ಪಿಸಿಬಿ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ವೈರಲ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸೆನ್ಸಿಂಗ್‌ಗೆ ಉದ್ದವಾದ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳು ಉತ್ತಮ ಸಂವೇದನೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತವೆ.

Nature.com ಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಿದ್ದಕ್ಕಾಗಿ ಧನ್ಯವಾದಗಳು.ನೀವು ಬಳಸುತ್ತಿರುವ ಬ್ರೌಸರ್ ಆವೃತ್ತಿಯು CSS ಗೆ ಸೀಮಿತ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಉತ್ತಮ ಅನುಭವಕ್ಕಾಗಿ, ನೀವು ನವೀಕರಿಸಿದ ಬ್ರೌಸರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ (ಅಥವಾ Internet Explorer ನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ಆಫ್ ಮಾಡಿ). ಈ ಮಧ್ಯೆ, ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಮುಂದುವರಿದ ಬೆಂಬಲ, ನಾವು ಶೈಲಿಗಳು ಮತ್ತು ಜಾವಾಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತೇವೆ.
COVID-19 ಸಾಂಕ್ರಾಮಿಕ ರೋಗದ ಆರಂಭದಿಂದಲೂ ಪರಿಸರ ಮಾದರಿಗಳ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆಯ ಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆಯು ಹೆಚ್ಚು ಮೆಚ್ಚುಗೆ ಪಡೆದಿದೆ ಮತ್ತು qPCR-ಆಧಾರಿತ ತಂತ್ರಗಳು ದುಬಾರಿಯಾಗಿದ್ದರೂ, ಕೆಲವು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣಾ ಪ್ರಯತ್ನಗಳನ್ನು ಚಿನ್ನದ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತಿದೆ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ DNA ಬಯೋಸೆನ್ಸರ್‌ಗಳು ಸಂಭಾವ್ಯ ವೆಚ್ಚ-ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸಬಹುದು. ಕಡಿಮೆ ಮತ್ತು ಮಧ್ಯಮ-ಆದಾಯದ ದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ಪರಿಸರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲು ಪರಿಹಾರವಾಗಿದೆ. ಈ ಕೆಲಸದಲ್ಲಿ, ENIG ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮೊನಚಾದ ಸರೋವರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ (SARS-CoV-2 ಗಾಗಿ ಜನಪ್ರಿಯ ಬಾಡಿಗೆ) ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ Phi6 ಫೇಜ್‌ನಿಂದ ಪಡೆದ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಪತ್ತೆಯನ್ನು ನಾವು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತೇವೆ. ಮೇಲ್ಮೈ ಮಾರ್ಪಾಡು ಇಲ್ಲದೆ PCB ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಲು.ಲಿಂಗ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸಂವೇದಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ವಿಭಿನ್ನ ಉದ್ದಗಳ ಎರಡು DNA ತುಣುಕುಗಳಿಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ನಿರೂಪಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ (\({117}\,\hbox {bp}\) ಮತ್ತು \({503}\,\hbox {bp}\)), ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಮಾಸ್ಟರ್‌ನಲ್ಲಿನ ಲವಣಗಳ ಪರಿಣಾಮವು ಮೀಥಿಲೀನ್ ನೀಲಿ (MB)-ಡಿಎನ್‌ಎ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ. ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕುಗಳ ಉದ್ದವು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಗಣನೀಯವಾಗಿ ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಜೆಲ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣವಿಲ್ಲದೆ ಉದ್ದವಾದ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಈ ಕೆಲಸದಲ್ಲಿ ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ. ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳ ಸ್ಥಳ ಮಾಪನಕ್ಕೆ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.ವೈರಲ್ ಲೋಡ್‌ಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ಪರಿಹಾರವು ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ.
ನೀರಿನ ಮೂಲಕ ಹರಡುವ ಪೋಲಿಯೊ ಮತ್ತು ಹೆಪಟೈಟಿಸ್ ಇ 1 ರ ನೀರಿನ ಮೂಲಕ ಹರಡುವ ಮೊದಲ ಪುರಾವೆಯೊಂದಿಗೆ 1940 ರ ದಶಕದಿಂದಲೂ ನೀರಿನಿಂದ ಹರಡುವ ವೈರಸ್ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಸಾರ್ವಜನಿಕ ಆರೋಗ್ಯದ ಅಪಾಯ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ವಿಶ್ವ ಆರೋಗ್ಯ ಸಂಸ್ಥೆ (WHO) ಮಧ್ಯಮದಿಂದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಆರೋಗ್ಯದ ಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆಯ ಹಲವಾರು ನೀರಿನಿಂದ ಹರಡುವ ವೈರಲ್ ರೋಗಕಾರಕಗಳನ್ನು ವರ್ಗೀಕರಿಸಿದೆ2.ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ವೈರಸ್ ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನಗಳು ಚಿನ್ನದ ಗುಣಮಟ್ಟದ qPCR-ಆಧಾರಿತ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿವೆ, ಅವುಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿವೆ, ಆದರೆ ದುಬಾರಿ ಉಪಕರಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ನುರಿತ ಸಿಬ್ಬಂದಿ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಕಡಿಮೆ ಮತ್ತು ಮಧ್ಯಮ-ಆದಾಯದ ದೇಶಗಳಲ್ಲಿ (LMICs) ಸೀಮಿತ ಸಂಪನ್ಮೂಲಗಳು, ಮಾನವ ಮಾದರಿ ಪರೀಕ್ಷೆಯು ಪರಿಸರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಯ ಮಾನಿಟರಿಂಗ್‌ಗೆ ಪ್ರಾಧಾನ್ಯತೆಯನ್ನು ನೀಡುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಕಡಿಮೆ ಮತ್ತು ಮಧ್ಯಮ-ಆದಾಯದ ದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ನೀರು ಮತ್ತು ತ್ಯಾಜ್ಯನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳ ಸುಸ್ಥಿರ, ನೈಜ-ಸಮಯದ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆಗಾಗಿ ಪರ್ಯಾಯ ಕಡಿಮೆ-ವೆಚ್ಚದ ವಿಧಾನಗಳು ಉದಯೋನ್ಮುಖ ರೋಗ ಏಕಾಏಕಿ ಮುಂಚಿನ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಾಗಿ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ತನ್ಮೂಲಕ ವೈರಸ್ ಸಾಂಕ್ರಾಮಿಕದ ತೀವ್ರ ಸಾಮಾಜಿಕ-ಆರ್ಥಿಕ ಪರಿಣಾಮಗಳಿಂದ ಅವುಗಳನ್ನು ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ. ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳಿಗೆ ಕಡಿಮೆ-ವೆಚ್ಚದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಬಯೋಸೆನ್ಸರ್‌ಗಳು ಈ ಅನಗತ್ಯ ಅಗತ್ಯಕ್ಕೆ ಭರವಸೆಯ ಸಂಭಾವ್ಯ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಒದಗಿಸಬಹುದು. ಈ ಅನೇಕ ಡಿಎನ್‌ಎ ಜೈವಿಕ ಸಂವೇದಕಗಳು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ನಲ್ಲಿ ಪೂರಕವಾದ ಡಿಎನ್‌ಎ ಎಳೆಗಳು ನಿಶ್ಚಲವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಎಂಬ ಅಂಶದಿಂದ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ. ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯ ಅನುಕ್ರಮವು ಇದ್ದಾಗ ಮೇಲ್ಮೈ ಮತ್ತು ಹೈಬ್ರಿಡೈಸ್ ಮಾಡಿ. ಇದನ್ನು ನಂತರ ಪೊಟ್ಯಾಸಿಯಮ್ ಕಬ್ಬಿಣ/ಫೆರೋಸೈನೈಡ್‌ನಂತಹ ರೆಡಾಕ್ಸ್ ಮಧ್ಯವರ್ತಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿವಿಧ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ತಂತ್ರಗಳ ಮೂಲಕ ಸಂಕೇತವಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಬಹುದು. ಮೆಥಿಲೀನ್ ನೀಲಿ (MB) ಅಂತಹ ಒಂದು ರೆಡಾಕ್ಸ್-ಸಕ್ರಿಯ ಅಣುವಾಗಿದೆ. ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ DNA5,6 ಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಅನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಬಂಧದ ಜೊತೆಗೆ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ (ಡಿಎಸ್‌ಡಿಎನ್‌ಎ) ಆಗಿ ಇಂಟರ್‌ಕಲೇಟ್ ಮಾಡಲು ವರದಿಯಾಗಿದೆ. ಎಂಬಿ-ಡಿಎನ್‌ಎ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಲು MB ಗಳ ಇಂಟರ್‌ಕಲೇಟಿಂಗ್ ಸ್ವಭಾವವು ಅವುಗಳನ್ನು ಹಲವಾರು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯಲ್ಲಿ ರೆಡಾಕ್ಸ್ ಮಧ್ಯವರ್ತಿಗಳಾಗಿ ಜನಪ್ರಿಯ ಆಯ್ಕೆಯನ್ನಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಸಂವೇದಕ ಸಂರಚನೆಗಳು5,6,7,8,9.ಎಂಬಿಯಿಂದ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಅಂತರ್ನಿವೇಶನವು ಅನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿದ್ದರೂ, ಮತ್ತು ಈ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸಂವೇದಕದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು ಪಿಸಿಆರ್ ಅಥವಾ ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಬಳಸುವ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಶುದ್ಧತೆಯ ಮೇಲೆ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ನೈಜ ಕಾರ್ಯಗತಗೊಳಿಸಲು ಸೂಕ್ತವಾಗಿರುತ್ತದೆ -ಟೈಮ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್-ಆಧಾರಿತ qPCR ಅಥವಾ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಐಸೋಥರ್ಮಲ್ ವರ್ಧನೆ ಡಿಎನ್‌ಎ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಮಾಪನಕ್ಕೆ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿ 9 .ಅಂತಹ ಒಂದು ಅನುಷ್ಠಾನದಲ್ಲಿ, ವಾನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು. ಚಿನ್ನದ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳ ಮೇಲ್ಮೈಯನ್ನು ನೈಜ-ಸಮಯಕ್ಕಾಗಿ 6-ಮರ್ಕಾಪ್ಟೊ-1-ಹೆಕ್ಸಾನಾಲ್ (MCH) ನೊಂದಿಗೆ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯಲ್ ಪಲ್ಸ್ ವೋಲ್ಟಾಮೆಟ್ರಿ (DPV) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು MB ಯೊಂದಿಗೆ PCR ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳ ಮಾಪನ 9. ಇತರ ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ, Ramirez et al. ಸ್ಕ್ರೀನ್-ಪ್ರಿಂಟೆಡ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ MB ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು RT-LAMP ಕ್ರಿಯೆಯ ಮೂಲಕ ತ್ಯಾಜ್ಯನೀರಿನಲ್ಲಿ SARS-CoV-2 ಅನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವುದು. ಪ್ಲಾಟಿನಂ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳು ಸಹ ಕ್ರಿಯೆಗಳ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳನ್ನು ವಿದ್ಯುದ್ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ಮೈಕ್ರೋಫ್ಲೂಯಿಡಿಕ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ಲಾಟ್‌ಫಾರ್ಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಸಿಟು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ 8 .ಈ ಎಲ್ಲಾ ಅಧ್ಯಯನಗಳಿಗೆ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳ ಮೇಲ್ಮೈ ಮಾರ್ಪಾಡು ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ, ಈ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳ ಸ್ಥಿರತೆಗೆ ವಿಶೇಷ ಶೇಖರಣಾ ಅಗತ್ಯತೆಗಳ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ಉತ್ಪಾದನೆ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ವೆಚ್ಚವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಸರೋವರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರೀಕೃತ ವೈರಲ್ ಕಣಗಳಿಂದ ಪಡೆದ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ಕೆಲಸದ ಹರಿವಿನ ಸ್ಕೀಮ್ಯಾಟಿಕ್.
ನಾವು ಇತ್ತೀಚಿಗೆ SARS-CoV-2 ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸೆನ್ಸಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ-ವೆಚ್ಚದ ಪ್ರಿಂಟೆಡ್ ಸರ್ಕ್ಯೂಟ್ ಬೋರ್ಡ್ (PCB) ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ DPV ಮತ್ತು ಸೈಕ್ಲಿಕ್ ವೋಲ್ಟಾಮೆಟ್ರಿ (CV) ಆಧಾರಿತ ಎಮ್‌ಬಿ-ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾಂಪ್ಲೆಕ್ಸ್‌ಗಳ ಹೊರಹೀರುವಿಕೆಯಿಂದ ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಮಾರ್ಪಡಿಸದ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಪ್ರಸ್ತುತ 11.ಉದ್ದವಾದ DNA ತುಣುಕುಗಳು (N1-N2, \({943}\, \hbox) CDC-ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಿದ N1 ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಮತ್ತು N2 ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಚಿಕ್ಕದಾದ ತುಣುಕುಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ರಚಿಸಲಾಗಿದೆ {bp}\)) ಸಂವೇದಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮ ರೇಖಾತ್ಮಕತೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ವರದಿ ಮಾಡುತ್ತೇವೆ (N1, \(72\,\hbox {bp}\)) N1 ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಮತ್ತು N1 ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಸೆಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ರಚಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್-ಮುಕ್ತ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಲಾದ DNA ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವರದಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. SARS-CoV ಅನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ವೇದಿಕೆಯನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಸಿಮ್ಯುಲೇಟೆಡ್ ತ್ಯಾಜ್ಯನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ -2 ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳು (SARS-CoV-2 RNA ಯೊಂದಿಗೆ ಒಟ್ಟು RNA ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸ್ಪೈಕಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ). ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ ಮತ್ತು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಸಂಸ್ಕರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕತ್ತರಿಸುವಿಕೆಗೆ ಒಳಗಾಗುವುದರಿಂದ, 12,13 ಈ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಮಾದರಿಯೊಂದಿಗೆ ಉದ್ದವಾದ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ವರ್ಧಿಸುವುದು ಕಷ್ಟ. ಆದ್ದರಿಂದ, ತ್ಯಾಜ್ಯನೀರಿನಲ್ಲಿ SARS-CoV-2 ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ನ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸೆನ್ಸಿಂಗ್‌ನ ಪ್ರದರ್ಶನವು ಚಿಕ್ಕದಾದ \(72\,\hbox {bp}\) N1 ತುಣುಕಿಗೆ ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ.
ಈ ಕೆಲಸದಲ್ಲಿ, ಸರೋವರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ (Fig. 1) ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಿದ ಮತ್ತು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ ಫೇಜ್ Phi6 ನ ENIG PCB-ಆಧಾರಿತ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸೆನ್ಸಿಂಗ್‌ನ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ನಾವು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ. ಲಿಪಿಡ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಮತ್ತು ಸ್ಪೈಕ್ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಅನ್ನು ಸಹ ಹೊಂದಿದೆ. ಈ ಕಾರಣಗಳಿಗಾಗಿ, ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯೊಫೇಜ್ Phi6 SARS-CoV-2 ಮತ್ತು ಇತರ ಸುತ್ತುವರಿದ ರೋಗಕಾರಕ RNA ವೈರಸ್‌ಗಳಿಗೆ ಜನಪ್ರಿಯ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿದೆ. ಪಿಸಿಆರ್ 117 ಮತ್ತು 503 ಬೇಸ್ ಜೋಡಿಗಳ ಎರಡು ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು \,\hbox {bp}\) ಮತ್ತು \(503 \,\hbox {bp}\)), ಲಭ್ಯವಿರುವ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸಂವೇದಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ವ್ಯವಸ್ಥಿತವಾಗಿ ವ್ಯಾಪಕ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ (\({10}\,{) \hbox {pg}/{\upmu \hbox {l}}}\) ನಿಂದ \({20}\, {\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\)) ನಲ್ಲಿ ಎರಡೂ ತುಣುಕುಗಳಿಗೆ MB ಯ ಉಪಸ್ಥಿತಿ, ಸಂವೇದಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಮೇಲೆ ಉಪ್ಪಿನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಮಾಪನಗಳಿಂದ ನಿರೂಪಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಅಡ್ಡ-ಮೌಲ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ಕೆಲಸದ ಮುಖ್ಯ ಕೊಡುಗೆಗಳು ಕೆಳಕಂಡಂತಿವೆ:
DNA ತುಣುಕು ಉದ್ದ ಮತ್ತು ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಉಪ್ಪಿನ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯು ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಬಲವಾಗಿ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ಡಿಎನ್‌ಎ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಉದ್ದವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ಎಮ್‌ಬಿ, ಡಿಎನ್‌ಎ ಮತ್ತು ವೋಲ್ಟಾಮೆಟ್ರಿಕ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಸಂವೇದಕಗಳ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ವಿಭಿನ್ನ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಉದ್ದವಾದ ತುಣುಕುಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ, ಆದರೂ ಉಪ್ಪು ನಡುವಿನ ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳ ಮೇಲೆ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ. MB ಮತ್ತು DNA.
DNA ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಮಾರ್ಪಡಿಸದ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳಲ್ಲಿ MB-DNA ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ MB-DNA ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ವಿಭಿನ್ನ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು DNA ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತೇವೆ. {l}}}\), ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಕರೆಂಟ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ನಲ್ಲಿನ MB-DNA ಯ ಹೊರಹೀರುವಿಕೆಯಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಆದರೆ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ DNA ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ, ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಕರೆಂಟ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ರೆಡಾಕ್ಸ್‌ನ ಸ್ಟೆರಿಕ್ ಪ್ರತಿಬಂಧದಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಡಿಎನ್‌ಎ ಬೇಸ್ ಜೋಡಿಗಳ ನಡುವೆ ಎಂಬಿ ಅಳವಡಿಕೆಯ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ಚಟುವಟಿಕೆ.
ಸರೋವರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿನ ವೈರಲ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳ ENIG PCB-ಆಧಾರಿತ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸೆನ್ಸಿಂಗ್, Phi6-ಸೇರಿಸಿದ \(503\,\hbox {bp}\) ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕುಗಳ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಪತ್ತೆಯಿಂದ ಪೊವೈ ಸರೋವರ, IIT ಮುಂಬೈ ಕ್ಯಾಂಪಸ್‌ನಿಂದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಪಡೆದ ಅವಲೋಕನಗಳನ್ನು ಮೌಲ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಫಲಿತಾಂಶ ಫೇಜ್.
ಅನುಷ್ಠಾನದ ಕಡಿಮೆ ವೆಚ್ಚ ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ಮಾನಿಟರಿಂಗ್ ಸಿಸ್ಟಮ್‌ಗಳು, ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳು ಅಥವಾ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಶೆಲ್ಫ್ ಜೀವಿತಾವಧಿಯೊಂದಿಗೆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಆಪ್ಟಾಮರ್‌ಗಳಿಗೆ ಏಕೀಕರಣದ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ.
ಫೇಜ್ ಫೈ6 ಎಂಬುದು ಸೈಟೊವಿರಿಡೆ ಕುಟುಂಬದ ಸುತ್ತುವರಿದ ಡಿಎಸ್‌ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ವೈರಸ್ ಆಗಿದ್ದು ಅದು ಸ್ಯೂಡೋಮೊನಾಸ್ ಸಿರಿಂಗೆಯನ್ನು ಸೋಂಕು ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಫಿ6 ಫೇಜ್‌ನ ಜಿನೋಮ್ 3 ತುಣುಕುಗಳ ರೂಪದಲ್ಲಿ ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿದೆ: S (\(2.95\,\hbox {Kb}\)), M (\(4.07) \,\hbox {Kb}\)) ಮತ್ತು L (\ (6.37\ ,\hbox{Kb}\)) 16,17. Phi6 ಫೇಜ್ ರೋಗಕಾರಕವಲ್ಲದ BSL-1 ಸ್ಯೂಡೋಮೊನಸ್ ಸ್ಟ್ರೈನ್ ಅನ್ನು ಸೋಂಕು ಮಾಡುವುದರಿಂದ, ಅದನ್ನು ಬಳಸಲು ಸುರಕ್ಷಿತವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಸುಲಭವಾಗಿ ಬೆಳೆಸಬಹುದು.ಫೇಜ್ ಫಿ6 ಮತ್ತು ಅದರ ಹೋಸ್ಟ್ ಸ್ಯೂಡೋಮೊನಾಸ್ ಸಿರಿಂಗೇಗಳನ್ನು ಫೆಲಿಕ್ಸ್ ಡಿ'ಹೆರೆಲ್ಲೆ ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಸೆಂಟರ್ ಫಾರ್ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ವೈರಸ್‌ಗಳಿಂದ ಖರೀದಿಸಲಾಗಿದೆ, ಲಾವಲ್ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯ, ಕೆನಡಾ (ಉಲ್ಲೇಖ ಕೇಂದ್ರದ ಕ್ಯಾಟಲಾಗ್ ಸಂಖ್ಯೆಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ HER-102 ಮತ್ತು HER-1102) .Phi6 ಫೇಜ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಹೋಸ್ಟ್ ಅನ್ನು ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಸೆಂಟರ್ ನಿರ್ದೇಶಿಸಿದಂತೆ ಪುನರುಜ್ಜೀವನಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ. \(\ಸುಮಾರು 10^{12}\,{\hbox {PFU}/\hbox { ಜೊತೆ ಅಂತಿಮ ಟೈಟರ್‌ಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಪ್ಲೇಟ್ ಲೈಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಎಲುಷನ್ ಮೂಲಕ Phi6 ಅನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ ml}}\) (ಪ್ಲೇಕ್ ರೂಪಿಸುವ ಘಟಕಗಳು/ ಮಿಲಿಲೀಟರ್‌ಗಳು). ಉತ್ಪಾದಕರ ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ GenElute™ ಯೂನಿವರ್ಸಲ್ ಟೋಟಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಿಟ್ (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಫೇಜ್ ಕಣಗಳಿಂದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗಿದೆ. ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಫೇಜ್ ಫಿ6 ಅಮಾನತು\({ 100}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) ಅನ್ನು ಲೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಸ್ಪಿನ್ ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ಲೋಡ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ರಾಳದ ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ಬಂಧಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ನಂತರ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಎಲುಷನ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಹೊರಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ \({ 50}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) ಕಿಟ್‌ನಿಂದ ಒದಗಿಸಲಾಗಿದೆ. \(260\,\hbox {nm}\) ನಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೂಲಕ RNA ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅಂದಾಜು ಮಾಡಿ. RNA ಅನ್ನು \ ನಲ್ಲಿ ಆಲ್ಕೋಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ. ({-80}\,{^{\circ }\hbox {C}}\) ಮುಂದಿನ ಬಳಕೆಯವರೆಗೆ.\({2}\,{\upmu \hbox {g}}\) iScript cDNA ಸಿಂಥೆಸಿಸ್ ಕಿಟ್ (ಬಯೋ -Rad Laboratories) ಅನ್ನು ತಯಾರಕರ ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ cDNA ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, cDNA ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು 3 ಹಂತಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ: \({25}\,{^{\circ }\hbox {C}}\ )\({5}\,{\hbox {min} }\) , \({46}\,{^{\circ ನಲ್ಲಿ \({20}\,{\hbox {min}}\) ನ ಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರತಿಲೇಖನ }\hbox {C}}\), ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ರೆಕಾರ್ಡರ್ \({95}\,{^{\circ }\hbox {C}}\) ನಲ್ಲಿ \({1}\,{\hbox {min) }}\).1% ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಚಲಾಯಿಸಿದಾಗ, cDNA ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಮೂರು RNA ತುಣುಕುಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಮೂರು ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ (ಡೇಟಾವನ್ನು ತೋರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ). 117 ಮತ್ತು 503 bp ಉದ್ದದ ಎರಡು DNA ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು ಕೆಳಗಿನ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ, miniPCR® mini8 ಥರ್ಮಲ್ ಸೈಕ್ಲರ್‌ನಲ್ಲಿ PCR ಗಾಗಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ cDNA ಅನ್ನು ಬಳಸುವುದು:
\(117\,\hbox {bp}\) ಮತ್ತು \(503\,\hbox {bp}\) ಗಾಗಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು M ವಿಭಾಗದ 1476-1575 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು L ವಿಭಾಗದ 458-943 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್‌ಗಳಿಗೆ ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ ಆಮ್ಲ .ಎಲ್ಲಾ ವರ್ಧಿತ ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು 1% ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ವರ್ಧಿತ ಗುರಿಯ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಜಿನೆಜೆಟ್ ಜೆಲ್ ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಕ್ಷನ್ ಕಿಟ್ (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್) ಬಳಸಿ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಯಿತು.
IIT ಮುಂಬೈ ಕ್ಯಾಂಪಸ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಸರೋವರವನ್ನು (ಪೊವೈ ಲೇಕ್, ಪೊವೈ, ಮುಂಬೈ) ಫೇಜ್ ಕಣಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಸರೋವರದ ನೀರನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು \({5}\,{\upmu \hbox {m}}\) ಪೊರೆಯ ಮೂಲಕ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಅಮಾನತುಗೊಳಿಸಿದ ಕಣಗಳು, ತದನಂತರ Phi6 ಫೇಜ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು. \({1}\,{\hbox {ml}}\) \(10^{6}\,{\hbox {PFU}/\hbox {ml}} ಸೇರಿಸಿ \) ಗೆ \( {100}\ ,{\hbox {ml}}\) ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿದ ಸರೋವರದ ನೀರು, \({4}\,{^{\circle}\hbox {C}}\).ಒಂದು ಸಣ್ಣ ಆಲ್ಕೋಟ್ ಆಗಿತ್ತು ಪ್ಲೇಕ್ ಅಸ್ಸೇ ಮೂಲಕ ವೈರಲ್ ಲೋಡ್ ಮಾಪನಕ್ಕಾಗಿ ಕಾಯ್ದಿರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಮೊನಚಾದ Phi6 ವೈರಸ್ ಕಣಗಳನ್ನು ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಲು ನಾವು ಎರಡು ವಿಭಿನ್ನ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ: (1) ಅಲ್ಯೂಮಿನಿಯಂ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್ ಹೊರಹೀರುವಿಕೆ-ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ವಿಧಾನ, 19 ಪರಿಸರ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಹಲವಾರು ಸುತ್ತುವರಿದ RNA ವೈರಸ್‌ಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಗಾಗಿ ಮೌಲ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು (2) ) ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್ (PEG) ಆಧಾರಿತ ವೈರಸ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ವಿಧಾನವನ್ನು ಫ್ಲಡ್ ಮತ್ತು ಇತರರಿಂದ ಅಳವಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ.20 .PEG-ಆಧಾರಿತ ವಿಧಾನದ ಚೇತರಿಕೆಯ ದಕ್ಷತೆಯು ಅಲ್ಯೂಮಿನಿಯಂ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್ ವಿಧಾನಕ್ಕಿಂತ ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದ್ದರಿಂದ, ಸರೋವರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ Phi6 ಕಣಗಳನ್ನು ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಲು PEG-ಆಧಾರಿತ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.
PEG ವಿಧಾನವನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ: 8 % PEG 8000 ಮತ್ತು \(0.2\,\hbox {M} \) \( PEG 8000 ಮತ್ತು \(\hbox {NaCl}\) ಅನ್ನು Phi6-ಸ್ಪೈಕ್ಡ್ ಸರೋವರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ. \ hbox {NaCl}\).Samples incubated on a shaker\({4}\,{^{\circ }\hbox {C}}\)\({4}\,{\hbox {h}}\ ), ನಂತರ \(4700 \,\hbox {g}\) ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ \({45}\,{\hbox {min}}\).ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ತ್ಯಜಿಸಿ ಮತ್ತು \({1}\, ನಲ್ಲಿ ಪೆಲೆಟ್ ಅನ್ನು ಮತ್ತೆ ಅಮಾನತುಗೊಳಿಸಿ {\hbox {ml}}\) ಅದೇ ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್‌ನಲ್ಲಿ. ಎಲ್ಲಾ ಸ್ಪೈಕಿಂಗ್ ಮತ್ತು ವೈರಸ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಮೂರು ಬಾರಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಏಕಾಗ್ರತೆಯ ನಂತರ, ಪ್ಲೇಕ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಮೂಲಕ ಚೇತರಿಕೆಯ ದಕ್ಷತೆಯ ಮಾಪನಕ್ಕಾಗಿ ಒಂದು ಸಣ್ಣ ಆಲ್ಕೋಟ್ ಅನ್ನು ಕಾಯ್ದಿರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಕಿಟ್-ಸರಬರಾಜಾದ ಎಲುಷನ್ ಬಫರ್\({40}\,{\upmu \hbox {l}}\).ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಮಾದರಿಯಿಂದ ಮಾದರಿಗೆ ತ್ರಿವಳಿಗಳಲ್ಲಿ ಬದಲಾಗುವುದರಿಂದ, \({2}\,{\upmu \ RNAಯ hbox {l}}\) ಅನ್ನು ಅದರ ಸಾಂದ್ರತೆಯ cDNA ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಿಸದೆ ಎಲ್ಲಾ ಮೂರಕ್ಕೂ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. cDNA ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗಿದೆ.\({1}\,{\upmu \hbox {l}}\) cDNA \(117\,\hbox {bp}\) ಮತ್ತು \(503\,\hbox { ಅನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು \({20}\,{\upmu \hbox {l}}\) PCR ಗಾಗಿ 35 ಚಕ್ರಗಳಿಗೆ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ bp}\) ತುಣುಕುಗಳು.ಈ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು "1:1″ ಎಂದು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಂದರೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸದೆ. ಯಾವುದೇ-ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು (NTC) ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಫೇಜ್‌ನಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಬಳಸಿ ಸಿಡಿಎನ್‌ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ. ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ (PC) ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ. ಸ್ಟ್ರಾಟಜೀನ್ Mx3000P RT-PCR ಉಪಕರಣದಲ್ಲಿ ಕ್ವಾಂಟಿಟೇಟಿವ್ PCR (qPCR) ಅನ್ನು ಬ್ರಿಲಿಯಂಟ್ III ಅಲ್ಟ್ರಾ-ಫಾಸ್ಟ್ SYBR ಗ್ರೀನ್ ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಕ್ಸ್ (ಎಜಿಲೆಂಟ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್) ಬಳಸಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ ಸೈಕಲ್ ಥ್ರೆಶೋಲ್ಡ್ (Ct) ಅನ್ನು ದಾಖಲಿಸಲಾಗಿದೆ. ಜೊತೆಗೆ, ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳು \({1}\,{\upmu \hbox {l}}\) ಅನ್ನು ಸಿಡಿಎನ್‌ಎ ಬಳಸಿ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಲಾದ ಸರೋವರದ ನೀರಿನಲ್ಲಿ 1:100 ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ \({20}\,{\upmu \hbox {l}}\) PCR 35 ಚಕ್ರಗಳಿಗೆ. ಈ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು “1:100″ ಎಂದು ನಿರೂಪಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಚಿನ್ನದ ಲೇಪನದ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೇ ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿರುವ ಕಡಿಮೆ-ವೆಚ್ಚದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಲೆಸ್ ನಿಕಲ್ ಇಮ್ಮರ್ಶನ್ ಗೋಲ್ಡ್ (ENIG) ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು PCB ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಗಿದೆ.ENIG PCB ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್ ವಿಶೇಷಣಗಳನ್ನು ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಕೆಲಸದಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ11. ENIG PCB ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳಿಗಾಗಿ, ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್ ಶುಚಿಗೊಳಿಸುವ ವಿಧಾನಗಳು ಪಿರಾನ್ಹಾ ದ್ರಾವಣ ಅಥವಾ ಸಲ್ಫ್ಯೂರಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ ವೋಲ್ಟಾಮೆಟ್ರಿಯನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ ಏಕೆಂದರೆ ಅವುಗಳು ತೆಳುವಾದ ಚಿನ್ನದ ಪದರದ ಸಿಪ್ಪೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು (ದಪ್ಪ \(\ಅಂದಾಜು\) \(100\,\hbox {nm }\)) ಮತ್ತು ಪೀಡಿತ ತಾಮ್ರದ ಪದರಗಳನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಬಹುದು ತುಕ್ಕು 21, 22, 23, 24, 25 }\) MB ನಲ್ಲಿ \({4}\,{^{\circ }\hbox {C}}\)\({ 1}\,{\hbox {h}}\) ಸುಲಭ ಅಳವಡಿಕೆಗಾಗಿ. ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಕೆಲಸದಲ್ಲಿ , MB ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವ ಮೂಲಕ ಸಂವೇದಕದ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ ಮತ್ತು ರೇಖಾತ್ಮಕತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ 11 .ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಕೆಲಸದಲ್ಲಿ ವರದಿ ಮಾಡಿದ ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್‌ಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, ನಾವು \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB ಅನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಎಂಬೆಡ್ ಮಾಡಲು ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು. ಅಯಾನಿಕ್ ಅಥವಾ ಕ್ಯಾಟಯಾನಿಕ್ ಇಂಟರ್‌ಕಲೇಟರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ (ಡಿಎಸ್-ಡಿಎನ್‌ಎ) ಯ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಪತ್ತೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಬಹುದು. ಅಯಾನಿಕ್ ಇಂಟರ್‌ಕಲೇಟರ್‌ಗಳು ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಉತ್ತಮ ಆಯ್ಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಪತ್ತೆ ಮಾಡಿದರೂ, ಅವುಗಳಿಗೆ ರಾತ್ರಿಯ ಕಾವು ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಪತ್ತೆ ಸಮಯಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, MB ಯಂತಹ ಕ್ಯಾಟಯಾನಿಕ್ ಇಂಟರ್‌ಕಲೇಟರ್‌ಗಳಿಗೆ ds-DNA6 ನ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ಅಂದಾಜು \({1}\,{\hbox {h}}\) ಕಡಿಮೆ ಕಾವು ಕಾಲಾವಧಿಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿ ಅಳತೆಯು ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಮಾದರಿಯನ್ನು ವಿತರಿಸುವುದನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್\({5}\,{{\upmu \hbox {l}}}\), ನಂತರ ಮತ್ತೊಂದು ಮಾದರಿಯೊಂದಿಗೆ ಮುಂದುವರಿಯುವ ಮೊದಲು IPA-ತೇವಗೊಳಿಸಲಾದ ರಾಗ್‌ನಿಂದ ಸ್ವಚ್ಛಗೊಳಿಸುವುದು.ಒಂದು ಅಳತೆ.ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು 5 ವಿಭಿನ್ನ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ಹೇಳದ ಹೊರತು.DPV ಮತ್ತು CV ಮಾಪನಗಳನ್ನು PalmSens Sensit Smart potentiostat ಬಳಸಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು PSTrace ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಅನ್ನು potentiostat ಕಾನ್ಫಿಗರೇಶನ್ ಮತ್ತು ಗರಿಷ್ಠ ಪ್ರಸ್ತುತ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಡೇಟಾ ಸ್ವಾಧೀನಕ್ಕಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಕೆಳಗಿನ ಸೆಟ್ಟಿಂಗ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ DPV ಮತ್ತು CV ಅಳತೆಗಳಿಗಾಗಿ:
DPV: ಸಮತೋಲನ ಸಮಯ = \(8\,\hbox {s}\), ವೋಲ್ಟೇಜ್ ಹಂತ = \(3\,\hbox {mV}\), ಪಲ್ಸ್ ವೋಲ್ಟೇಜ್ = \(25\,\hbox {mV}\) , ನಾಡಿ ಅವಧಿ = \(50\,\hbox {ms}\), ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ದರ = \({20}\,\hbox {mV/s}\)
CV: ಸಮತೋಲನ ಸಮಯ = \(8\,\hbox {s}\), ವೋಲ್ಟೇಜ್ ಹಂತ = \(3\,\hbox {mV}\), ಸ್ವೀಪ್ ದರ = \({300}\,\hbox {mV/ s }\)
\({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB: (a) \(503\,\hbox {bp}\) DPV , (b) \ (503\,\hbox {bp}\) CV, (c) \(117\,\hbox {bp}\) DPV, (d) \(117\,\hbox {bp}\) CV.
DPV ಮತ್ತು CV ವೋಲ್ಟಾಮೊಗ್ರಾಮ್‌ಗಳನ್ನು ENIG PCB ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB ಡಿಎನ್‌ಎಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಕೀರ್ಣವಾಗಿದೆ (10–\({20}\,{\ hbox {ng ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ }/{\upmu \hbox {l}}}\) ಅಂದರೆ 0.13–\({0.26}\,{\upmu \hbox {M}}\) ಗಾಗಿ \(117\,\hbox {bp}\ ) ಮತ್ತು 0.03 –\({0.06}\,{\upmu \hbox {M}}\) ಗಾಗಿ \(503\,\hbox {bp}\)).ಪ್ರತಿನಿಧಿ ವೋಲ್ಟಾಮೊಗ್ರಾಮ್‌ಗಳನ್ನು ಪೂರಕ ಮಾಹಿತಿಯಲ್ಲಿ ಚಿತ್ರ S1 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಚಿತ್ರ 2 ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ ಜೆಲ್-ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು DPV ಮತ್ತು CV ಮಾಪನಗಳ (ಪೀಕ್ ಕರೆಂಟ್) CV ಮಾಪನಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, DPV ಮಾಪನಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ (ಪ್ರಸ್ತುತ DNA ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿ) ಏಕೆಂದರೆ CV ಮಾಪನಗಳಲ್ಲಿನ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಕೆಪ್ಯಾಸಿಟಿವ್ ಪ್ರವಾಹಗಳು Faradaic ಪ್ರವಾಹಗಳನ್ನು ಮರೆಮಾಡುತ್ತವೆ 26 .ದತ್ತಾಂಶ ಬಾಕ್ಸ್‌ಪ್ಲಾಟ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಪ್ರತಿ ಬಾಕ್ಸ್‌ಗೆ 5 ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳಿಂದ ಮಾಪನಗಳಿವೆ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್-ಟು-ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್ ವ್ಯತ್ಯಾಸದಿಂದಾಗಿ ಮಾಪನ ದೋಷಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಎಲ್ಲಾ ಮಾಪನಗಳು ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತವೆ. ನಾವು ಡಿಪಿವಿ ಮತ್ತು ಸಿವಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಗರಿಷ್ಠ ಪ್ರವಾಹಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ ಪ್ರವೃತ್ತಿಯನ್ನು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ , ಮುಂದೆ (\(503\,\hbox {bp}\)) \,\hbox {bp}\ ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ \(117) ) ತುಣುಕು. ಇದು ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಕೆಲಸದಲ್ಲಿ ವರದಿ ಮಾಡಲಾದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್ ಹೊರಹೀರುವಿಕೆಯ ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಪ್ರವೃತ್ತಿಯೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ. MB-DNA ಸಂಕೀರ್ಣದ ಹೊರಹೀರುವಿಕೆಯು ವಿದ್ಯುದ್ವಾರದ ಮೇಲೆ ಚಾರ್ಜ್ ವರ್ಗಾವಣೆಯನ್ನು ಸುಗಮಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಗರಿಷ್ಠ ಪ್ರವಾಹದ ಹೆಚ್ಚಳಕ್ಕೆ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡುತ್ತದೆ. ಇತರ ಅಧ್ಯಯನಗಳು MB-DNA ಇಂಟರ್‌ಕಲೇಷನ್27,28,29,30 ಮೇಲೆ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಅನುಕ್ರಮದ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ. ಎರಡು ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳ (\(117\,\hbox {bp}\) ಮತ್ತು \(503\,\hbox {bp}\)) -ಸೈಟೋಸಿನ್ (GC) ವಿಷಯವು ಸುಮಾರು 50% ಆಗಿತ್ತು, ಇದು ಅವಲೋಕನವು ಕಾರಣವೆಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್ ಉದ್ದಕ್ಕೆ \) ಮತ್ತು \( >{10}\,{\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) ಗಾಗಿ \(117\,\hbox {bp}\)), ನಾವು ಎರಡು ವರ್ಧನೆಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸುತ್ತೇವೆ DPV ಮತ್ತು CV ಮಾಪನಗಳೆರಡರಲ್ಲೂ ಸಬ್‌ಗಳ ಗರಿಷ್ಠ ಪ್ರವಾಹಗಳು ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತವೆ. ಇದಕ್ಕೆ ಕಾರಣ MB ಸ್ಯಾಚುರೇಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು DNA ಯ ಮೂಲ ಜೋಡಿಗಳ ನಡುವೆ ಇಂಟರ್‌ಕಲೇಟ್ ಆಗುವುದರಿಂದ, MB31,32 ರಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದಾದ ಗುಂಪಿನ ರೆಡಾಕ್ಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಸ್ಟೆರಿಕ್ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.
在存在 \(2\,\hbox {mM}\) \({\hbox {MgCl }_2}\): (a) \(503\,\hbox {bp}\) DPV, (b) \(503 \,\hbox {bp}\) CV, (c) \(117\,\hbox {bp}\) DPV，(d) \(117\,\hbox {bp}\) CV。
PCR ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಶ್ರಣಗಳಲ್ಲಿ ಇರುವ ಲವಣಗಳು MB ಮತ್ತು DNA ನಡುವಿನ ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಸಂವಹನಗಳಿಗೆ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ \(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl }_2\) ಜೊತೆಗೆ \({50} \,{\) ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ upmu \hbox {M}}\) MB-DNA ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಮೇಲೆ ಉಪ್ಪಿನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು MB ಜೆಲ್-ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಉತ್ಪನ್ನ. ಚಿತ್ರ 3 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ DNA ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗೆ (\(>{2}\,{\) ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) (503\,\hbox {bp }\) ಮತ್ತು \(>{10}\,{\hbox {ng}/{\upmu \hbox { l}}}\) ಗಾಗಿ \(117\,\hbox {bp} \)), DPV ಮತ್ತು CV ಯಲ್ಲಿ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇರ್ಪಡೆಯು ಮಾಪನಗಳ ಮೇಲೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲಿಲ್ಲ (ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ವೋಲ್ಟಾಮೊಗ್ರಾಮ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ ಪೂರಕ ಮಾಹಿತಿಯಲ್ಲಿ ಚಿತ್ರ S2 ನೋಡಿ).ಆದಾಗ್ಯೂ, ನಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ಡಿಎನ್‌ಎ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು, ಉಪ್ಪಿನ ಸೇರ್ಪಡೆಯು ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಬಹಳವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಪ್ರಸ್ತುತದಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ಬದಲಾವಣೆಯಿಲ್ಲ. MB-DNA ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಇಂಟರ್‌ಕಲೇಷನ್‌ನಲ್ಲಿ ಉಪ್ಪಿನ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಋಣಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಈ ಹಿಂದೆ ಇತರ ಸಂಶೋಧಕರು ವರದಿ ಮಾಡಿದ್ದಾರೆ33,34.\(\hbox { Mg}^{2+}\) ಕ್ಯಾಟಯಾನ್‌ಗಳು ಡಿಎನ್‌ಎಯ ಋಣಾತ್ಮಕ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬೆನ್ನೆಲುಬನ್ನು ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ MB ಮತ್ತು DNA ನಡುವಿನ ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ DNA ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ, ರೆಡಾಕ್ಸ್-ಸಕ್ರಿಯ MBಗಳ ಸ್ಟೆರಿಕ್ ಪ್ರತಿಬಂಧವು ಕಡಿಮೆ ಗರಿಷ್ಠ ಪ್ರವಾಹಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಸಂವಹನಗಳು ಸಂವೇದಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ. ಪ್ರಮುಖ ಅಂಶವೆಂದರೆ ಈ ಜೈವಿಕ ಸಂವೇದಕವು ಹೆಚ್ಚಿನ ಡಿಎನ್‌ಎ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಸೂಕ್ತವಾಗಿರುತ್ತದೆ (ವಿರಳವಾಗಿ \({\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನದು), ಸಂಪೂರ್ಣ- ಪರಿಸರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ಸಂಸ್ಕರಣೆ, ಅಲ್ಲಿ PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಜೆಲ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣವು ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯವಾಗುವುದಿಲ್ಲ.
\({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB ಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಕೀರ್ಣವಾದ DNA ಯ ವಿವಿಧ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗಾಗಿ ತರಂಗಾಂತರ ಶ್ರೇಣಿ 600–700 \(\hbox {nm}\) ಗಾಗಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ವಕ್ರರೇಖೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರದೇಶ: ( a ) \(503\,\hbox {bp}\) ಉಪ್ಪಿನೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ಇಲ್ಲದೆ (\(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl}_2\)), (b) \( 117\, \hbox {bp}\) ಉಪ್ಪಿನೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ಇಲ್ಲದೆ (\(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl}_2\)).\({0}\,{\hbox {pg}/ {\upmu \hbox {l}}}\) \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ DNA ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು DNA ಇಲ್ಲ.
ಮೇಲಿನ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಪರಿಶೀಲಿಸಲು, ನಾವು UV/Vis ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ (ಥರ್ಮೋ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್ ಮಲ್ಟಿಸ್ಕನ್ GO) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮಾಪನಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಪ್ರತಿಯೊಂದಕ್ಕೂ \({50}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ ಮಾಪನ.ಡಿಎನ್‌ಎ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವುದರೊಂದಿಗೆ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯ ಸಹಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ತರಂಗಾಂತರ ಶ್ರೇಣಿ \(600\,\hbox {nm}\) ನಿಂದ \(700\,\hbox { ಗೆ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ವಕ್ರರೇಖೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರದೇಶದ ಪ್ರವೃತ್ತಿಯಿಂದ ನೋಡಬಹುದಾಗಿದೆ nm}\) , ಚಿತ್ರ 4 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ (ಅಂಜೂರದ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಮ್ ಅನ್ನು ಪೂರಕ ಮಾಹಿತಿಯಲ್ಲಿ ಚಿತ್ರ S3 ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ). \({1}\,{\hbox {ng}/{\upmu \hbox ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಇರುವ DNA ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ {l}}}\), DNA-ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಮತ್ತು MB-ಮಾತ್ರ ಮಾದರಿಗಳ ನಡುವೆ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸವಿಲ್ಲ (\(503\,\hbox {bp}\) ಮತ್ತು \(117\,\hbox {bp}\ ) ಉದ್ದದ ತುಣುಕುಗಳು), ರೆಡಾಕ್ಸ್-ಸಕ್ರಿಯ MB ಯ ಸ್ಟೆರಿಕ್ ಪ್ರತಿಬಂಧದ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ DNA ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ, ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಸಂಕೇತದಲ್ಲಿ ಕ್ರಮೇಣ ಇಳಿಕೆಯನ್ನು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಉಪ್ಪಿನ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ಇಳಿಕೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಆಣ್ವಿಕಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗಿವೆ. ಡಿಎನ್‌ಎ ಹೈಬ್ರಿಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೇಸ್ ಪೇರಿಸುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಸ್ಟೆರಿಕ್ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ. ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು MB-DNA ಇಂಟರ್‌ಕಲೇಶನ್‌ನ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಕ್ ಅಧ್ಯಯನಗಳ ಸಾಹಿತ್ಯದಲ್ಲಿನ ವರದಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತವೆ, ಇದು \(\pi\)–\(\pi ^*\ ನಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ಶಕ್ತಿಯ ಮಟ್ಟಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೈಪೋಕ್ರೊಮ್ಯಾಟಿಟಿಯನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುತ್ತದೆ ) 36, 37, 38 ಲೇಯರ್‌ಗಳ ಇಂಟರ್ಕಲೇಷನ್‌ನಿಂದಾಗಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನಿಕ್ ಪರಿವರ್ತನೆಗಳು.
ಫೇಜ್ Phi6 ನ ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್: ಸರೋವರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ \(117\,\hbox {bp}\) ಮತ್ತು \(503\,\hbox {bp}\) ನ PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳು.M-DNA ಮಾರ್ಕರ್;NTC-ನೋ-ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ನಿಯಂತ್ರಣ, ಅನುಗುಣವಾದ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು;ಪಿಸಿ ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ;1, 2, 3-ತೆರವುಗೊಳಿಸದ (1:1) ಮೊನಚಾದ ಸರೋವರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳು ಮೂರು ಬಾರಿ. \(\(\ಸುಮಾರು 50\,\hbox {bp}\) ನಲ್ಲಿ \(503\,\) ಬಳಸದ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್‌ಗಳಿಂದಾಗಿ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಗೋಚರಿಸುತ್ತದೆ hbox {bp}\) ಲೇನ್.
Phi6 ಫೇಜ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸ್ಪೈಕ್ ಮಾಡಲಾದ ಪೊವೈ ಸರೋವರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂವೇದಕದ ಉಪಯುಕ್ತತೆಯನ್ನು ನಾವು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ. ಫೇಜ್-ಸ್ಪೈಕ್ಡ್ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ RNA ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು 15.8–\({19.4}\,{\upmu \hbox {g}/\hbox { ml}}\), ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಫೇಜ್ ಅಮಾನತುಗಳಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯು ಸರಿಸುಮಾರು 1 ರ ಚೇತರಿಕೆ ದಕ್ಷತೆಯೊಂದಿಗೆ \({1945}\,{\upmu \hbox {g}/\hbox {ml}}\) ಎಂದು ಅಂದಾಜಿಸಲಾಗಿದೆ %.RNAಯನ್ನು cDNA ಗೆ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು PCR ಮತ್ತು qPCR ಗಾಗಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಸಂವೇದಕದೊಂದಿಗೆ ಪರೀಕ್ಷಿಸುವ ಮೊದಲು ಉತ್ಪನ್ನದ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ (ಚಿತ್ರ 5) ಮೂಲಕ ದೃಢೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ಮಾದರಿಗಳು ಜೆಲ್ ಅನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ PCR ನ ಎಲ್ಲಾ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತವೆ ಆಸಕ್ತಿಯ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳು. qPCR (ಕೋಷ್ಟಕ 1) ಸಮಯದಲ್ಲಿ ದಾಖಲಿಸಲಾದ Ct ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಅನುಗುಣವಾದ ಮೊನಚಾದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ RNA ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. Ct ಮೌಲ್ಯವು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತಕ್ಕೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಚಕ್ರಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಮಿತಿ ಅಥವಾ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಮೀರುತ್ತದೆ.ಹೆಚ್ಚಿನ Ct ಮೌಲ್ಯಗಳು ಕಡಿಮೆ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಯಾಗಿ. NTC ಮಾದರಿಗಳ Ct ಮೌಲ್ಯಗಳು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಿದಷ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿವೆ. \(\ಅಂದಾಜು 3\) Ct ಮೌಲ್ಯಗಳ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಪರೀಕ್ಷಾ ಮಾದರಿಯು ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಪ್ರತಿ ಪರೀಕ್ಷಾ ಮಾದರಿಯು ಸರಿಸುಮಾರು 1% ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಉದ್ದವಾದ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳು ಉತ್ತಮ ಸಂವೇದನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ ಎಂದು ನಾವು ಹಿಂದೆ ಚರ್ಚಿಸಿದ್ದೇವೆ. ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಪರಿಸರ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ ಉದ್ದವಾದ ತುಣುಕುಗಳ ವರ್ಧನೆಯು ಅನಾನುಕೂಲಗಳನ್ನು ನೀಡಿದರೆ ಸವಾಲಾಗಿದೆ. ಕಡಿಮೆ ವೈರಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು RNA ಅವನತಿ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ನಮ್ಮ ವೈರಸ್ ಪುಷ್ಟೀಕರಣ ಮತ್ತು PCR ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ, ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸೆನ್ಸಿಂಗ್‌ಗಾಗಿ \(503\,\hbox {bp}\) ತುಣುಕನ್ನು ನಾವು ಯಶಸ್ವಿಯಾಗಿ ವರ್ಧಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಯಿತು.
ಚಿತ್ರ 6 \(503\,\hbox {bp}\) ತುಣುಕು ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ನ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸಂವೇದಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಎರಡೂ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸದ cDNA ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ (1:1) ಮತ್ತು 100-ಪಟ್ಟು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿದ cDNA ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ (1:100 ) ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ PCR , NTC ಮತ್ತು PC ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ (ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ವೋಲ್ಟಾಮೊಗ್ರಾಮ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ ಪೂರಕ ಮಾಹಿತಿಯಲ್ಲಿ ಚಿತ್ರ S4 ನೋಡಿ). ಚಿತ್ರ 6 ರಲ್ಲಿನ ಬಾಕ್ಸ್‌ಪ್ಲಾಟ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಪ್ರತಿ ಪೆಟ್ಟಿಗೆಯು 5 ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಮೂರು ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಅಳತೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ನಿಂದಾಗಿ ದೋಷಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಎಲ್ಲಾ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಅಳೆಯಲು ಅದೇ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. CV ಮಾಪನಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, DPV ಮಾಪನಗಳು NTC ಗಳಿಂದ ಪರೀಕ್ಷೆ ಮತ್ತು PC ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಉತ್ತಮ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ ಏಕೆಂದರೆ ಹಿಂದೆ ಹೇಳಿದಂತೆ, Faradaic ಪ್ರವಾಹಗಳು ನಂತರದ ಹಿನ್ನಲೆ ಕೆಪ್ಯಾಸಿಟಿವ್ ಕರೆಂಟ್‌ಗಳಿಂದ ಮರೆಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ದೀರ್ಘವಾದ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ, ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ (NTC) ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ ಹೆಚ್ಚಿನ CV ಮತ್ತು DPV ಗರಿಷ್ಠ ಪ್ರವಾಹಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಆದರೆ ಧನಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸದ ಪರೀಕ್ಷಾ ಮಾದರಿಗಳು DPV ಗರಿಷ್ಠ ಪ್ರವಾಹಗಳ ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಗರಿಷ್ಠ ಎತ್ತರವನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು. ) NTC ಮಾದರಿಯ ಸಂವೇದಕ ಔಟ್‌ಪುಟ್‌ನಿಂದ ಪರೀಕ್ಷಾ ಮಾದರಿ ಮತ್ತು PC ಅನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ಪರಿಹರಿಸಬಹುದು, ಆದರೆ 1:100 ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿದ ಮಾದರಿಯ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಕಡಿಮೆ ಉಚ್ಚರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. CDNA ಯ 100-ಪಟ್ಟು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಗಾಗಿ, ನಾವು ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಿಲ್ಲ. (ಚಿತ್ರ 5 ರಲ್ಲಿ ಲೇನ್‌ಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ), ಮತ್ತು ಅನುಗುಣವಾದ DPV ಮತ್ತು CV ಪೀಕ್ ಕರೆಂಟ್‌ಗಳು NTC ಗಾಗಿ ನಿರೀಕ್ಷಿಸಿದಂತೆಯೇ ಇರುತ್ತವೆ. \(117\,\hbox {bp}\) ತುಣುಕಿನ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪೂರಕ ಮಾಹಿತಿಯಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವು PCB ಸಂವೇದಕದಿಂದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ನಲ್ಲಿ ಉಚಿತ MB ಯ ಹೊರಹೀರುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ MB ಯ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯಿಂದಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಬಾರಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದಾಗ, ನಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಚಲಾಯಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಪರೀಕ್ಷಾ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಧನಾತ್ಮಕ ಅಥವಾ ಋಣಾತ್ಮಕ ಎಂದು ವರ್ಗೀಕರಿಸಲು ಭೇದಾತ್ಮಕ (ಸಂಬಂಧಿ) ಅಳತೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣದಿಂದ ಪಡೆದ ಗರಿಷ್ಠ ಪ್ರವಾಹಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಪರೀಕ್ಷಾ ಮಾದರಿಯ ಗರಿಷ್ಠ ಪ್ರವಾಹ.
(a) DPV, ಮತ್ತು (b) ಸರೋವರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ \(503\,\hbox {bp}\) ತುಣುಕುಗಳ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಪತ್ತೆಗಾಗಿ CV ಪೀಕ್ ಕರೆಂಟ್. ಪರೀಕ್ಷಾ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಮೂರು ಬಾರಿ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳಿಗೆ (NTC) ಹೋಲಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳು (PC).
UV/Vis ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮಾಪನಗಳ ಮೂಲಕ ಪರಿಶೀಲಿಸಲಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳೊಂದಿಗೆ ವಿಭಿನ್ನ ಡಿಎನ್‌ಎಗಳಿಗೆ ವಿಭಿನ್ನ ಉದ್ದದ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸಂವೇದಕಗಳ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ವಿಭಿನ್ನ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ನಮ್ಮ ಸಂಶೋಧನೆಗಳು ವಿವರಿಸುತ್ತವೆ. \(500\,\hbox {bp}\) ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನಾಶೀಲತೆಯೊಂದಿಗೆ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬಹುದು ಮತ್ತು ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಉಪ್ಪಿನ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯ DNA ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿಲ್ಲ (ವಿರಳವಾಗಿ \({\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) ಮತ್ತು ಮೇಲಿನವು).ಇದಲ್ಲದೆ, ಉಪ್ಪಿನೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ಸೇರಿಸದೆಯೇ ಜೆಲ್-ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು DPV ಮತ್ತು CV ಅಳತೆಗಳಲ್ಲಿ ಸರೋವರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದು ಸೇರಿದಂತೆ ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಮಾದರಿಗಳ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ನಾವು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ.DPV ಉತ್ತಮ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಒದಗಿಸಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಕೆಪ್ಯಾಸಿಟಿವ್ ಕರೆಂಟ್ ಸಹ CV ಮಾಪನದ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ, ಇದು ಕಡಿಮೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಮಾಡುತ್ತದೆ.
ಉದ್ದವಾದ ತುಣುಕುಗಳ ವರ್ಧನೆಯು ವೈರಲ್ ಜೀನೋಮಿಕ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ. ಪರಿಸರದಲ್ಲಿನ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅವನತಿ ಮತ್ತು ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವಿಭಜಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯದಿಂದಾಗಿ ಉದ್ದವಾದ ತುಣುಕುಗಳ ವರ್ಧನೆಯು ಯಾವಾಗಲೂ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿರುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ಹಲವಾರು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ. .ಅಲ್ಯೂಮಿನಿಯಂ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್-ಆಧಾರಿತ ವೈರಸ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ವಿಧಾನಕ್ಕಿಂತ ಸರೋವರದ ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಫೇಜ್ ಫಿ-6 ಅನ್ನು ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸುವಲ್ಲಿ PEG-ಆಧಾರಿತ ವೈರಸ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ವಿಧಾನವು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ. ದೀರ್ಘ DNA ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವು ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ PCR ನ ಅಗತ್ಯವನ್ನು ಮೀರಿಸಲು ಸಾಬೀತಾಯಿತು. ಬಹು ಕಡಿಮೆ ಉದ್ದದ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು ಮತ್ತು ಅಡ್ಡ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು.
ಜೈವಿಕ ಮಾದರಿಗಳು ವಿರಳವಾಗಿರುತ್ತವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಕನಿಷ್ಠ ಮಾದರಿಗಳ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಜೈವಿಕ ಸಂವೇದಕವನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸುವ ಅವಶ್ಯಕತೆಯಿದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ ENIG PCB ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳು ಕೇವಲ \({5}\,{{\upmu \hbox {l}}}\ ) ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಒಳಗೊಳ್ಳಲು ಪರೀಕ್ಷೆಗಾಗಿ ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ರಾಸಾಯನಿಕ. ಪ್ರತಿ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರದ ತಯಾರಿಕೆಗೆ ಸುಮಾರು $0.55 (ಅಥವಾ INR 40) ವೆಚ್ಚವಾಗುವುದರಿಂದ, ಈ ಜೈವಿಕ ಸಂವೇದಕವು ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿರುವ ಪತ್ತೆ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳಿಗೆ ವೆಚ್ಚ-ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿದೆ. ಕೋಷ್ಟಕ 2 ಈ ಕೆಲಸದ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ಸಾಹಿತ್ಯದಲ್ಲಿ ದೀರ್ಘಕಾಲ ವರದಿ ಮಾಡಲಾದ ಇತರ ಸಂವೇದಕಗಳೊಂದಿಗೆ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ ಭಿನ್ನಜಾತಿಯ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ DNA ತುಣುಕುಗಳು.
ಎಂಬಿ-ಆಧಾರಿತ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ಗಳು ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿದೆ, ಈ ವಿಧಾನದ ಪ್ರಮುಖ ಮಿತಿಯೆಂದರೆ ತ್ಯಾಜ್ಯನೀರು ಮತ್ತು ಸರೋವರದ ನೀರಿನಂತಹ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಯ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ-ಶುದ್ಧತೆಯ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದು. ಮಾರ್ಪಡಿಸದ ENIG PCB ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸದ PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳ DNA ಪತ್ತೆಗೆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನಗಳು, ಬಳಕೆಯಾಗದ dNTP ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳಿಂದ ಪರಿಚಯಿಸಲಾದ ದೋಷಗಳನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ಗಳನ್ನು ಉತ್ತಮಗೊಳಿಸುವುದು ಅವಶ್ಯಕ. ಮಾಪನದ ನಿಖರತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ನೀರಿನ ಮಾದರಿಯ ಆಮ್ಲಜನಕದ ಬೇಡಿಕೆ (BOD) ಅನ್ನು ಸಹ ಅಳೆಯಬೇಕಾಗಬಹುದು.
ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, ನಾವು ಪರಿಸರದ (ಸರೋವರದ ನೀರು) ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ವೈರಸ್ ಪತ್ತೆಗೆ ಕಡಿಮೆ-ವೆಚ್ಚದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ENIG PCB ಸಂವೇದಕವನ್ನು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸುತ್ತೇವೆ. ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಕ್ರಯೋಜೆನಿಕ್ ಶೇಖರಣೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುವ DNA ಸಂವೇದನೆಗಾಗಿ ನಿಶ್ಚಲವಾದ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳು ಅಥವಾ ಕಸ್ಟಮ್ ಸಬ್‌ಸ್ಟ್ರೇಟ್‌ಗಳಂತಲ್ಲದೆ, 53,54 ನಮ್ಮ ತಂತ್ರವು ಮಾರ್ಪಡಿಸದ PCB ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಜೀವಿತಾವಧಿ ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಶೇಖರಣಾ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳಿಲ್ಲದ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳು ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ LMIC ಗಳಲ್ಲಿ ನಿಯೋಜಿಸಲಾದ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ಮಾದರಿ ಸಂಸ್ಕರಣೆಯೊಂದಿಗೆ ಮಾಪನ ಪರಿಹಾರಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ ಏಕ- ಮತ್ತು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳಿಗೆ MB ಗಳ ಅನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಬೈಂಡಿಂಗ್‌ನಿಂದಾಗಿ ಪರಿಸರ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾದ ಈ ಸಂವೇದನಾ ವಿಧಾನದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಈ ಪರೀಕ್ಷೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್ ಮತ್ತು PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಜೊತೆಗೆ, CV ಮತ್ತು ಪರೀಕ್ಷಿತ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಪಡೆದ DPV ಪೀಕ್ ಪ್ರವಾಹಗಳು ಪ್ರತಿ ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ (NTC) ಯಿಂದ ಪಡೆದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ ಅರ್ಥೈಸಿಕೊಳ್ಳಬೇಕು. ಈ ಕೆಲಸದಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸಂವೇದಕ ವಿನ್ಯಾಸಗಳು ಮತ್ತು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲು ಆಟೋಸಾಂಪ್ಲರ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು. ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲು ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಮತ್ತು ನಿಸ್ತಂತುವಾಗಿ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಕ್ಕೆ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ರವಾನಿಸಲು ವೆಚ್ಚದ ಪರಿಹಾರ.
Cashdollar, J. & Wymer, L. ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ವೈರಸ್‌ಗಳ ಆರಂಭಿಕ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ವಿಧಾನಗಳು: ಇತ್ತೀಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳ ವಿಮರ್ಶೆ ಮತ್ತು ಮೆಟಾ-ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ.Application.microorganism.115, pp. 1-11 (2013).
Gall, AM, Mariñas, BJ, Lu, Y. & Shisler, JL ವಾಟರ್‌ಬೋರ್ನ್ ವೈರಸ್‌ಗಳು: ಸುರಕ್ಷಿತ ಕುಡಿಯುವ ನೀರಿಗೆ ತಡೆಗಳು. PLoS ರೋಗಕಾರಕಗಳು.11, E1004867 (2015).
ಕಡಿಮೆ ಮತ್ತು ಮಧ್ಯಮ-ಆದಾಯದ ದೇಶಗಳಲ್ಲಿ COVID-19 ನ ವೆಚ್ಚ-ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ ಕಣ್ಗಾವಲು: ಸವಾಲುಗಳು ಮತ್ತು ಅವಕಾಶಗಳು. ನೀರು 13, 2897 (2021).
ಪ್ಯಾಲೆಸೆಕ್, ಇ. & ಬಾರ್ಟೋಸಿಕ್, ಎಂ. ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ. ಕೆಮಿಕಲ್. ರೆವ್.112, 3427–3481 (2012).
Tani, A., ಥಾಮ್ಸನ್, AJ & ಬಟ್, JN ಮೆಥಿಲೀನ್ ನೀಲಿ ಏಕ- ಮತ್ತು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಡಿಸ್ಕ್ರಿಮಿನೇಟರ್ ಆಗಿ ಚಿನ್ನದ ತಲಾಧಾರಗಳ ಮೇಲೆ ನಿಶ್ಚಲಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ. ವಿಶ್ಲೇಷಕ 126, 1756-1759 (2001).
ವಾಂಗ್, EL, Erohkin, P. & Gooding, JJ ದೀರ್ಘ-ಶ್ರೇಣಿಯ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಫರ್.Electrochemistry.comminicate.6, 648-654 (2004) ಮೂಲಕ DNA ಹೈಬ್ರಿಡೈಸೇಶನ್ನ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಡಕ್ಷನ್ಗಾಗಿ ಕ್ಯಾಶನ್ ಮತ್ತು ಅಯಾನ್ ಇಂಟರ್ಕಲೇಟರ್ಗಳ ಹೋಲಿಕೆ.
ವಾಂಗ್, EL & ಗೂಡಿಂಗ್, JJ ಚಾರ್ಜ್ ವರ್ಗಾವಣೆ DNA ಮೂಲಕ: ಆಯ್ದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ DNA biosensor.anus.Chemical.78, 2138–2144 (2006).
ಫಾಂಗ್, TH ಎಟ್ ಅಲ್
ವಿನ್, BY et al.ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಯಾಂತ್ರಿಕತೆಯ ಅಧ್ಯಯನ ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ನೈಜ-ಸಮಯದ PCR ಸಿಸ್ಟಮ್ನ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆ ಪರಿಶೀಲನೆ ಡಿಎನ್ಎ ಜೊತೆ ಮಿಥಿಲೀನ್ ನೀಲಿ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ. ವಿಶ್ಲೇಷಕ 136, 1573-1579 (2011).
ರಾಮಿರೆಜ್-ಚಾವರ್ರಿಯಾ, ಆರ್ಜಿ ಮತ್ತು ಇತರರು. ತ್ಯಾಜ್ಯನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಾರ್ಸ್-ಕೋವ್-2 ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ಲೂಪ್-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಆಧಾರಿತ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸೆನ್ಸಾರ್.ಎನ್ವಿರಾನ್ಮೆಂಟ್.ಕೆಮಿಕಲ್.ಬ್ರಿಟನ್.10, 107488 (2022).
ಕುಮಾರ್, ಎಂ. ಇತರರು. SARS-CoV-2 ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳ PCB ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಕೆಮಿಕಲ್ ಸೆನ್ಸಿಂಗ್. ಸಂವೇದಕವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.B ಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ.343, 130169 (2021).
ಕಿತಾಮುರಾ, ಕೆ., ಸದಾಮಾಸು, ಕೆ., ಮುರಮಾಟ್ಸು, ಎಂ. & ಯೋಶಿಡಾ, H. ತ್ಯಾಜ್ಯನೀರಿನ ಘನ ಭಾಗದಲ್ಲಿ SARS-CoV-2 RNA ಯ ಸಮರ್ಥ ಪತ್ತೆ.ವಿಜ್ಞಾನ.ಸಾಮಾನ್ಯ ಪರಿಸರ.763, 144587 (2021).
Alygizakis, N. et al. ತ್ಯಾಜ್ಯನೀರಿನಲ್ಲಿ SARS-CoV-2 ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣಾತ್ಮಕ ವಿಧಾನಗಳು: ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಮತ್ತು ಭವಿಷ್ಯದ ದೃಷ್ಟಿಕೋನಗಳು.TraC ಟ್ರೆಂಡಿಂಗ್ anal.Kemical.134, 116125 (2020).
Fedorenko, A., Grinberg, M., Orevi, T. & Kashtan, N. ಆವರಿಸಿದ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯೊಫೇಜ್ Phi6 (SARS-CoV-2 ಗಾಗಿ ಒಂದು ಬದಲಿ) ಗಾಜಿನ ಮೇಲ್ಮೈ ಮೇಲೆ ಠೇವಣಿ ಆವಿಯಾದ ಲಾಲಾರಸ ಹನಿಗಳಲ್ಲಿ ಸರ್ವೈವಲ್.science.Rep.10, 1–10 (2020).
Dey, R., Dlusskaya, E. & Ashbolt, NJ ಎನ್ವಿರಾನ್ಮೆಂಟಲ್ ಪರ್ಸಿಸ್ಟೆನ್ಸ್ ಆಫ್ ಎ SARS-CoV-2 ಸರೊಗೇಟ್ (Phi6) ಇನ್ ಫ್ರೀ-ಲಿವಿಂಗ್ ಅಮೀಬಾ.J.ನೀರಿನ ಆರೋಗ್ಯ 20, 83 (2021).
ಮಿಂಡಿಚ್, L. ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯೊಫೇಜ್‌ನ ಮೂರು ಜೀನೋಮಿಕ್ ತುಣುಕುಗಳ ನಿಖರ ಪ್ಯಾಕೇಜಿಂಗ್\(\ವಾರ್ಫಿ\)6.ಮೈಕ್ರೋಆರ್ಗನಿಸಂ.ಮೂರ್.ಬಯಾಲಜಿ.ರೆವ್.63, 149–160 (1999).
ಪಿರ್ಟಿಮಾ, MJ & ಬ್ಯಾಮ್‌ಫೋರ್ಡ್, DH RNA ಫೇಜ್\(\varphi\)6 ಪ್ಯಾಕೇಜಿಂಗ್ ಪ್ರದೇಶದ ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆ.RNA 6, 880–889 (2000).
Bonilla, N. et al.Phages ಆನ್ ದಿ ಟ್ಯಾಪ್ - ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯೊಫೇಜ್‌ಗಳ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯ ಸ್ಟಾಕ್‌ಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ವೇಗವಾದ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್.PeerJ 4, e2261 (2016).