Nature.com သို့လာရောက်လည်ပတ်သည့်အတွက် ကျေးဇူးတင်ပါသည်။ သင်အသုံးပြုနေသောဘရောက်ဆာဗားရှင်းသည် CSS အတွက် အကန့်အသတ်ဖြင့် ပံ့ပိုးမှုရှိပါသည်။ အကောင်းဆုံးအတွေ့အကြုံအတွက်၊ အပ်ဒိတ်လုပ်ထားသောဘရောက်ဆာတစ်ခု (သို့မဟုတ် Internet Explorer တွင် လိုက်ဖက်ညီသောမုဒ်ကိုပိတ်ပါ) ကိုအသုံးပြုရန် အကြံပြုအပ်ပါသည်။ ထိုအချိန်တွင် သေချာစေရန်၊ ဆက်လက်ပံ့ပိုးပါ၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ပုံစံများနှင့် JavaScript မပါဘဲဆိုက်ကိုပြသပါမည်။
ပတ်ဝန်းကျင်နမူနာများကို စောင့်ကြည့်ခြင်း၏ အရေးပါမှုကို COVID-19 ကူးစက်ရောဂါ စတင်ဖြစ်ပွားချိန်မှစ၍ အလွန်တန်ဖိုးထားခဲ့ပြီး qPCR အခြေပြုနည်းပညာများသည် ဈေးကြီးသော်လည်း ရွှေစံနှုန်းဖြင့် စောင့်ကြည့်စစ်ဆေးခြင်းအချို့ကို လုပ်ဆောင်လျက်ရှိသည်။ လျှပ်စစ်ဓာတု DNA ဇီဝအာရုံခံကိရိယာများသည် ကုန်ကျစရိတ်သက်သာနိုင်ချေကို ပေးစွမ်းနိုင်ပါသည်။ ဝင်ငွေနည်းနိုင်ငံများနှင့် အလယ်အလတ်ရှိသောနိုင်ငံများရှိ ပတ်ဝန်းကျင်ရေနမူနာများကို စောင့်ကြည့်ခြင်းအတွက် ဖြေရှင်းချက်။ ဤလုပ်ငန်းတွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ENIG ကို အသုံးပြု၍ Phi6 phage မှခွဲထုတ်ထားသော Phi6 phage မှရရှိသော electrochemical detection ကို သရုပ်ပြပါသည်။ မျက်နှာပြင်ပြုပြင်မွမ်းမံခြင်းမရှိဘဲ PCB လျှပ်ကူးပစ္စည်းများကို အပြီးသတ်ရန်။sex. electrochemical sensor တုံ့ပြန်မှုအား မတူညီသော အရှည် DNA အပိုင်းအစနှစ်ခု (\({117}\,\hbox {bp}\) နှင့် \({503}\,\hbox {bp}\))) နှင့် PCR မာစတာရှိဆားများ၏အကျိုးသက်ရောက်မှုသည် methylene blue (MB)-DNA အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုများအပေါ် ရောနှောထားသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ရလဒ်များက DNA အပိုင်းအစများ၏ကြာချိန်သည် လျှပ်စစ်ဓာတုဗေဒဆိုင်ရာ အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို သိသာထင်ရှားစွာဆုံးဖြတ်ပေးပြီး PCR ထုတ်ကုန်များ၏ ဂျယ်သန့်စင်ခြင်းမရှိဘဲ ဂျယ်သန့်စင်မှုမရှိဘဲ ရှည်လျားသော amplicons များကို ထောက်လှမ်းနိုင်စွမ်းရှိကြောင်း ဤလုပ်ငန်းတွင် သရုပ်ပြသည်။ ရေနမူနာများကို တိုင်းတာရာတွင် အရေးကြီးပါသည်။Viral load bodes များအတွက် အပြည့်အဝ အလိုအလျောက်ဖြေရှင်းချက် ကောင်းမွန်ပါသည်။
ပိုလီယိုနှင့် အသည်းရောင်အသားဝါ E1 ကူးစက်ခြင်း၏ ပထမဆုံးသော အထောက်အထားများဖြင့် ရေတွင်ကူးစက်ခြင်းမှာ 1940 ခုနှစ်များကတည်းက ပြည်သူ့ကျန်းမာရေးကို ဘေးအန္တရာယ်တစ်ခုအဖြစ် လူသိများသည်။ ကမ္ဘာ့ကျန်းမာရေးအဖွဲ့ (WHO) သည် ရေတွင်ဖြစ်စေသော ဗိုင်းရပ်စ်ပိုးများစွာကို ကျန်းမာရေးအရ အရေးပါမှု အလယ်အလတ်မှ မြင့်မားသော ကျန်းမာရေးဆိုင်ရာ အရေးပါမှု ၂။Traditional virus ထောက်လှမ်းခြင်းနည်းလမ်းများသည် အလွန်အကဲဆတ်ပြီး တိကျသောရွှေစံနှုန်းဖြစ်သော qPCR အခြေပြုနည်းပညာများကို အားကိုးထားသော်လည်း စျေးကြီးသောကိရိယာများကိုအသုံးပြု၍ ဓာတ်ခွဲခန်းတွင် စမ်းသပ်ရန်အတွက် ကျွမ်းကျင်ဝန်ထမ်းများ လိုအပ်ပါသည်။ သို့သော်လည်း အရင်းအမြစ်အကန့်အသတ်ရှိသော ဝင်ငွေနည်းပါးသောနှင့် အလယ်အလတ်ရှိသောနိုင်ငံများ (LMICs) တွင် လူသား၊ နမူနာစမ်းသပ်ခြင်းသည် ပတ်ဝန်းကျင်ရေနမူနာစောင့်ကြည့်ခြင်းထက် သာလွန်ကောင်းမွန်ဖွယ်ရှိသည်။ ထို့ကြောင့်၊ ဝင်ငွေနည်းနိုင်ငံများနှင့် ဝင်ငွေအလယ်အလတ်ရှိသော နိုင်ငံများတွင် ရေနှင့်ရေဆိုးနမူနာများကို အချိန်နှင့်တစ်ပြေးညီ စောင့်ကြည့်စစ်ဆေးရန်အတွက် ကုန်ကျစရိတ်သက်သာသော အခြားနည်းလမ်းများ လိုအပ်ပါသည်။ ထို့ကြောင့် ၎င်းတို့အား ဗိုင်းရပ်စ် ကူးစက်ရောဂါ၏ ပြင်းထန်သော လူမှုစီးပွားရေးဆိုင်ရာ သက်ရောက်မှုများမှ ကာကွယ်ပေးပါသည်။ နူကလိစ်အက်ဆစ်အတွက် ကုန်ကျစရိတ်နည်းသော လျှပ်စစ်ဓာတု ဇီဝအာရုံခံကိရိယာများသည် ဤမလိုက်လျောညီထွေရှိသော လိုအပ်ချက်အတွက် အလားအလာရှိသော ဖြေရှင်းချက်တစ်ခုကို ပေးစွမ်းနိုင်ပါသည်။ ဤ DNA ဇီဝအာရုံခံကိရိယာအများစုသည် လျှပ်ကူးပစ္စည်းပေါ်တွင် ပေါင်းစပ်ထားသော DNA ကြိုးများကို ပိတ်ဆို့ထားသောကြောင့် လုပ်ဆောင်ပါသည်။ နမူနာတွင် လိုက်ဖက်သော အစီအစဥ်တစ်ခုရှိသည့်အခါ မျက်နှာပြင်နှင့် ပေါင်းစပ်လိုက်ပါ။ ၎င်းကို ပိုတက်စီယမ်သံ/ferrocyanide ကဲ့သို့သော redox ဖျန်ဖြေပေးသူများကို အသုံးပြုကာ လျှပ်စစ်ဓာတုနည်းပညာများဖြင့် အချက်ပြမှုအဖြစ်သို့ ပြောင်းလဲနိုင်သည်။ Methylene blue (MB) သည် ယင်းကဲ့သို့သော redox-active မော်လီကျူးတစ်ခုဖြစ်ပြီး၊ တစ်ခုတည်းသောကြိုးမျှင် DNA5၊6 သို့၎င်း၏ပိုမိုတိကျသောမဟုတ်သောစည်းနှောင်မှုအပြင်နှစ်ထပ်သောင်တင် DNA (dsDNA) အဖြစ်သို့အပြန်အလှန်အစီရင်ခံခဲ့သည်။ MBs ၏သဘောသဘာဝသည် MB-DNA ရှုပ်ထွေးမှုများဖွဲ့စည်းရန်သူတို့အား redox ဖျန်ဖြေပေးသူများအဖြစ်လူကြိုက်များသောရွေးချယ်မှုဖြစ်စေသည်။ sensor configurations5,6,7,8,9.MB ၏ DNA မှ ထပ်တိုးခြင်းမှာ အတိအကျမဟုတ်သော်လည်း၊ ဤလျှပ်စစ်ဓာတုအာရုံခံကိရိယာ၏ တိကျသေချာမှုသည် PCR သို့မဟုတ် isothermal amplification အတွက်သုံးသော primers များ၏ သန့်ရှင်းမှုအပေါ်တွင် များစွာမူတည်နေသော်လည်း ၎င်းသည် လက်တွေ့အကောင်အထည်ဖော်ရန်အတွက် ကောင်းမွန်သင့်လျော်ပါသည်။ -time electrochemical-based qPCR သို့မဟုတ် fluorescence isothermal amplification ကို DNA အာရုံစူးစိုက်မှုတိုင်းတာခြင်းအတွက် 9 .ထိုကဲ့သို့သောအကောင်အထည်ဖော်မှုတစ်ခုတွင် Won et al. ရွှေလျှပ်ကူးပစ္စည်းများ၏မျက်နှာပြင်ကို အချိန်နှင့်တပြေးညီ 6-mercapto-1-hexanol (MCH) ဖြင့် ပြုပြင်ထားပါသည်။ differential pulse voltammetry (DPV) ကိုအသုံးပြု၍ PCR amplicons ၏ MB နှင့် တိုင်းတာခြင်း 9. အခြားကိစ္စများတွင်၊ Ramirez et al. သည် RT-LAMP တုံ့ပြန်မှုဖြင့် MB ကိုအသုံးပြု၍ ရေဆိုးများတွင် SARS-CoV-2 ကိုရှာဖွေခြင်း 8 တုံ့ပြန်မှုများအတွင်း amplicons များကို လျှပ်စစ်ဓာတုဗေဒနည်းဖြင့်သိရှိနိုင်စေရန် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသည့် microfluidic PCR ပလပ်ဖောင်းရှိ situ electrodes များတွင် အသုံးပြုသည်။ ဤလေ့လာမှုအားလုံးသည် ဤလုပ်ဆောင်နိုင်မှုရှိသောလျှပ်ကူးပစ္စည်း၏တည်ငြိမ်မှုအတွက် အထူးသိုလှောင်မှုလိုအပ်ချက်များကြောင့် ထုတ်လုပ်မှုနှင့် လည်ပတ်မှုစရိတ်များ တိုးမြင့်လာသည်ဟု ဆိုလိုသည်။
ကန်ရေနမူနာများတွင် စုစည်းထားသော ဗိုင်းရပ်စ်အမှုန်အမွှားများမှ ရရှိသော အမ်ပလီကွန်များ၏ လျှပ်စစ်ဓာတုဗေဒဆိုင်ရာ ထောက်လှမ်းမှုအတွက် အလုပ်အသွားအလာ၏ စီမံချက်။
မကြာသေးမီက ကျွန်ုပ်တို့သည် DPV နှင့် cyclic voltammetry (CV) ကိုအခြေခံ၍ ကုန်ကျစရိတ်နည်းသော ပုံနှိပ်ဆားကစ်ဘုတ် (PCB) လျှပ်ကူးပစ္စည်းဖြင့် SARS-CoV-2 amplicons ၏ လျှပ်စစ်ဓာတုအာရုံခံခြင်းကို သရုပ်ပြခဲ့သည်) အမြင့်ဆုံးပြောင်းလဲမှုများ လက်ရှိ ၁၁။ပိုရှည်သော DNA အပိုင်းအစများ (N1-N2၊ \({943}\, \hbox)) သည် CDC-recommended N1 forward နှင့် N2 reverse primers တို့ကို အသုံးပြု၍ ဖန်တီးထားသော ပိုတိုသောအပိုင်းအစများ {bp}\)) သည် sensor တုံ့ပြန်မှုတွင် linearity ပိုကောင်းကြောင်း ပြသထားသည် (N1၊ \(72\,\hbox {bp}\))) N1 ရှေ့နှင့် N1 နောက်ပြန် primer အစုံများကို အသုံးပြု၍ ဖွဲ့စည်းထားသည်။ ဤလေ့လာမှုများကို နျူကလီးယားကင်းစင်သောရေတွင် ပြင်ဆင်ထားသော DNA ဖျော်ရည်များကို အသုံးပြု၍ အစီရင်ခံထားသည်။ အဆိုပါပလပ်ဖောင်းကိုလည်း SARS-CoV ကို စစ်ဆေးရန် အသုံးပြုထားသည်။ ပေါင်းစပ်ထားသော ရေဆိုးနမူနာများတွင် -2 amplicons (SARS-CoV-2 RNA ဖြင့် စုစုပေါင်း RNA နမူနာများကို ပွားခြင်းဖြင့် ရရှိသော amplicons)။ RNA သည် သီးခြားခွဲထုတ်ခြင်းနှင့် ရေအောက်ပိုင်းလုပ်ဆောင်နေစဉ်အတွင်း ပိုင်းဖြတ်ခြင်းခံရနိုင်သောကြောင့်၊ 12,13၊ ဤကွဲပြားသော ကွဲပြားသောနမူနာဖြင့် ပိုရှည်သောအပိုင်းအစများကို ချဲ့ထွင်ရန် ခက်ခဲပါသည်။ ထို့ကြောင့်၊ ရေဆိုးများတွင် SARS-CoV-2 amplicon ၏ လျှပ်စစ်ဓာတုအာရုံခံခြင်းသရုပ်ပြခြင်းကို တိုတောင်းသော \(72\,\hbox {bp}\) N1 အပိုင်းအထိ ကန့်သတ်ထားသည်။
ဤလုပ်ငန်းတွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ENIG PCB-based electrochemical sensing ၏ဖြစ်နိုင်ခြေကို စူးစမ်းလေ့လာခဲ့ပြီး ရေကန်နမူနာများမှ phage Phi6 နှင့် သီးခြားခွဲထုတ်ခြင်း (ပုံ 1)။Phi6 phages များသည် SARS-CoV-2 နှင့် အရွယ်အစား (80-100 nm) နှင့် နှိုင်းယှဉ်နိုင်သည်။ lipid membrane နှင့် spike protein တစ်ခုလည်း ရှိသည်။ ဤအကြောင်းများကြောင့်၊ bacteriophage Phi6 သည် SARS-CoV-2 နှင့် အခြားသော enveloped pathogenic RNA viruses14,15.RNA အတွက် ဘက်တီးရီးယားပိုးမွှားများကို သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော cDNA ပေါင်းစပ်မှုပုံစံတစ်ခုအဖြစ် ၎င်းနောက်တွင် အသုံးပြုခဲ့သည်။ PCR သည် အရှည် 117 နှင့် 503 အခြေခံအတွဲများ၏ DNA အပိုင်းအစနှစ်ခုကိုရယူရန် စိန်ခေါ်မှုတစ်ခုဖြစ်သည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်အလုပ်ရှိ N1-N2 အပိုင်းအစများကို ချဲ့ထွင်ရန် စိန်ခေါ်မှုဖြင့် ကျွန်ုပ်တို့သည် အလယ်အလတ်အရှည်အပိုင်းအစများကို ပစ်မှတ်ထားပါသည် (\(117 ရရှိနိုင်သော primers များအပေါ်အခြေခံ၍ \,\hbox {bp}\) နှင့် \(503 \,\hbox {bp}\)) ၊ electrochemical sensor တုံ့ပြန်မှုအား ကျယ်ပြန့်သောအာရုံစူးစိုက်မှုအကွာအဝေးတွင် စနစ်တကျလေ့လာခဲ့သည် (\({10}\,{ \hbox {pg}/{\upmu \hbox {l}}}\) မှ \({20}\, {\hbox {ng}/\upmu \hbox {l}}}\)) အပိုင်းအစ နှစ်ခုစလုံးအတွက် MB ၏ပါဝင်မှု၊ အာရုံခံတုံ့ပြန်မှုအပေါ် ဆား၏အကျိုးသက်ရောက်မှုကို spectrophotometric တိုင်းတာမှုများဖြင့် ဖြတ်ကျော်အတည်ပြုထားသည်။ ဤလုပ်ငန်း၏အဓိကပံ့ပိုးမှုများမှာ အောက်ပါအတိုင်းဖြစ်သည်-
DNA အပိုင်းအစများ အရှည်နှင့် နမူနာတွင် ဆားပါဝင်မှုသည် အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို ပြင်းထန်စွာ ထိခိုက်စေပါသည်။ကျွန်ုပ်တို့၏ရလဒ်များက DNA အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် အလျားပေါ်မူတည်၍ MB၊ DNA နှင့် voltammetric တုံ့ပြန်မှုရှိ အာရုံခံကိရိယာတို့၏ အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုဆိုင်ရာ ကွဲပြားသော ယန္တရားများပေါ်တွင်မူတည်ကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့၏ရလဒ်များက ပြသသည်၊ ပိုရှည်သောအပိုင်းအစများသည် ဆားကြားရှိ electrostatic အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုအပေါ် အပျက်သဘောဆောင်သောအကျိုးသက်ရောက်မှုရှိသော်လည်း၊ MB နှင့် DNA ။
DNA အာရုံစူးစိုက်မှုသည် မပြုပြင်မထားသောလျှပ်ကူးပစ္စည်းတွင် MB-DNA အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှု၏ယန္တရားကို ဆုံးဖြတ်ပေးသည်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် MB-DNA အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုယန္တရားများသည် DNA အာရုံစူးစိုက်မှုပေါ်တွင်မူတည်ကြောင်း သက်သေပြပါသည်။ အနည်းငယ်သောပမာဏအောက်ရှိ DNA အာရုံစူးစိုက်မှုတွင် \({\hbox {ng}/\upmu \hbox {l}}}\) အီလက်ထရွန်းနစ်လျှပ်စီးကြောင်းတုံ့ပြန်မှုကို အီလက်ထရိုဒိုက်ပေါ်ရှိ MB-DNA ၏စုပ်ယူမှုဖြင့် အဓိကအားဖြင့် ဆုံးဖြတ်သည်ကို ကျွန်ုပ်တို့တွေ့ရှိခဲ့ရပြီး ပြင်းအားနိမ့်ချိန်တွင် DNA ပြင်းအားမြင့်မားချိန်တွင်၊ redox ၏ steric inhibition ဖြင့် electrochemical current တုံ့ပြန်မှုကို ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည် DNA အခြေခံအတွဲများကြား MB ထည့်သွင်းခြင်းကြောင့် လုပ်ဆောင်မှု။
ENIG PCB-Based Electrochemical Sensing of Viral Nucleic Acids in Lake Water Samples အဆိုပါလေ့လာတွေ့ရှိချက်များကို Phi6-added \(503\,\hbox {bp}\) DNA အပိုင်းအစများ Powai Lake၊ IIT Mumbai Campus မှ ရေနမူနာများမှရရှိသော electrochemical detection ဖြင့် အတည်ပြုခဲ့သည် ရလဒ် phage။
အကောင်အထည်ဖော်မှုကုန်ကျစရိတ်နည်းပါးခြင်းနှင့် အပြည့်အဝအလိုအလျောက်စောင့်ကြည့်ရေးစနစ်များ၊ oligonucleotides သို့မဟုတ် aptamers များတွင် သက်တမ်းပိုကြာသော လျှပ်ကူးပစ္စည်းများတွင် ပေါင်းစည်းရန် အလားအလာ။
Phage Phi6 သည် Pseudomonas syringae ကိုကူးစက်သော Cytoviridae မိသားစု၏ ထုပ်ပိုးထားသော dsRNA ဗိုင်းရပ်စ်ဖြစ်သည်။ Phi6 phage ၏ genome သည် အပိုင်း 3 ပိုင်းပုံစံဖြင့် ရှိနေသည်- S (\(2.95\,\hbox {Kb}\)), M (\(4.07) \,\hbox {Kb}\)) နှင့် L (\(6.37\ ,\hbox{Kb}\))16,17. Phi6 phage သည် ရောဂါပိုးမဝင်သော BSL-1 Pseudomonas အမျိုးအစားကို ကူးစက်သောကြောင့် အသုံးပြုရန် ဘေးကင်းပါသည် ဓာတ်ခွဲခန်းတွင် အလွယ်တကူ စိုက်ပျိုးနိုင်ပါသည်။Phage Phi6 နှင့် ၎င်း၏အိမ်ရှင် Pseudomonas syringae အား ဘက်တီးရီးယားဗိုင်းရပ်စ်ပိုးများအတွက် Felix d'Herelle ရည်ညွှန်းစင်တာ၊ Laval တက္ကသိုလ်၊ ကနေဒါနိုင်ငံ (ကိုးကားစင်တာ ကတ်တလောက်နံပါတ်များမှာ HER-102 နှင့် HER-1102 အသီးသီး) မှ ဝယ်ယူခဲ့သည်။ .Phi6 phage နှင့် ၎င်း၏အိမ်ရှင်အား ရည်ညွှန်းစင်တာမှ ညွှန်ကြားသည့်အတိုင်း ပြန်လည်အသက်သွင်းခဲ့သည်။Phage Phi6 ကို \(\about 10^{12}\,\hbox {PFU}/\hbox { ml}}\) (plaque ပုံစံယူနစ်/မီလီလီတာ)။ထုတ်လုပ်သူ၏ ညွှန်ကြားချက်အရ GenElute™ Universal Total RNA သန့်စင်ရေး Kit (Sigma-Aldrich) ကို အသုံးပြု၍ RNA ကို သန့်စင်ထားသော phage အမှုန်များမှ ခွဲထုတ်ထားပါသည်။({ 100}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) ကို lysed လုပ်ပြီး RNA ကို အစေးကော်လံနှင့် ချိတ်ဆက်ခွင့်ပြုရန် lysate အား လှည့်ကော်လံတစ်ခုပေါ်တွင် တင်ထားသည်။ ထို့နောက် RNA ကို elution ဖြေရှင်းချက်တွင် ဖယ်ထုတ်ထားသည် \({ 50}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) အစုံလိုက်ဖြင့် ပံ့ပိုးပေးပါသည်။ RNA ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုကို \(260\,\hbox {nm}\) တွင် ခန့်မှန်း၍ RNA ကို aliquots တွင် သိမ်းဆည်းထားသည်။ နောက်ထပ် အသုံးမပြုမချင်း ({-80}\,{^{circ }\hbox {C}}\)။\({2}\,{\upmu \hbox {g}}\) iScript cDNA Synthesis Kit (Bio -Rad Laboratories) ကို ထုတ်လုပ်သူ၏ ညွှန်ကြားချက်များအတိုင်း cDNA ပေါင်းစပ်မှုအတွက် ပုံစံပလိတ်အဖြစ် အသုံးပြုထားပါသည်။ အတိုချုပ်အားဖြင့်၊ cDNA ပေါင်းစပ်တုံ့ပြန်မှုတွင် အဆင့် ၃ ဆင့် ပါဝင်သည်- \({25}\,{^{\circ }\hbox {C}}\ )\({5}\,\hbox {min} }\) ၊ \({20}\,\hbox {min}}\) တွင် \({46}\,{^{\circ }\hbox {C}}\) နှင့် ပြောင်းပြန် အသံဖမ်းစက်သည် \({95}\,{^{circ }\hbox {C}}\) အတွက် \({1}\,{\hbox {min }}\) 1% agarose gel ကို run သောအခါ၊ cDNA သည် မျှော်လင့်ထားသည့် RNA အပိုင်းအစ (ဒေတာမပြထား) အပိုင်းသုံးပိုင်းနှင့် သက်ဆိုင်သည့် band သုံးခုကို ပြသခဲ့သည်။ အောက်ပါ primer များကို အရှည် 117 နှင့် 503 bp ၏ DNA အပိုင်းအစနှစ်ခုကို ချဲ့ထွင်ရန် အသုံးပြုခဲ့သည်၊ miniPCR® mini8 thermal cycler တွင် PCR အတွက် နမူနာအဖြစ် cDNA ကိုအသုံးပြုသည်-
\(117\,\hbox {bp}\) နှင့် \(503\,\hbox {bp}\) အတွက် primers များသည် M segment ၏ 1476-1575 nucleotides နှင့် L segment ၏ 458-943 nucleotides အသီးသီး အက်ဆစ်၊ ချဲ့ထွင်ထားသော PCR ထုတ်ကုန်အားလုံးကို 1% agarose gels တွင် electrophores လုပ်ပြီး ချဲ့ထွင်ထားသော ပစ်မှတ် DNA ကို GeneJET Gel Extraction Kit (Thermo Fisher Scientific) ဖြင့် သန့်စင်ထားပါသည်။
IIT Mumbai ကျောင်းဝင်းရှိ ရေကန် (Powai Lake၊ Powai၊ Mumbai) တွင် phage အမှုန်များထည့်ရန် အသုံးပြုခဲ့သည်။ အဆိုပါရေကန်ကို ဖယ်ရှားရန် \({5}\,{\upmu \hbox {m}}\) အမြှေးပါးမှတဆင့် စစ်ထုတ်ထားပါသည်။ ဆိုင်းငံ့ထားသော အမှုန်များကို ပေါင်းထည့်ပြီးနောက် Phi6 phage ကို ပေါင်းထည့်လိုက်ပါသည်။ \({1}\,\hbox {ml}}\) ၏ \(10^{6}\,{\hbox {PFU}/\hbox {ml}} \) မှ \( {100}\ ,{\hbox {ml}}\) တွင် စစ်ထုတ်ထားသော ကန်ရေ၊ \({4}\,{^{circle}\hbox {C}}\) သေးငယ်သော aliquot သည် plaque assay ဖြင့် ဗိုင်းရပ်စ်ဝန်ကို တိုင်းတာခြင်းအတွက် သီးသန့်ဖြစ်သည်။ ကျွန်ုပ်တို့သည် ပြန့်ကျဲနေသော Phi6 ဗိုင်းရပ်စ်အမှုန်များကို အာရုံစူးစိုက်ရန် မတူညီသောနည်းလမ်းနှစ်ခုကို စမ်းသပ်ခဲ့သည်- (၁) အလူမီနီယမ်ဟိုက်ဒရောဆိုက် စုပ်ယူမှု-မိုးရွာခြင်းနည်းလမ်း၊ 19 ပတ်ဝန်းကျင်နမူနာများမှ ထုပ်ပိုးထားသော RNA ဗိုင်းရပ်စ်များ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုအတွက် တရားဝင်အတည်ပြုထားသော၊ (2) ) polyethylene glycol (PEG) အခြေပြု ဗိုင်းရပ်စ် အာရုံစူးစိုက်မှု နည်းလမ်းကို Flood et al မှ ဆီလျော်အောင် ဘာသာပြန်ထားသည်။20 . PEG-based method ၏ ပြန်လည်ရယူမှု ထိရောက်မှုသည် အလူမီနီယမ် ဟိုက်ဒရောဆိုဒ်နည်းလမ်းထက် ပိုကောင်းသည်ကို တွေ့ရှိသဖြင့် PEG-based နည်းလမ်းကို ကန်ရေနမူနာများမှ Phi6 အမှုန်များကို အာရုံစူးစိုက်ရန် အသုံးပြုခဲ့သည်။
အသုံးပြုခဲ့သည့် PEG နည်းလမ်းမှာ အောက်ပါအတိုင်းဖြစ်သည်- PEG 8000 နှင့် \(\hbox {NaCl}\) ကို 8% PEG 8000 နှင့် \(0.2\,\hbox {M} \) \(\hbox {M} \) \( \hbox {NaCl}\).နမူနာများကို shaker ပေါ်တွင် ပေါက်ထားသည်\({4}\,{^{circ }\hbox {C}}\)\({4}\,\hbox {h}}\ ) ထို့နောက် \(4700 \,\hbox {g}\) သည် \({45}\,{\hbox {min}}\) တွင် ဗဟိုပြု၍ ဖယ်ထားပြီး \({1}\၊ တူညီသော supernatant တွင် {\hbox {ml}}\)။ spikes နှင့် virus အာရုံစူးစိုက်မှု စမ်းသပ်မှုအားလုံးကို triplicate ဖြင့် ပြုလုပ်ခဲ့ပါသည်။ အာရုံစူးစိုက်မှုပြီးနောက်၊ plaque assay ဖြင့် ပြန်လည်ရယူခြင်း၏ ထိရောက်မှုကို တိုင်းတာရန်အတွက် အသေးစား aliquot ကို သီးသန့်ထားခဲ့သည်။ RNA သည် ယခင်ဖော်ပြထားပြီး မှတ်သားထားသည့်အတိုင်း သီးခြားခွဲထုတ်ထားပါသည်။ kit-supplied elution buffer\({40}\,{\upmu \hbox {l}}\).RNA အာရုံစူးစိုက်မှုသည် နမူနာမှနမူနာသို့ triplicate ဖြင့်ကွဲပြားသောကြောင့် \({2}\,{\upmu \ hbox {l}}\) ၏ RNA ကို ၎င်း၏ အာရုံစူးစိုက်မှု မခွဲခြားဘဲ cDNA ပေါင်းစပ်မှု သုံးခုစလုံးအတွက် အသုံးပြုပါသည်။cDNA ပေါင်းစပ်မှုကို ယခင်က ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း လုပ်ဆောင်ခဲ့ပါသည်။\({1}\,{\upmu \hbox {l}}\) cDNA \({20}\,{\upmu \hbox {l}}\) PCR ကို ချဲ့ထွင်ရန် 35 cycles အတွက် နမူနာအဖြစ် အသုံးပြုခဲ့သည် \(117\,\hbox {bp}\) နှင့် \(503\,\hbox { bp}\) အပိုင်းအစများ။ဤနမူနာများကို "1:1" အဖြစ် ကိုယ်စားပြုထားသည်၊ ဆိုလိုသည်မှာ ဖျတ်လတ်ခြင်းမရှိပါ။ ပုံစံမပြသော ထိန်းချုပ်မှု (NTC) ကို အနုတ်လက္ခဏာ ထိန်းချုပ်မှုအဖြစ် သတ်မှတ်ထားပြီး cDNA မှ သန့်စင်ထားသော phage မှ သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော RNA ကို အသုံးပြု၍ ပေါင်းစပ်ဖွဲ့စည်းထားစဉ်၊ အပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှု (PC) အတွက် နမူနာပုံစံတစ်ခုအနေဖြင့်)။Quantitative PCR (qPCR) ကို Brilliant III Ultra-Fast SYBR Green QPCR Master Mix (Agilent Technologies) အသုံးပြုထားသော Stratagene Mx3000P RT-PCR တူရိယာတွင် လုပ်ဆောင်ခဲ့ပါသည်။ ဖော်ပြထားပါသည်။နမူနာအားလုံးအတွက် စက်ဝန်းအဆင့် (Ct) ကို မှတ်တမ်းတင်ထားပါသည်။ ထို့အပြင်၊ ဖျော်ထားသောနမူနာများသည် \({1}\,{\upmu \hbox {l}}\) အဖြစ် စစ်ထုတ်ထားသော ကန်ရေတွင် 1:100 ကို ရောနှောထားသော cDNA ကို အသုံးပြုထားသည်။ \({20}\,{\upmu \hbox {l}}\) 35 ပတ်အတွက် PCR. ဤနမူနာများကို “1:100″ အဖြစ် ကိုယ်စားပြုပါသည်။
PCB လျှပ်ကူးပစ္စည်းအား စီးပွားဖြစ်ရရှိနိုင်သော ကုန်ကျစရိတ်သက်သာသော Electroless Nickel Immersion Gold (ENIG) လုပ်ငန်းစဉ်ကို အသုံးပြု၍ ရွှေအဖြစ် ထပ်မံပြုလုပ်ရန် မလိုအပ်ဘဲ ENIG PCB လျှပ်ကူးပစ္စည်း သတ်မှတ်ချက်များကို ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လုပ်ငန်းခွင်တွင် အသေးစိတ်ဖော်ပြထားပါသည်။ ENIG PCB လျှပ်ကူးပစ္စည်းအတွက်၊ ရိုးရာလျှပ်ကူးပစ္စည်း သန့်ရှင်းရေးနည်းလမ်းများဖြစ်သည့် piranha solution သို့မဟုတ် sulfuric acid cyclic voltammetry သည် ပါးလွှာသောရွှေအလွှာ (အထူ \(\approx\) \(100\,\hbox {nm }\))) နှင့် ကျရောက်တတ်သော အောက်ခံကြေးနီအလွှာများကို ဖော်ထုတ်နိုင်သောကြောင့် ၎င်းတို့ကို မထောက်ခံပါ။ သံချေးတက်စေရန် 21၊ 22၊ 23၊ 24၊ 25။ ထို့ကြောင့်၊ IPA ဖြင့် စိုစွတ်သော ပျဉ်းမထားသောအ၀တ်ဖြင့် လျှပ်ကူးပစ္စည်းကို သန့်စင်ပါ။ စမ်းသပ်မည့်နမူနာကို \({50}\,{\upmu \hbox {M}) ဖြင့် ပေါက်ဖွားထားပါသည်။ ထည့်သွင်းရလွယ်ကူစေရန် \({4}\,{^{circ }\hbox {C}}\)\({ 1}\,{\hbox {h}}\) ရှိသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်အလုပ်တွင်၊ MB အာရုံစူးစိုက်မှု 11 ကို တိုးမြှင့်ခြင်းဖြင့် အာရုံခံကိရိယာ၏ အာရုံခံနိုင်စွမ်းနှင့် မျဉ်းသားနိုင်စွမ်းကို မြှင့်တင်ထားသည်ကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏အစောပိုင်းအလုပ်တွင် အစီရင်ခံထားသည့် ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်လုပ်ဆောင်မှုများအပေါ် အခြေခံ၍ \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ ဤလေ့လာမှုတွင် DNA မြှပ်နှံရန် ပြင်းအားများ။ နှစ်ထပ်သောင်တင်ထားသော DNA (ds-DNA) ကို anionic သို့မဟုတ် cationic intercalators များအသုံးပြု၍ အီလက်ထရွန်းနစ်ဓာတ်ခွဲရှာဖွေခြင်းကို အောင်မြင်နိုင်သည်။ anionic intercalator များသည် DNA ကို ပိုမိုကောင်းမွန်သောရွေးချယ်မှုဖြင့် ရှာဖွေနိုင်သော်လည်း၊ ၎င်းတို့သည် ညတွင်းချင်းပေါက်ဖွားရန် လိုအပ်ပြီး ထောက်လှမ်းမှုအချိန်ပိုကြာစေသည်။ အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ MB ကဲ့သို့သော cationic intercalator များသည် ds-DNA6 ၏ electrochemical detection အတွက် ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် တိုတောင်းသော ပေါက်ဖွားချိန် လိုအပ်ပါသည်။ လျှပ်ကူးပစ္စည်း\({5}\,{{\upmu \hbox {l}}}\)၊ ထို့နောက် အခြားနမူနာကို ဆက်လက်မလုပ်ဆောင်မီ IPA-စိုစွတ်သော အဝတ်စုတ်ဖြင့် သန့်ရှင်းရေးလုပ်ပါ။တိုင်းတာမှုတစ်ခု။နမူနာတစ်ခုစီကို အခြားလျှပ်ကူးပစ္စည်း 5 ခုတွင် ခြားနားစွာဖော်ပြထားခြင်းမရှိပါက စမ်းသပ်ခဲ့သည်။DPV နှင့် CV တိုင်းတာမှုများကို PalmSens Sensit Smart potentiostat ကိုအသုံးပြုကာ လုပ်ဆောင်ခဲ့ပြီး PSTrace ဆော့ဖ်ဝဲလ်ကို အမြင့်ဆုံးလက်ရှိတွက်ချက်မှုများအပါအဝင် အမြင့်ဆုံးလက်ရှိတွက်ချက်မှုများအပါအဝင် ဒေတာရယူမှုအတွက် PSTrace ဆော့ဖ်ဝဲကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ DPV နှင့် CV တိုင်းတာခြင်းများအတွက်
DPV- Equilibrium Time = \(8\,\hbox {s}\), Voltage Step = \(3\,\hbox {mV}\), Pulse Voltage = \(25\,\hbox {mV}\)၊ Pulse ကြာချိန် = \(50\,\hbox {ms}\), စကင်န်နှုန်း = \({20}\,\hbox {mV/s}\)
CV- Equilibrium Time = \(8\,\hbox {s}\), Voltage Step = \(3\,\hbox {mV}\), Sweep Rate = \({300}\,\hbox {mV/s }\)
\({50}\,\upmu \hbox {M}}\) MB: (a) \(503\,\hbox {bp}\) DPV , (b) \ (503\,\hbox {bp}\) CV၊ (c) \(117\,\hbox {bp}\) DPV, (d) \(117\,\hbox {bp}\) CV။
DPV နှင့် CV voltammograms များကို ENIG PCB လျှပ်ကူးပစ္စည်းတွင် ရရှိခဲ့သည် \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB (ပြင်းအား 10–\({20}\၊ hbox {ng) တွင်၊ }/{\upmu \hbox {l}}}\) ဆိုလိုသည်မှာ 0.13–\({0.26}\, \upmu \hbox {M}}\) အတွက် \(117\,\hbox {bp}\) နှင့် 0.03 –\({0.06}\,{\upmu \hbox {M}}\) အတွက် \(503\,\hbox {bp}\)).ကိုယ်စားပြု voltammograms များကို နောက်ဆက်တွဲ အချက်အလက်တွင် ပုံ S1 တွင် ပြထားသည်။ ပုံ 2 သည် ရလဒ်များကို ပြသသည် CV တိုင်းတာခြင်းများတွင် gel-purified PCR ထုတ်ကုန်များကို အသုံးပြု၍ DPV နှင့် CV တိုင်းတာခြင်း (peak current) ၏ CV တိုင်းတာခြင်းများနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက DPV တိုင်းတာမှုများသည် ပိုမို sensitivity ကိုပြသသည် (လက်ရှိ DNA အာရုံစူးစိုက်မှု၏လုပ်ဆောင်ချက်အဖြစ်) သည် CV တိုင်းတာခြင်းများတွင် နောက်ခံ capacitive ရေစီးကြောင်းများသည် Faradaic ရေစီးကြောင်းများကို ဖုံးကွယ်ထားသောကြောင့် 26 .ဒေတာ boxplot အတွင်းရှိ box တစ်ခုစီတွင် electrode 5 ခုမှ တိုင်းတာမှုများ ပါဝင်ပါသည်။ တိုင်းတာမှုအားလုံးသည် electrode-to-electrode ကွဲလွဲမှုကြောင့် တိုင်းတာမှုအမှားများကိုရှောင်ရှားရန် တူညီသောလျှပ်ကူးပစ္စည်းအစုအဝေးကိုအသုံးပြုပါသည်။ DNA ၏ပါဝင်မှုနည်းသော DPV နှင့် CV တွင် တိုင်းတာသည့် အမြင့်ဆုံးရေစီးကြောင်းများတွင် တိုးလာနေသည်ကိုတွေ့ရှိရပါသည်။ , ပိုရှည်သည် (\(503\,\hbox {bp}\)) \,\hbox {bp}\ နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက \(117) ) အပိုင်းအစ။ ၎င်းသည် ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်အလုပ်တွင် ဖော်ပြထားသော electrode စုပ်ယူမှု အလားအလာနှင့် ကိုက်ညီပါသည်။ MB-DNA complex ၏ စုပ်ယူမှုသည် အထွတ်အထိပ်သို့ တိုးလာစေရန် ပံ့ပိုးပေးသည့် electrode ပေါ်ရှိ အားသွင်းလွှဲပြောင်းမှုကို လွယ်ကူချောမွေ့စေပါသည်။ အခြားလေ့လာမှုများက MB-DNA intercalation 27,28,29,30 တွင် oligonucleotide ၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုနှင့် အစီအစဥ်ကို ပြသခဲ့သည်။The guanine amplicons နှစ်ခု၏ -cytosine (GC) ပါဝင်မှု (\(117\,\hbox {bp}\) နှင့် \(503\,\hbox {bp}\))) သည် ခန့်မှန်းခြေ 50% ဖြစ်သည် amplicon length သို့ဖြစ်သည်။သို့သော်၊ ပိုမိုမြင့်မားသော DNA ပြင်းအားအတွက် (\(>{2}\, \hbox {ng}/\upmu \hbox {l}}}\), \(503\,\hbox {bp})၊ \) နှင့် \(>{10}\,{\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) for \(117\,\hbox {bp}\)))၊ subs များ၏ အမြင့်ဆုံးရေစီးကြောင်းများကို DPV နှင့် CV တိုင်းတာမှုနှစ်ခုလုံးတွင် လျှော့ချထားသည်။ ၎င်းသည် MB31,32 ရှိ လျှော့ချနိုင်သောအုပ်စု၏ redox လုပ်ဆောင်မှုကို steric ဟန့်တားခြင်းကြောင့် MB သည် DNA ၏အခြေခံအတွဲများကြားတွင် saturates နှင့် intercalates ကြောင့်ဖြစ်သည်။
在存在 \(2\,\hbox {mM}\) \({\hbox {MgCl }_2}\): (a) \(503\,\hbox {bp}\) DPV, (b) \(503 \,\hbox {bp}\) CV၊ (c) \(117\,\hbox {bp}\) DPV,(d) \(117\,\hbox {bp}\) CV။
PCR မာစတာတွင်ပါရှိသောဆားများသည် MB နှင့် DNA အကြား electrostatic အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုကို အနှောင့်အယှက်ဖြစ်စေသောကြောင့် \(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl }_2\) ဖြင့် \({50} \,{\ upmu \hbox {M}}\) MB-DNA တုံ့ပြန်မှုအပေါ် ဆား၏အကျိုးသက်ရောက်မှုကို လေ့လာရန် MB ဂျယ်-သန့်စင်ထားသော ထုတ်ကုန်။ ပုံ 3 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း DNA ပြင်းအားပိုမိုမြင့်မားရန်အတွက် တွေ့ရှိခဲ့သည် (\(>{2}\,{\ hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) (503\,\hbox {bp }\) နှင့် \(>{10}\,{\hbox {ng}/\upmu \hbox { l}}}\) for \(117\,\hbox {bp} \))၊ DPV နှင့် CV တွင် ဆားထည့်ခြင်းသည် တိုင်းတာမှုများကို သိသိသာသာ မထိခိုက်စေပါ (ကိုယ်စားပြု voltammograms အတွက် နောက်ဆက်တွဲအချက်အလက်များအတွက် ပုံ S2 ကိုကြည့်ပါ)။သို့သော်၊ DNA ပါဝင်မှု နည်းပါးသောကြောင့် ဆား၏ ပေါင်းထည့်မှုသည် အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို များစွာ လျော့နည်းစေပြီး DNA အာရုံစူးစိုက်မှုတွင် သိသိသာသာ ပြောင်းလဲခြင်း မရှိပေ။ MB-DNA ၏ တုံ့ပြန်မှုများနှင့် ပေါင်းစည်းခြင်းအပေါ် ဆား၏ အလားတူ အနုတ်လက္ခဏာ သက်ရောက်မှုများကို အခြားသော သုတေသီများ 33,34 မှ ယခင်က အစီရင်ခံခဲ့သည်။\(\hbox { Mg}^{2+}\) cations များသည် DNA ၏ အနုတ်လက္ခဏာ ဖော့စဖိတ်ကျောရိုးနှင့် ချိတ်ဆက်ထားသောကြောင့် MB နှင့် DNA အကြား electrostatic အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုကို ဟန့်တားသည်။ DNA ပြင်းအား မြင့်မားသောအခါ redox-active MBs ၏ steric inhibition သည် အမြင့်ဆုံးရေစီးကြောင်းကို နိမ့်ကျစေသည်၊ ထို့ကြောင့် electrostatic အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုများ၊ အာရုံခံ တုံ့ပြန်မှုကို သိသိသာသာ မထိခိုက်စေပါ။ အဓိကအချက်မှာ ဤ biosensor သည် ပိုမိုမြင့်မားသော DNA ပြင်းအားကို ရှာဖွေရန် ပိုသင့်တော်သည် (ရှားရှားပါးပါး \({\hbox {ng}/\upmu \hbox {l}}}\) သို့မဟုတ် ထို့ထက်)၊ အပြည့်အဝ- PCR ထုတ်ကုန်များ၏ ဂျယ်သန့်စင်ခြင်း မဖြစ်နိုင်သည့် ပတ်ဝန်းကျင် ရေနမူနာများကို အလိုအလျောက် စီမံဆောင်ရွက်ပေးခြင်း။
လှိုင်းအလျားအကွာအဝေး 600–700 အတွက် စုပ်ယူမှုမျဉ်းကွေးအောက်ရှိ ဧရိယာ \(\hbox {nm}\) နှင့် ပေါင်းစပ်ထားသော DNA အမျိုးမျိုးအတွက် \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB: ( a ) \(503\,\hbox {bp}\) ဆားမပါဘဲ (\(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl}_2\)), (b) \( 117\၊ \hbox {bp}\) ဆားမပါဘဲ (\(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl}_2\)).\({0}\,\hbox {pg}/ {\upmu \hbox {l}}}\) MB နမူနာများ \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) နှင့် သက်ဆိုင်သော DNA ပြင်းအား မရှိပါ။
အထက်ဖော်ပြပါ ရလဒ်များကို ထပ်မံအတည်ပြုရန်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် UV/Vis spectrophotometer (Thermo Scientific Multiskan GO) ကို အသုံးပြု၍ အလင်းပြတိုင်းတာမှုများကို လုပ်ဆောင်ခဲ့ပြီး နမူနာများကို \({50}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) တစ်ခုစီအတွက် အသုံးပြုခဲ့သည် အတိုင်းအတာ။ စုပ်ယူမှုလက်မှတ်သည် လှိုင်းအလျားအကွာအဝေး \(600\,\hbox {nm}\) မှ \(700\,\hbox { nm}\) ၊ ပုံ 4 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း (နောက်ဆက်တွဲအချက်အလက်များတွင် Fig. S3 တွင်ပြသထားသည့်စုပ်ယူမှုရောင်စဉ်)။ DNA ပါဝင်မှုနည်းသောနမူနာများအတွက် \({1}\,{\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\)၊ DNA ပါရှိသော နှင့် MB သီးသန့်နမူနာများ ( \(503\,\hbox {bp}\) နှင့် \(117\,\hbox {bp}\ အတွက်) နှင့် \(117\,\hbox {bp}\)' အကြား စုပ်ယူမှုတွင် သိသိသာသာ ကွာခြားမှုမရှိပါ။ ) အရှည်အပိုင်းအစများ) ၊ redox-active MB ၏ steric inhibition မရှိခြင်းကို ညွှန်ပြပါသည်။ DNA ပြင်းအားများလာသောအခါတွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် စုပ်ယူမှု အချက်ပြမှုတွင် တဖြည်းဖြည်း ကျဆင်းလာသည်ကို တွေ့ရှိခဲ့ပြီး ဆားပါဝင်မှုတွင် စုပ်ယူနိုင်မှု လျော့နည်းသွားသည်ကို သတိပြုမိပါသည်။ ဤရလဒ်များသည် မော်လီကျူးများနှင့် သက်ဆိုင်ပါသည်။ DNA ပေါင်းစပ်မှုများတွင် အခြေခံစုပုံခြင်းနှင့်အတူ အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုများနှင့် steric တားစီးမှု။ ကျွန်ုပ်တို့၏ရလဒ်များသည် \(\pi\)–\(\pi ^*\ တွင် hypochromaticity နှင့် hypochromaticity ကိုဆက်စပ်ပေးသည့် spectroscopic study of MB-DNA intercalation ဆိုင်ရာ စာပေများတွင် အစီရင်ခံစာများနှင့် ကိုက်ညီပါသည်။ ) အထပ်ထပ် အလွှာများ 36၊ 37၊ 38 တို့ကြောင့် အီလက်ထရွန်းနစ် ကူးပြောင်းမှုများ။
phage Phi6 ၏ Agarose gel electrophoresis- အရှည်ရှိသော PCR ထုတ်ကုန် \(117\,\hbox {bp}\) နှင့် \(503\,\hbox {bp}\) ရေကန်နမူနာများမှ ဖြစ်သည်။M-DNA အမှတ်အသား၊NTC-no-template ထိန်းချုပ်မှု၊ သက်ဆိုင်ရာ amplicons ပါရှိသော primers၊PC အပြုသဘောထိန်းချုပ်မှု;1၊ 2၊ 3-ဒိန်ခဲထားသော (1:1) မှိုတက်နေသော ရေကန်နမူနာများကို triplicate တွင်တွေ့ရသည်။ (503\,\hbox {bp}\) တွင် အသုံးမပြုသော oligonucleotides ကြောင့် \(503\,\) တွင် မြင်နိုင်သည်။ hbox {bp}\) လမ်းသွား။
Phi6 phage ဖြင့် ထိုးထားသော Powai Lake ရေနမူနာများကို အသုံးပြု၍ အာရုံခံကိရိယာ၏ အသုံးဝင်မှုကို ကျွန်ုပ်တို့ အကဲဖြတ်ပါသည်။ phage-spiked ရေနမူနာများမှ သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော RNA ပြင်းအား 15.8–\({19.4}\,{\upmu \hbox {g}/\hbox { ml}}\)၊ ၎င်းတို့ကို သန့်စင်ထားသော phage ဆိုင်းငံ့ထားမှုများမှ ခွဲထုတ်ထားသော်လည်း RNA သည် ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် \({1945}\,{\upmu \hbox {g}/\hbox {ml}}\) ခန့်ရှိပြီး ပြန်လည်ရယူသည့် ထိရောက်မှု 1 %RNA ကို cDNA သို့ ပြောင်းပြန်ကူးယူထားပြီး PCR နှင့် qPCR အတွက် နမူနာပုံစံအဖြစ် အသုံးပြုထားသည်။ ထုတ်ကုန်အရွယ်အစားကို agarose gel electrophoresis (ပုံ 5) ဖြင့် အာရုံခံကိရိယာဖြင့် စမ်းသပ်ခြင်းမပြုမီ အတည်ပြုခဲ့သည်။ ဤနမူနာများသည် ဂျယ်သန့်စင်ခြင်းမဟုတ်သောကြောင့် PCR ၏ အစိတ်အပိုင်းအားလုံး ပါဝင်ပါသည်။ စိတ်ပါဝင်စားသော amplicons များအပြင် qPCR (ဇယား 1) တွင် မှတ်တမ်းတင်ထားသော Ct တန်ဖိုးများသည် သက်ဆိုင်ရာ spiked water samples မှခွဲထုတ်ထားသော RNA ၏အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် ဆက်စပ်နေကြောင်း ပြသထားသည်။ အဆိုပါ Ct တန်ဖိုးသည် ချောင်းအချက်ပြမှုအတွက် လိုအပ်သော သံသရာအရေအတွက်ကို ဖော်ပြသည်။ သတ်မှတ်ချက် သို့မဟုတ် နောက်ခံအချက်ပြမှုထက် ကျော်လွန်နေပါသည်။ ပိုမိုမြင့်မားသော Ct တန်ဖိုးများသည် နိမ့်သော template ပြင်းအားကို ညွှန်ပြပါသည်။ NTC နမူနာများ၏ Ct တန်ဖိုးများသည် မျှော်လင့်ထားသလောက် မြင့်မားနေပါသည်။ \(\ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် 3\) Ct တန်ဖိုးများအကြား ကွာခြားချက် အပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှုနှင့် စမ်းသပ်မှုနမူနာသည် စမ်းသပ်မှုနမူနာတစ်ခုစီတွင် အပြုသဘောထိန်းချုပ်မှုနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက ခန့်မှန်းခြေ 1% ပုံစံခွက်ရှိကြောင်း ထပ်မံဖော်ပြသည်။ ပိုရှည်သော amplicons သည် ပိုမိုကောင်းမွန်သော sensitivity ကိုဖြစ်ပေါ်စေသည်ဟု ကျွန်ုပ်တို့ယခင်က ဆွေးနွေးထားပါသည်။ မတူညီသောပတ်ဝန်းကျင်နမူနာများမှ ခွဲထုတ်ထားသော ပိုရှည်သောအပိုင်းအစများကို ချဲ့ထွင်ခြင်းသည် အားနည်းချက်များကြောင့် စိန်ခေါ်မှုဖြစ်သည်။ ဗိုင်းရပ်စ် အာရုံစူးစိုက်မှု နည်းပါးခြင်းနှင့် RNA ဆုတ်ယုတ်မှု နည်းပါးသည်။သို့သော် ကျွန်ုပ်တို့၏ ဗိုင်းရပ်စ် ကြွယ်ဝမှုနှင့် PCR ချဲ့ထွင်မှု ပရိုတိုကောဖြင့်၊ လျှပ်စစ်ဓာတ် အာရုံခံခြင်းအတွက် \(503\,\hbox {bp}\) အပိုင်းအစကို အောင်မြင်စွာ ချဲ့ထွင်နိုင်ခဲ့ပါသည်။
ပုံ 6 သည် (503\,\hbox {bp}\) အစိတ်စိတ်အမွှာမွှာ amplicon ၏ လျှပ်စစ်ဓာတုအာရုံခံကိရိယာရလဒ်များကို ပြသသည်၊၊ နှစ်ခုစလုံးသည် စင်ပလိတ် (1:1) အဖြစ် (1:1) နှင့် (100-fold diluted cDNA) ပုံစံအတိုင်း (1:100) PCR လုပ်ဆောင်ခဲ့သည် NTC နှင့် PC နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါ (ကိုယ်စားပြု voltammograms အတွက် နောက်ဆက်တွဲအချက်အလက်များအတွက် ပုံ S4 ကိုကြည့်ပါ)။ ပုံ 6 ရှိ boxplot ရှိ ဘောက်စ်တစ်ခုစီတွင် လျှပ်ကူးပစ္စည်း 5 ခုရှိ နမူနာသုံးခုမှ တိုင်းတာမှုများပါရှိသည်။ လျှပ်ကူးပစ္စည်း အမှားအယွင်းများကို ရှောင်ရှားရန် နမူနာအားလုံးကို တိုင်းတာရန်အတွက် တူညီသောလျှပ်ကူးပစ္စည်းကို အသုံးပြုထားသည်။ -to-electrode ကွဲလွဲမှု။CV တိုင်းတာမှုများနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက DPV တိုင်းတာမှုများသည် ယခင်ဖော်ပြခဲ့သည့်အတိုင်း၊ ယခင်ဖော်ပြခဲ့သည့်အတိုင်း Faradaic လျှပ်စီးကြောင်းများသည် နောက်ပိုင်းတွင် နောက်ခံ capacitive ရေစီးကြောင်းများကြောင့် ဖုံးကွယ်ထားသောကြောင့် DPV တိုင်းတာမှုများသည် စမ်းသပ်မှုနှင့် PC နမူနာများကို ခွဲခြားရန် ပိုမိုကောင်းမွန်သော ကြည်လင်ပြတ်သားမှုကို ပြသပါသည်။ အနှုတ်ထိန်းချုပ်မှု (NTC) သည် CV နှင့် DPV အမြင့်ဆုံးရေစီးကြောင်းများကို အပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှုနှင့် နှိုင်းယှဉ်လျှင် မြင့်မားသောရလဒ်ကိုဖြစ်ပေါ်စေသော်လည်း၊ အပြုသဘောနှင့်မညင်သာသောစမ်းသပ်မှုနမူနာများက DPV အမြင့်ဆုံးရေစီးကြောင်းများ၏အလားတူအထွတ်အထိပ်ကိုပြသခဲ့သည်။ မဖျော့ထားသောတစ်ခုစီအတွက် ပျမ်းမျှနှင့် ပျမ်းမျှတန်ဖိုးများ (1:1 ) စမ်းသပ်နမူနာနှင့် PC သည် NTC နမူနာအတွက် အာရုံခံအထွက်မှ ရှင်းလင်းပြတ်သားစွာ ဖြေရှင်းနိုင်သော်လည်း 1:100 မှေးမှိန်နမူနာအတွက် ကြည်လင်ပြတ်သားမှုမှာ အသံထွက်နည်းပါသည်။ cDNA ၏ အဆ 100-dilution အတွက်၊ gel electrophoresis ကာလအတွင်း မည်သည့် bands ကိုမျှ ကျွန်ုပ်တို့ မတွေ့ရှိရပါ။ (ပုံ 5 တွင်မပြထားသောလမ်းများ) နှင့် သက်ဆိုင်သော DPV နှင့် CV အမြင့်ဆုံးရေစီးကြောင်းများသည် NTC အတွက်မျှော်လင့်ထားသည့်ပုံစံများနှင့်ဆင်တူပါသည်။ \(117\,\hbox {bp}\) အပိုင်းအတွက်ရလဒ်များကို နောက်ဆက်တွဲအချက်အလက်များတွင်ပြသထားသည်။ အနှုတ် ထိန်းချုပ်မှုအား PCB အာရုံခံကိရိယာမှ အခမဲ့ MB ၏ စုပ်ယူမှုနှင့် MB ၏ single-stranded primer oligonucleotide နှင့် အပြန်အလှန်အကျိုးသက်ရောက်မှုကြောင့် PCB အာရုံခံကိရိယာမှ electrochemical တုံ့ပြန်မှုကို ဖြစ်ပေါ်စေပါသည်။ ထို့ကြောင့်၊ နမူနာတစ်ခုကို စမ်းသပ်ပြီးတိုင်း၊ အနုတ်လက္ခဏာထိန်းချုပ်မှုကို လုပ်ဆောင်ရမည်ဖြစ်ပြီး၊ စမ်းသပ်နမူနာ၏ peak current ကို အနှုတ်ထိန်းချုပ်မှုမှရရှိသော peak current နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပြီး differential (relative) measurement39,40 ကို ရရှိရန်အတွက် စမ်းသပ်နမူနာကို positive သို့မဟုတ် negative အဖြစ် အမျိုးအစားခွဲခြားရန်။
(က) DPV၊ နှင့် (b) ရေကန်နမူနာများတွင် \(503\,\hbox {bp}\) အပိုင်းအစများ၏ လျှပ်စစ်ဓာတုဗေဒဆိုင်ရာ ထောက်လှမ်းမှုအတွက် CV အမြင့်ဆုံးလျှပ်စီးကြောင်းများ။ စမ်းသပ်နမူနာများကို triplicate ဖြင့် တိုင်းတာခဲ့ပြီး ပုံစံပလိတ်ထိန်းချုပ်မှုမရှိသော (NTC) နှင့် နှိုင်းယှဉ်ကာ၊ အပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှုများ (PC)။
ကျွန်ုပ်တို့၏တွေ့ရှိချက်များသည် မတူညီသော DNA များအတွက် အလျားအနံအမျိုးမျိုးရှိသည့် amplicons အတွက် လျှပ်စစ်ဓာတုအာရုံခံကိရိယာများ၏ စွမ်းဆောင်ရည်ကို ထိခိုက်စေသည့် ကွဲပြားသောယန္တရားများကို UV/Vis spectrophotometer အသုံးပြု၍ အာရုံစူးစိုက်မှုဖြင့် စစ်ဆေးအတည်ပြုပါသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏လေ့လာတွေ့ရှိချက်များသည် \(\approx\) အထိရှည်လျားသော DNA အပိုင်းအစများအထိ ရှည်လျားသောထိုးထွင်းသိမြင်မှုကို ပေါ်လွင်စေပါသည်။ \(500\,\hbox {bp}\) သည် မြင့်မားသော အာရုံခံနိုင်စွမ်းဖြင့် ထောက်လှမ်းနိုင်ပြီး နမူနာထဲတွင် ဆားပါဝင်မှုသည် မြင့်မားသော အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို ထိခိုက်စေသော အာရုံခံနိုင်စွမ်း DNA အာရုံစူးစိုက်မှု မရှိပါက (ရှားရှားပါးပါး \({\hbox {ng}/\upmu \hbox {l}}}\) နှင့်အထက်)။ထို့အပြင်၊ ဆားမထည့်ဘဲ ဂျယ်သန့်စင်ထားသော အမ်ပလီကွန်များနှင့် DPV နှင့် CV တိုင်းတာမှုများတွင် ကန်ရေနမူနာများ ထပ်ထည့်ခြင်းအပါအဝင် မတူညီသောနမူနာများ၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုကို ကျွန်ုပ်တို့ စုံစမ်းစစ်ဆေးခဲ့သည်။နောက်ခံ capacitive current သည် CV တိုင်းတာမှုကိုလည်း သက်ရောက်မှုရှိသောကြောင့် DPV သည် ပိုမိုကောင်းမွန်သော resolution ကိုပေးသည်ကို ကျွန်ုပ်တို့သတိပြုမိပါသည်။
ရှည်လျားသောအပိုင်းအစများကို ချဲ့ထွင်ခြင်းသည် ဗိုင်းရပ်မျိုးရိုးဗီဇ RNA ၏ ခိုင်မာမှုအပေါ် မူတည်ပါသည်။ လေ့လာမှုများစွာအရ ရှည်လျားသောအပိုင်းအစများကို ချဲ့ထွင်ခြင်းသည် ပတ်ဝန်းကျင်တွင် RNA ဆုတ်ယုတ်ခြင်းနှင့် အထီးကျန်နေချိန်အတွင်း ခွဲခြင်းအတွက် အလားအလာကြောင့် အမြဲမထိရောက်ကြောင်း လေ့လာမှုများစွာက ပြသခဲ့သည်။ PEG-based virus အာရုံစူးစိုက်မှုနည်းလမ်းသည် အလူမီနီယမ်ဟိုက်ဒရောဆိုဒ်အခြေခံသည့်ဗိုင်းရပ်စ်ကို အာရုံစူးစိုက်မှုနည်းလမ်းထက် ရေကန်နမူနာများတွင် phage Phi-6 ကို အာရုံစူးစိုက်မှုတွင် ပိုမိုထိရောက်မှုရှိကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည်။ Multiplex PCR ၏ လိုအပ်ချက်ကို ကျော်လွှားရန်အတွက် ရှည်လျားသော DNA အပိုင်းအစများကို ရှာဖွေတွေ့ရှိနိုင်သည် တိုတောင်းသော တင်းပလိတ်များစွာကို ချဲ့ထွင်ရန်နှင့် ဖြတ်ကျော်တိကျမှု ဖြစ်နိုင်ခြေကို လျှော့ချရန်။
ဇီဝနမူနာများ ရှားပါးသောကြောင့် စမ်းသပ်ရန်အတွက် အနည်းဆုံးနမူနာများ လိုအပ်သည့် ဇီဝအာရုံခံကိရိယာကို ဒီဇိုင်းထုတ်ရန် လိုအပ်ပါသည်။ ဤလေ့လာမှုတွင် အသုံးပြုသည့် ENIG PCB လျှပ်ကူးပစ္စည်းသည် \({5}\,{{\upmu \hbox {l}}}\ ) လျှပ်ကူးပစ္စည်း၏ ထိရောက်သောဧရိယာကို ဖုံးအုပ်ရန် စမ်းသပ်ရန်အတွက် နမူနာများ။ ထို့အပြင်၊ တူညီသောလျှပ်ကူးပစ္စည်းကို သန့်ရှင်းရေးလုပ်ပြီး နောက်နမူနာကို ဖြန့်ဝေခြင်းမပြုမီ ပြန်လည်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။ ချဲ့ထွင်ထားသောနမူနာများသည် စျေးမကြီးသော methylene blue မှလွဲ၍ အခြားဓာတုဗေဒပစ္စည်းများ ထပ်ထည့်ရန်မလိုအပ်ပါ။ အသုံးများသော ဓာတုပစ္စည်းဖြစ်သည်။ လျှပ်စစ်ပစ္စည်းတစ်ခုစီကို ထုတ်လုပ်ရန် $0.55 (သို့မဟုတ် INR 40) ခန့် ကုန်ကျသောကြောင့်၊ ဤဇီဝအာရုံခံကိရိယာသည် ရှိပြီးသား ထောက်လှမ်းမှုနည်းပညာများအတွက် ကုန်ကျစရိတ်သက်သာသော အစားထိုးတစ်ခုဖြစ်သည်။ ဇယား 2 သည် စာပေတွင် ကြာမြင့်စွာဖော်ပြထားသော အခြားအာရုံခံကိရိယာများနှင့် ဤလုပ်ဆောင်မှုကို နှိုင်းယှဉ်ပြသထားသည်။ မျိုးကွဲနမူနာများတွင် DNA အပိုင်းအစများ။
MB-based electrochemical detection protocols များသည် PCR ၏ တိကျမှုကို အားကိုးသောကြောင့်၊ ဤနည်းလမ်း၏ အဓိက ကန့်သတ်ချက်မှာ ရေဆိုးနှင့် ကန်ရေကဲ့သို့ ကွဲပြားသော နမူနာများတွင် သီးခြားမဟုတ်သော အသံချဲ့စက်အတွက် အလားအလာများ သို့မဟုတ် သန့်စင်မှုနည်းသော primers များကို အသုံးပြုခြင်း ဖြစ်သည်။ မွမ်းမံထားသော ENIG PCB လျှပ်ကူးပစ္စည်းများကို အသုံးပြု၍ မွမ်းမံထားသော မွမ်းမံထားသော ENIG PCB လျှပ်ကူးပစ္စည်းများကို အသုံးပြု၍ မသန့်စင်ထားသော PCR ထုတ်ကုန်များ၏ DNA ရှာဖွေခြင်းအတွက် လျှပ်စစ်ဓာတုဗေဒဆိုင်ရာ ထောက်လှမ်းမှုနည်းလမ်းများ၊ အသုံးမပြုသော dNTPs နှင့် primers များမှ မိတ်ဆက်ထားသော အမှားများကို ပိုမိုနားလည်ရန်နှင့် တုံ့ပြန်မှုအခြေအနေများနှင့် ဆန်းစစ်မှုဆိုင်ရာ ပရိုတိုကောများကို အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် လုပ်ဆောင်ရန် လိုအပ်ပါသည်။ pH၊ အပူချိန်၊ နှင့် ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ ကန့်သတ်ချက်များကဲ့သို့သော ဓာတုဗေဒဆိုင်ရာ ကန့်သတ်ချက်များ ရေနမူနာ၏ အောက်ဆီဂျင် လိုအပ်ချက် (BOD) ကိုလည်း တိုင်းတာမှု၏ တိကျမှုကို မြှင့်တင်ရန်အတွက် တိုင်းတာရန် လိုအပ်ပါသည်။
နိဂုံးချုပ်အနေဖြင့်၊ ပတ်ဝန်းကျင် (အိုင်ရေ)နမူနာများတွင် ဗိုင်းရပ်စ်ရှာဖွေခြင်းအတွက် ကုန်ကျစရိတ်နည်းသော လျှပ်စစ်ဓာတု ENIG PCB အာရုံခံကိရိယာကို ကျွန်ုပ်တို့ အဆိုပြုပါသည်။ အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို ထိန်းသိမ်းရန် cryogenic သိုလှောင်မှုလိုအပ်သော DNA အာရုံခံစနစ်အတွက် ရွှေ့ပြောင်းနိုင်သော oligonucleotide လျှပ်ကူးပစ္စည်း သို့မဟုတ် စိတ်ကြိုက်အလွှာများနှင့်မတူဘဲ၊ 53,54 ကျွန်ုပ်တို့၏နည်းပညာသည် မွမ်းမံထားသော PCB ကို အသုံးပြုပါသည်။ သက်တမ်းပိုကြာပြီး တိကျသောသိုလှောင်မှုလိုအပ်ချက်မရှိသော လျှပ်ကူးပစ္စည်းများသည် LMICs တွင်အသုံးပြုထားသော အလိုအလျောက်နမူနာလုပ်ဆောင်ခြင်းနှင့်အတူ တိုင်းတာခြင်းဖြေရှင်းချက်ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုအတွက် သင့်လျော်ပါသည်။ Biosensor သည် ပစ်မှတ် amplicons များကို လျင်မြန်စွာသိရှိနိုင်စေရန် ဈေးမကြီးသော DNA-intercalating redox ဆိုးဆေး (MB) ကို အသုံးပြုပါသည်။ အတိအကျမဟုတ်သော ချဲ့ထွင်မှု ပတ်ဝန်းကျင်နမူနာများတွင် အသုံးများသော MBs များကို တစ်ခုတည်း-နှင့် ကြိုးနှစ်ထပ်ချည်နှောင်ထားသော oligonucleotides နှင့် မသက်ဆိုင်သောကြောင့် ဤအာရုံခံနည်းလမ်း၏ တိကျမှုကို လျော့နည်းစေသည်။ ထို့ကြောင့်၊ ဤစမ်းသပ်မှု၏ တိကျသေချာမှုသည် primers နှင့် PCR တုံ့ပြန်မှုအခြေအနေများအပေါ်တွင် မူတည်ပါသည်။ ထို့အပြင် CV နှင့် စမ်းသပ်ထားသောနမူနာများမှရရှိသော DPV အမြင့်ဆုံးလျှပ်စီးကြောင်းများကို စမ်းသပ်မှုတစ်ခုစီအတွက် အနုတ်လက္ခဏာထိန်းချုပ်မှု (NTC) မှရရှိသော တုံ့ပြန်မှုများနှင့် ဆက်စပ်၍ အဓိပ္ပာယ်ပြန်ဆိုရပါမည်။ ဤလုပ်ငန်းတွင်တင်ပြထားသော လျှပ်စစ်ဓာတုအာရုံခံကိရိယာဒီဇိုင်းများနှင့် နည်းလမ်းများကို အပြည့်အဝအလိုအလျောက်လုပ်ဆောင်ရန်နှင့် နိမ့်ပါးစေရန် autosamplers များနှင့် ပေါင်းစပ်နိုင်သည်။ - နမူနာများကို စုဆောင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာနိုင်ပြီး ရလဒ်များကို ဓာတ်ခွဲခန်းသို့ ကြိုးမဲ့စနစ်ဖြင့် ပြန်ပို့နိုင်သည့် ကုန်ကျစရိတ်ဖြေရှင်းချက်။
Cashdollar, J. & Wymer, L. ရေနမူနာများမှ ဗိုင်းရပ်စ်များ၏ ကနဦးအာရုံစူးစိုက်မှုဆိုင်ရာ နည်းလမ်းများ- မကြာသေးမီက လေ့လာမှုများ၏ ပြန်လည်သုံးသပ်ခြင်းနှင့် မက်တာ-ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းApplication.microorganism.115၊ pp. 1-11 (2013)။
Gall, AM, Mariñas, BJ, Lu, Y. & Shisler, JL ရေတွင်ရှိသော ဗိုင်းရပ်စ်များ- ဘေးကင်းသော သောက်သုံးရေအတွက် အတားအဆီးများ။PLoS Pathogens.11, E1004867 (2015)။
Shrestha, S. et al. စရိတ်သက်သာသော နှင့် ဝင်ငွေအလယ်အလတ်ရှိသော နိုင်ငံများတွင် COVID-19 ၏ ကြီးမားသော ကုန်ကျစရိတ်-ထိရောက်မှု စောင့်ကြည့်ရေး အတွက် ရေဆိုးကူးစက်ရောဂါဗေဒ- စိန်ခေါ်မှုများနှင့် အခွင့်အလမ်းများ။ Water 13, 2897 (2021)။
Palecek, E. & Bartosik, M. Nucleic acid electrochemistry.Chemical.Rev.112၊ 3427–3481 (2012)။
Tani, A., Thomson, AJ & Butt, JN Methylene blue သည် ရွှေအလွှာပေါ်တွင် ချည်နှောင်ထားသော single- နှင့် double-stranded oligonucleotides ၏ electrochemical ခွဲခြားမှုအဖြစ် ခွဲခြားထားသည်။
Wong၊ EL၊ Erohkin၊ P. & Gooding၊ JJ၊ JJ သည် ရှည်လျားသော အီလက်ထရွန်လွှဲပြောင်းခြင်းဖြင့် DNA ပေါင်းစပ်ခြင်း၏ လျှပ်စစ်ဓာတုကူးပြောင်းခြင်းအတွက် Cation နှင့် Anion Intercalators နှိုင်းယှဉ်ချက်။Electrochemistry.comminicate.6၊ 648–654 (2004)။
Wong၊ EL & Gooding၊ JJ Charge သည် DNA မှတဆင့် လွှဲပြောင်းခြင်း- ရွေးချယ်ထားသော လျှပ်စစ်ဓာတု DNA biosensor.anus.Chemical.78၊ 2138–2144 (2006)။
Fang, TH et al.Real-time PCR microfluidic device သည် တစ်ပြိုင်တည်း လျှပ်စစ်ဓာတု detection.biological sensor.Bioelectronics.24၊ 2131–2136 (2009)။
Win၊ BY et al.Signaling ယန္တရားလေ့လာမှုနှင့် methylene blue ၏အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုကိုအခြေခံ၍ electrochemical real-time PCR စနစ်၏စွမ်းဆောင်ရည်ကိုအတည်ပြုခြင်း။ Analyst 136၊ 1573–1579 (2011)။
Ramirez-Chavarria၊ RG et al.Loop-mediated isothermal amplification-based electrochemical sensors.J.J.Environment.Chemical.Britain.10၊ 107488 (2022)။
Kumar, M. et al. SARS-CoV-2 amplicons ၏ လျှပ်စစ်ဓာတ်အာရုံခံခြင်း PCB လျှပ်ကူးပစ္စည်း။ အာရုံခံကိရိယာသည် အသက်ဝင်ပါသည်။B Chemistry.343၊ 130169 (2021)။
Kitamura, K., Sadamasu, K., Muramatsu, M. & Yoshida, H. wastewater.science.general environment.763, 144587 (2021) ၏ အစိုင်အခဲအပိုင်းများတွင် SARS-CoV-2 RNA ကို ထိရောက်စွာ ထောက်လှမ်းခြင်း။
Alygizakis, N. et al.Analytical Methods in SARS-CoV-2 Detection for Wastewater- Protocol and Future Perspectives.TraC ခေတ်စားနေသော anal.Chemical.134, 116125 (2020)။
Fedorenko, A., Grinberg, M., Orevi, T. & Kashtan, N. ထုပ်ပိုးထားသော ဘက်တီးရီးယားပိုးPhy6 (SARS-CoV-2 အတွက် ကိုယ်စား ပေးသူ) သည် အငွေ့ပြန်သွားသော တံတွေးအမှုန်အမွှားများ ဖန်သားပြင်ပေါ်ရှိ အငွေ့ပြန်ထားသော တံတွေးအမှုန်အမွှားများ၁၀၊ ၁–၁၀ (၂၀၂၀)။
Dey, R., Dlusskaya, E. & Ashbolt, NJ သည် SARS-CoV-2 အငှားကိုယ်ဝန်ဆောင် (Phi6) ၏ လွတ်လွတ်လပ်လပ် အသက်ရှင်နေသော amoeba.J.ရေကျန်းမာရေး ၂၀၊ ၈၃ (၂၀၂၁)။
Mindich, L. နှစ်ထပ်သောင်တင်ထားသော RNA ဘက်တီးရီးယားပိုးများ၏ မျိုးရိုးဗီဇအပိုင်းသုံးပိုင်း၏ တိကျသောထုပ်ပိုးမှု\(\varphi\)6.microorganism.Moore.biology.Rev.63၊ 149–160 (1999)။
Pirttimaa၊ MJ & Bamford၊ DH RNA phage\(\varphi\)6 ထုပ်ပိုးမှု ဒေသ၏ အလယ်တန်းဖွဲ့စည်းပုံ။RNA 6၊ 880–889 (2000)။
Bonilla, N. et al.Phages on the Tap - bacteriophages ၏ ဓာတ်ခွဲခန်းစတော့များကို ပြင်ဆင်ရန်အတွက် မြန်ဆန်ပြီး ထိရောက်သော ပရိုတိုကော။PeerJ 4, e2261 (2016)။
စာတိုက်အချိန်- မေလ ၂၇-၂၀၂၂