ የዲኤንኤ ውህዶች፣ የጨው መጨመር ስሜትን በእጅጉ ይቀንሳል፣ ይህም በዲኤንኤ ትኩረት ላይ ምንም አይነት ለውጥ አይታይበትም።በኤምቢ-ዲኤንኤ መስተጋብር እና መጠላለፍ ላይ ያለው ተመሳሳይ አሉታዊ ተጽእኖ በሌሎች ተመራማሪዎች 33,34።\(\ hbox { Mg}^{2+}\) cations ከዲኤንኤው አሉታዊ የፎስፌት የጀርባ አጥንት ጋር ይጣመራሉ፣በዚህም በኤምቢ እና ዲኤንኤ መካከል ያለውን ኤሌክትሮስታቲክ መስተጋብር ያደናቅፋል።በከፍተኛ የዲ ኤን ኤ ክምችት፣ redox-active MBs ን መከልከል ዝቅተኛ ከፍተኛ ጅረቶችን ያስከትላል፣ስለዚህ ኤሌክትሮስታቲክ መስተጋብር የሴንሰሩን ምላሽ በከፍተኛ ሁኔታ አይነኩ ። ዋናው ነጥቡ ይህ ባዮሴንሰር ከፍ ያለ የዲኤንኤ ውህዶችን ለመለየት የተሻለ ነው (አልፎ አልፎ \({\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) ወይም ከዚያ በላይ)) የ PCR ምርቶችን ጄል ማጣራት የማይቻልበት የአካባቢ የውሃ ናሙናዎችን ሙሉ በሙሉ በራስ-ሰር ለማቀነባበር።
በመምጠጥ ከርቭ ስር ያለው ቦታ ለሞገድ ርዝመቱ 600-700 \(\hbox {nm}\) ለተለያዩ ዲ ኤን ኤ ውስብስብ ውህዶች በ \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB: ( a ) \(503\,\hbox {bp}\) በጨው እና ያለ ጨው (\(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl}_2\)), (b) \(117\, \hbox {bp}\) በጨው እና ያለ ጨው (\(2\,\hbox {mM} {\upmu \hbox {l}}}\) ከ \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) ጋር የሚዛመዱ የDNA ውህዶች ምንም ዲኤንኤ የለም።
ከላይ የተጠቀሱትን ውጤቶች የበለጠ ለማረጋገጥ የእይታ መለኪያዎችን አድርገናል UV/Vis spectrophotometer (Thermo Scientific Multiskan GO)፣ ናሙናዎች \({50}\፣{\upmu \hbox {l}}}\) ለእያንዳንዳቸው ጥቅም ላይ ውለዋል። መለካት።የመምጠጥ ፊርማው የዲኤንኤ ትኩረትን በመጨመር ይቀንሳል፣በመምጠጥ ከርቭ ስር ካለው አካባቢ አዝማሚያ ለሞገድ ርዝመቱ \(600\,\hbox {nm}\) እስከ \(700\,\hbox {) nm}\)፣ በስእል 4 ላይ እንደሚታየው (የመምጠጥ ስፔክትረም በምስል S3 በተጨማሪ መረጃ)። ከ \({1}\፣{\hbox {ng}/{\upmu \hbox) ያነሰ የዲኤንኤ ይዘት ላላቸው ናሙናዎች። {l}}}\)፣ ዲኤንኤ ባላቸው እና ኤምቢ-ብቻ ናሙናዎች (ለ \(503\፣\hbox {bp} ) የርዝማኔ ቁርጥራጭ) ፣ የ redox-active MB steric inhibition አለመኖሩን የሚያመለክት ነው። ከፍ ባለ የዲ ኤን ኤ ውህዶች ፣ የመምጠጥ ምልክት ቀስ በቀስ እየቀነሰ እና በጨው ፊት የመጠጣት መጠን መቀነስ እንዳለ አስተውለናል። በዲ ኤን ኤ ዲቃላዎች ውስጥ የመሠረት መደራረብ ጋር መስተጋብር እና steric inhibition.የእኛ ውጤቶች hypochromaticity በ \(\ pi \) - \ (\ pi ^ *\) ውስጥ የኃይል ደረጃዎችን ከተቀነሰበት ጋር የሚያዛምዱትን ስለ MB-DNA intercalation spectroscopic ጥናቶች ላይ ከሚወጡት ዘገባዎች ጋር ይጣጣማሉ። ) በንብርብር 36፣ 37፣ 38 ምክንያት ኤሌክትሮኒክ ሽግግር።
Agarose gel electrophoresis of phage Phi6: PCR ምርቶች ርዝመት \(117\,\hbox {bp}\) እና \(503 \,\hbox {bp}\) ከሐይቅ ውሃ ናሙናዎች.M-DNA ማርከር;NTC-ምንም-የአብነት መቆጣጠሪያ, ተጓዳኝ አምፖሎችን የያዙ ፕሪምፖች;ፒሲ አዎንታዊ ቁጥጥር;1, 2, 3-undiluted (1:1) የሾሉ የሐይቅ ውሃ ናሙናዎች በሶስት ቅጂ። ባንድ ላይ በ \(\ about 50 \,\ hbox {bp}\) ላይ ይታያል በ \(503 \,\) ውስጥ ጥቅም ላይ ባልዋሉ ኦሊጎኑክሊዮታይዶች ምክንያት hbox {bp}\) መስመር።
በPhowai Lake የውሃ ናሙናዎች በPhi6 phage የተስፉ ናሙናዎችን በመጠቀም የሴንሰሩን አገልግሎት ገምግመናል።ከፋጌ-ስፓይክ የውሃ ናሙናዎች የተነጠለ የአር ኤን ኤ ክምችት ከ15.8–\({19.4}\,{\upmu \hbox {g}/\hbox) ይደርሳል። ml}}\)፣ ከተጣራ የፋጅ እገዳዎች የተለዩት አር ኤን ኤው በግምት 1 የመልሶ ማግኛ ቅልጥፍና ያለው \({1945}\፣{\upmu \hbox {g}/\hbox {ml}}\)› ተብሎ ይገመታል። %አር ኤን ኤ በግልባጭ ወደ ሲዲኤን የተገለበጠ እና ለ PCR እና qPCR አብነት ጥቅም ላይ ውሏል።የምርት መጠን በአጋሮሴ ጄል ኤሌክትሮፎረስስ (ምስል 5) በሴንሰሩ ከመሞከርዎ በፊት ተረጋግጧል።እነዚህ ናሙናዎች ጄል አልፀዱም እና ስለዚህ ሁሉንም የ PCR አካላት እንደያዙ ይዘዋል ። እንዲሁም የፍላጎት አምፖሎች. በqPCR (ሠንጠረዥ 1) ወቅት የተመዘገቡት የሲቲ እሴቶች ከተዛማጅ ስፒኬድ የውሃ ናሙናዎች ተለይተው ከአር ኤን ኤ ክምችት ጋር እንደሚዛመዱ ታይቷል ። የሲቲ እሴት ለፍሎረሰንት ምልክት የሚያስፈልጉትን ዑደቶች ብዛት ያሳያል ። ከመነሻው ወይም ከዳራ ምልክት በላይ። ከፍ ያለ የሲቲ እሴቶች ዝቅተኛ የአብነት ውህዶችን ያመለክታሉ እና በተቃራኒው። የNTC ናሙናዎች የሲቲ እሴቶች የሚጠበቀውን ያህል ነበሩ። አዎንታዊ ቁጥጥር እና የፈተና ናሙና እያንዳንዱ የሙከራ ናሙና ከአዎንታዊ ቁጥጥር ጋር ሲነፃፀር በግምት 1% አብነት እንዳለው ይጠቁማል። ከዚህ ቀደም ረዘም ያለ አምፖሎች ወደ ተሻለ ስሜት እንደሚመሩ ተወያይተናል። ከተለያዩ የአካባቢ ናሙናዎች የተነጠሉ ረዣዥም ቁርጥራጮችን ማጉላት ከጉዳቱ አንፃር ፈታኝ ነው። የዝቅተኛ የቫይረስ ትኩረት እና የአር ኤን ኤ መበላሸት.ነገር ግን በቫይረሱ ማበልፀግ እና PCR ማጉላት ፕሮቶኮል የ \(503 \,\hbox {bp}\) ለኤሌክትሮኬሚካላዊ ዳሰሳ በተሳካ ሁኔታ ማጉላት ችለናል.
ምስል 6 የ \(503 \,\hbox {bp}\) የኤሌክትሮኬሚካላዊ ዳሳሽ ውጤቶችን ያሳያል፣ ሁለቱም ያልተቀላቀለ ሲዲኤን እንደ አብነት (1፡1) እና 100-fold diluted cDNA እንደ አብነት (1፡100) ሲጠቀሙ PCR , ከኤንቲሲ እና ፒሲ ጋር በማነፃፀር (ለተወካይ ቮልታሞግራም ተጨማሪ መረጃን በስእል S4 ይመልከቱ).በስእል 6 ውስጥ ባለው ሳጥን ውስጥ ያለው እያንዳንዱ ሳጥን በሶስት ናሙናዎች በ 5 ኤሌክትሮዶች ውስጥ መለኪያዎችን ይይዛል. በኤሌክትሮል ምክንያት ስህተቶችን ለማስወገድ ተመሳሳይ ኤሌክትሮዶች ሁሉንም ናሙናዎች ለመለካት ጥቅም ላይ ይውላሉ. -to-electrode variation.ከሲቪ መለኪያዎች ጋር ሲነፃፀር የዲፒቪ መለኪያዎች የሙከራ እና ፒሲ ናሙናዎችን ከኤንቲሲዎች ለመለየት የተሻለ ጥራት ያሳያሉ ምክንያቱም ቀደም ሲል እንደተገለፀው የፋራዳይክ ሞገዶች በኋለኛው ውስጥ ከበስተጀርባ አቅም ባላቸው ሞገዶች የተነሳ ተደብቀዋል።ለረዥም አምፕሊኮችን ተመልክተናል። አሉታዊ ቁጥጥር (NTC) ከአዎንታዊ ቁጥጥር አንጻር ሲታይ ከፍ ያለ የሲቪ እና የዲፒቪ ከፍተኛ ጅረቶችን አስገኝቷል፣ አወንታዊ እና ያልተሟሉ የሙከራ ናሙናዎች ግን ተመሳሳይ የዲፒቪ ከፍተኛ ሞገዶች ከፍታ አሳይተዋል። ለእያንዳንዱ ያልተቀየረ አማካይ እና መካከለኛ እሴቶች (1: 1) ) የሙከራ ናሙና እና ፒሲ ለኤንቲሲ ናሙና ከዳሳሽ ውፅዓት በግልፅ ሊፈታ ይችላል ፣ ለ 1: 100 የተዳከመ ናሙና ጥራት ብዙም አይገለጽም። (መስመሮች በስእል 5 ላይ አይታዩም)፣ እና ተዛማጅ የዲፒቪ እና የሲቪ ከፍተኛ ጅረቶች ለኤንቲሲ ከሚጠበቁት ጋር ተመሳሳይ ናቸው።የ \(117\,\hbox {bp}\) ክፍልፋይ ውጤቶች በማሟያ መረጃ ውስጥ ይታያሉ።አሉታዊው መቆጣጠሪያው ከ PCB ዳሳሽ የኤሌክትሮኬሚካላዊ ምላሽን ያነሳሳው ነፃ ሜባ በኤሌክትሮድ ላይ በመለጠፍ እና የኤምቢ ከአንድ-ክር ፕሪመር ኦሊጎኑክሊዮታይድ ጋር በመገናኘቱ ነው።ስለዚህ ናሙና በተፈተነ ቁጥር አሉታዊ ቁጥጥር መደረግ አለበት እና የሙከራ ናሙናውን በአዎንታዊ ወይም አሉታዊ ለመመደብ ልዩነት (አንጻራዊ) ልኬት 39,40 ለማግኘት በአሉታዊ ቁጥጥር ከተገኘው ከፍተኛ የአሁኑ ጋር ሲነፃፀር የፍተሻ ናሙና ከፍተኛ ወቅታዊነት።
(ሀ) DPV፣ እና (ለ) የ \(503 \,\hbox {bp}\) ቁርጥራጮች በሐይቅ ውሃ ናሙናዎች ውስጥ ለኤሌክትሮኬሚካላዊ ፍለጋ ሲቪ ጫፍ።የሙከራ ናሙናዎች በሦስት እጥፍ ይለካሉ እና ከአብነት መቆጣጠሪያዎች (NTC) ጋር ሲነፃፀሩ አዎንታዊ መቆጣጠሪያዎች (ፒሲ).
የኛ ግኝቶች ለተለያዩ ዲ ኤን ኤዎች የተለያየ ርዝመት ላላቸው አምፖሎች በኤሌክትሮኬሚካላዊ ዳሳሾች አፈፃፀም ላይ ተጽዕኖ የሚያሳድሩ የተለያዩ ስልቶችን ያሳያሉ። \(500 \,\hbox {bp}\) ከፍ ባለ ስሜት ሊታወቅ ይችላል እና በናሙናው ውስጥ ያለው የጨው መኖር ከፍተኛ የስሜት ሕዋሳትን የሚጎዳ የስሜታዊነት ዲ ኤን ኤ ትኩረት አይሰጥም (አልፎ አልፎ \({\hbox {ng}/{\upmu) \hbox {l}}}\) እና ከዚያ በላይ)። በተጨማሪም፣ ጄል-የተጣራ አምፑልኖችን እና ጨው ሳይጨምሩ እና የሐይቅ ውሃ ናሙናዎችን በዲፒቪ እና ሲቪ መለኪያዎችን ጨምሮ የተለያዩ አይነት ናሙናዎችን ውጤት መርምረናል።ከበስተጀርባ አቅም ያለው ጅረት በሲቪ ልኬት ላይ ተጽእኖ ስለሚያሳድር DPV የተሻለ መፍትሄ እንዳቀረበ ተመልክተናል።
ረዣዥም ቁርጥራጮችን ማጉላት በቫይረሱ ጂኖሚክ አር ኤን ኤ ታማኝነት ላይ የተመሰረተ ነው ።በርካታ ጥናቶች እንደሚያመለክቱት ረዣዥም ቁርጥራጮችን ማጉላት ሁል ጊዜ ውጤታማ አይደለም ፣ ምክንያቱም በአከባቢው ውስጥ ያለው አር ኤን ኤ መበላሸት እና በገለልተኛ ጊዜ የመገጣጠም እድሉ። በአሉሚኒየም ሃይድሮክሳይድ ላይ የተመረኮዘ የቫይረስ ማጎሪያ ዘዴ ከ PEG ላይ የተመሰረተ የቫይረስ ማጎሪያ ዘዴ phage Phi-6 በሐይቅ ውሃ ናሙናዎች ላይ በማተኮር የበለጠ ውጤታማ መሆኑን ተመልክተናል። ብዙ የአጭር ርዝመት አብነቶችን ለማጉላት እና የልዩነት እድልን ለመቀነስ።
ባዮሎጂካል ናሙናዎች በጣም ጥቂት ናቸው, ስለዚህ ለሙከራ አነስተኛ ናሙናዎችን የሚፈልግ ባዮሴንሰር ማዘጋጀት ያስፈልጋል.በዚህ ጥናት ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉት ENIG PCB ኤሌክትሮዶች \({5}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) ብቻ ያስፈልጋቸዋል. የኤሌክትሮዶችን ውጤታማ ቦታ ለመሸፈን ለሙከራ ናሙናዎች.በተጨማሪ, ተመሳሳይ ኤሌክትሮዶች የሚቀጥለውን ናሙና ከማቅረባቸው በፊት ከተጣራ በኋላ እንደገና ጥቅም ላይ ሊውሉ ይችላሉ.የተጨመሩ ናሙናዎች ከሜቲሊን ሰማያዊ በስተቀር ማንኛውንም ኬሚካሎች መጨመር አያስፈልጋቸውም, ይህም ርካሽ ነው. እና በተለምዶ ጥቅም ላይ የሚውለው ኬሚካል እያንዳንዱ ኤሌክትሮድ ለማምረት ወደ 0.55 ዶላር (ወይም INR 40) ስለሚያስከፍል ይህ ባዮሴንሰር አሁን ካሉት የመለየት ቴክኖሎጂዎች ዋጋ ቆጣቢ አማራጭ ሊሆን ይችላል. ሠንጠረዥ 2 ይህን ሥራ ለረጅም ጊዜ በሥነ ጽሑፍ ውስጥ ከተዘገቡት ሌሎች ዳሳሾች ጋር ማወዳደር ያሳያል. በተለያዩ ናሙናዎች ውስጥ የዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮች።
በኤምባ ላይ የተመሰረቱ ኤሌክትሮኬሚካላዊ የፍተሻ ፕሮቶኮሎች በ PCR ልዩነት ላይ ስለሚመሰረቱ የዚህ ዘዴ ዋነኛ ገደብ እንደ ፍሳሽ ውሃ እና ሀይቅ ውሃ ባሉ የተለያዩ ናሙናዎች ላይ ልዩ ያልሆነ ማጉላት ወይም ዝቅተኛ ንፅህና ፕሪመርሮችን የመጠቀም እድል ነው። ያልተሻሻሉ የ ENIG PCB ኤሌክትሮዶችን በመጠቀም ያልተነጹ PCR ምርቶችን ዲኤንኤ ለመለየት ኤሌክትሮኬሚካላዊ የፍተሻ ዘዴዎች ጥቅም ላይ ባልዋሉ dNTPs እና primers የሚመጡ ስህተቶችን በተሻለ ሁኔታ መረዳት እና የምላሽ ሁኔታዎችን እና የመመርመሪያ ፕሮቶኮሎችን ለማመቻቸት ተጨማሪ የፊዚዮኬሚካላዊ መለኪያዎች እንደ ፒኤች, ሙቀት እና ባዮሎጂካል መለኪያዎች. የመለኪያውን ትክክለኛነት ለማሻሻል የውሃውን ናሙና የኦክስጂን ፍላጎት (BOD) መለካት ሊያስፈልግ ይችላል።
በማጠቃለያው በዝቅተኛ ወጪ የኤሌክትሮኬሚካላዊ ENIG PCB ዳሳሽ በአካባቢያዊ (ሐይቅ ውሃ) ናሙናዎች ውስጥ ቫይረሱን ለመለየት ሀሳብ አቅርበናል.ከማይንቀሳቀስ ኦሊጎኑክሊዮታይድ ኤሌክትሮዶች ወይም ብጁ የዲ ኤን ኤ ዳሳሽ በተለየ መልኩ ክሪዮጅኒክ ማከማቻን ከሚያስፈልጋቸው ስሜታዊነት ለመጠበቅ 53,54 የእኛ ቴክኒካል ያልተሻሻለ PCB ይጠቀማል። ኤሌክትሮዶች ረዘም ያለ የመቆያ ጊዜ ያላቸው እና ምንም ልዩ የማከማቻ መስፈርቶች የሌሉ እና ስለዚህ በ LMICs ውስጥ በተሰራው አውቶሜትድ የናሙና ማቀነባበሪያ የመለኪያ መፍትሄዎችን ለማዘጋጀት ተስማሚ ናቸው ። ባዮሴንሱር ኢላማ አምፖሎችን በፍጥነት ለመለየት ውድ ያልሆኑ የዲ ኤን ኤ-የተጠላለፉ ሬዶክስ ቀለሞችን (MB) ይጠቀማል ። ልዩ ያልሆነ ማጉላት በአከባቢ ናሙናዎች ውስጥ የተለመደው የ MBs ልዩ ባልሆኑ ነጠላ እና ባለ ሁለት-ክር ኦሊጎኑክሊዮታይድ ትስስር ምክንያት የዚህን የመዳሰሻ ዘዴ ልዩነት ይቀንሳል.ስለዚህ የዚህ ሙከራ ልዩነት በፕሪመር እና PCR ምላሽ ሁኔታዎች ላይ የተመሰረተ ነው. በተጨማሪም ሲቪ. እና ከተሞከሩት ናሙናዎች የተገኙ የዲፒቪ ከፍተኛ ሞገዶች ለእያንዳንዱ ፈተና ከአሉታዊ ቁጥጥር (NTC) ከተገኙት ምላሾች አንጻር መተርጎም አለባቸው.በዚህ ሥራ ውስጥ የቀረቡት የኤሌክትሮኬሚካላዊ ዳሳሾች ንድፎች እና ዘዴዎች ሙሉ በሙሉ አውቶማቲክ እና ዝቅተኛነት እንዲዳብሩ ከአውቶማቲክ አምራቾች ጋር ሊጣመሩ ይችላሉ. ናሙናዎችን ለመሰብሰብ እና ለመተንተን እና በገመድ አልባ መንገድ ውጤቶችን ወደ ላቦራቶሪ ለማስተላለፍ የሚያስችል ወጪ መፍትሄ።
Cashdollar, J. & Wymer, L. ቫይረሶችን ከውሃ ናሙናዎች ውስጥ ለመጀመሪያ ጊዜ የማተኮር ዘዴዎች-የቅርብ ጊዜ ጥናቶች ግምገማ እና ሜታ-ትንተና.አፕሊኬሽን.microorganism.115, ገጽ 1-11 (2013).
ጋል፣ ኤኤም፣ ማሪናስ፣ ቢጄ፣ ሉ፣ ዋይ እና ሺስለር፣ ጄኤል የውሃ ወለድ ቫይረሶች፡ የንፁህ መጠጥ ውሃ እንቅፋቶች።PLoS Pathogens.11፣ E1004867 (2015)።
Shrestha, S. et al. Wastewater ኤፒዲሚዮሎጂ ለወጪ ቆጣቢ የኮቪድ-19 መጠነ ሰፊ ክትትል ዝቅተኛ እና መካከለኛ ገቢ ባላቸው አገሮች፡ ተግዳሮቶች እና እድሎች። ውሃ 13, 2897 (2021)።
ፓሌሴክ፣ ኢ. እና ባርቶሲክ፣ ኤም. ኑክሊክ አሲድ ኤሌክትሮኬሚስትሪ.ኬሚካል.Rev.112, 3427-3481 (2012).
ታኒ፣ ኤ.፣ ቶምሰን፣ ኤጄ እና ቡት፣ ጄኤን ሜቲሊን ሰማያዊ እንደ ኤሌክትሮኬሚካላዊ አድሎአዊ ነጠላ እና ባለ ሁለት መስመር ኦሊጎኑክሊዮታይድ በወርቅ ንጣፎች ላይ የማይንቀሳቀስ። ተንታኝ 126፣ 1756-1759 (2001)።
Wong, EL, Erohkin, P. & Gooding, JJ የ Cation እና Anion Intercalators ንጽጽር ለኤሌክትሮኬሚካላዊ የዲ ኤን ኤ ማዳቀል በረጅም ርቀት ኤሌክትሮን ሽግግር.Electrochemistry.comminicate.6, 648-654 (2004).
Wong, EL & Gooding, JJ Charge transfer through DNA: የተመረጠ ኤሌክትሮኬሚካል ዲ ኤን ኤ biosensor.anus.Chemical.78, 2138-2144 (2006)።
Fang, TH et al.የእውነተኛ ጊዜ PCR ማይክሮፍሉይድ መሳሪያ በአንድ ጊዜ ኤሌክትሮኬሚካል ማወቂያ.ባዮሎጂካል ዳሳሽ.ባዮኤሌክትሮኒክስ.24, 2131-2136 (2009).
Win፣ BY et al.ሚቲሊን ሰማያዊ ከዲኤንኤ ጋር ባለው ግንኙነት ላይ የተመሰረተ የኤሌክትሮኬሚካላዊ የእውነተኛ ጊዜ PCR ስርዓት የምልክት አሰራር ጥናት እና የአፈፃፀም ማረጋገጫ።
ራሚሬዝ-ቻቫርሪያ፣ RG እና al.Loop-mediated isothermal amplification-based electrochemical sensor sars-cov-2ን በቆሻሻ ውሃ ናሙናዎች ውስጥ ለማወቅ ጄ.አካባቢ.ኬሚካል.ብሪታንያ.10, 107488 (2022).
Kumar, M. et al. የ SARS-CoV-2 amplicons ከ PCB ኤሌክትሮዶች ጋር ኤሌክትሮኬሚካላዊ ዳሳሽ ገባሪ ነው.ቢ ኬሚስትሪ.343, 130169 (2021).
Kitamura፣ K.፣ Sadamasu፣ K.፣ Muramatsu፣ M. & Yoshida፣ H. SARS-CoV-2 አር ኤን በቆሻሻ ውሃ.ሳይንስ.አጠቃላይ አካባቢ።763፣144587 (2021) በጠንካራ ክፍልፋይ ውስጥ ውጤታማ የሆነ የ SARS-CoV-2 አር ኤን ኤ ማግኘት።
Alygizakis, N. et al. ለ SARS-CoV-2 በቆሻሻ ውሃ ውስጥ የመተንተን ዘዴዎች፡ ፕሮቶኮል እና የወደፊት አመለካከቶች.TraC በመታየት ላይ ያለ anal.Chemical.134, 116125 (2020).
Fedorenko, A., Grinberg, M., Orevi, T. & Kashtan, N. የኤንቬሎፕድ ባክቴሪዮፋጅ Phi6 (የ SARS-CoV-2 ምትክ) በመስታወት ወለል ላይ በተከማቹ የተትነኑ የምራቅ ጠብታዎች ውስጥ መኖር.ሳይንስ.ሪፕ.10፣ 1–10 (2020)።
ዴይ፣ አር.፣ ድሉስካያ፣ ኢ. እና አሽቦልት፣ NJ የ SARS-CoV-2 ምትክ (Phi6) በነጻ-መኖር አሜባ.ጄ.የውሃ ጤና 20, 83 (2021)
ሚንዲች፣ ኤል. ባለ ሁለት መስመር ያለው አር ኤን ኤ ባክቴሪዮፋጅ የሶስት ጂኖሚክ ቁርጥራጭ ትክክለኛ እሽግ \(\ቫርፊ63፣ 149-160 (1999)።
ፒርቲማ ፣ ኤምጄ እና ባምፎርድ ፣ የዲኤች አር ኤን ኤ ፋጅ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር \(\ ቫርፊ \) 6 ጥቅል ክልል። RNA 6 ፣ 880-889 (2000)።
Bonilla, N. et al.Phages on the Tap - ፈጣን እና ቀልጣፋ ፕሮቶኮል የባክቴሪዮፋጅስ የላብራቶሪ ክምችቶችን ለማዘጋጀት.PeerJ 4, e2261 (2016).
የልጥፍ ሰዓት፡- ግንቦት-27-2022