ئۇزۇن ئامپلون PCB ئېلېكترود ئارقىلىق سۇ ئەۋرىشكىسىدىكى ۋىرۇسلۇق يادرو كىسلاتاسىنىڭ ئېلېكترو خىمىيىلىك سېزىمىنى تېخىمۇ ياخشى سەزگۈرلۈك بىلەن تەمىنلەيدۇ

Nature.com نى زىيارەت قىلغىنىڭىزغا رەھمەت. سىز ئىشلىتىۋاتقان توركۆرگۈچ نۇسخىسىنىڭ CSS نى چەكلىك قوللىشى بار. ئەڭ ياخشى تەجرىبە ئۈچۈن ، يېڭىلانغان تور كۆرگۈچنى ئىشلىتىشىڭىزنى تەۋسىيە قىلىمىز (ياكى Internet Explorer دىكى ماسلىشىش ھالىتىنى ئېتىۋېتىڭ). بۇ جەرياندا كاپالەتلىك قىلىڭ. داۋاملىق قوللاش ، ئۇسلۇب ۋە JavaScript بولمىغان تور بېكەتنى كۆرسىتىمىز.
COVID-19 تارقىلىشچان زۇكام باشلانغاندىن بۇيان مۇھىت ئەۋرىشكىسىنى ئۆلچەشنىڭ ئەھمىيىتى زور دەرىجىدە ئالقىشقا ئېرىشتى ، گەرچە qPCR نى ئاساس قىلغان تېخنىكىلار قىممەت بولسىمۇ ، ئەمما بىر قىسىم نازارەت قىلىش تەدبىرلىرى ئالتۇن ئۆلچەمدىن پايدىلىنىپ ئېلىپ بېرىلماقتا. تۆۋەن كىرىملىك ​​ۋە ئوتتۇراھال كىرىملىك ​​دۆلەتلەرنىڭ مۇھىت سۇ ئەۋرىشكىسىنى نازارەت قىلىش چارىسى. بۇ ئەسەردە ، بىز ENIG ئارقىلىق Phi6 باسقۇچىدىن ئېلىنغان ئامپلونلارنىڭ ئېلېكتر خىمىيىلىك تەكشۈرۈشىنى نامايان قىلىمىز. PCB ئېلېكترودنى يەر يۈزى ئۆزگەرتمەي تاماملاش.جىنسى. ئېلېكتىرو خىمىيىلىك سېنزورنىڭ ئىنكاسى ئوخشىمىغان ئۇزۇنلۇقتىكى (\ ({117} \, \ hbox {bp} \) ۋە \ ({503} \, \ hbox {bp} \)) ۋە PCR ئۇستىسىدىكى تۇزنىڭ مېتىلېن كۆك (MB) -DNA ئۆز-ئارا تەسىرگە ئارىلىشىشى. بىزنىڭ نەتىجىمىز شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، DNA پارچىلىرىنىڭ ئۇزۇنلۇقى ئېلېكتر خىمىيىلىك سەزگۈرلۈكنى كۆرۈنەرلىك بەلگىلەيدۇ ۋە بۇ ئەسەردە PCR مەھسۇلاتلىرىنىڭ گېلىنى ساپلاشتۇرماي تۇرۇپ ئۇزۇن ئامپلوننى بايقاش ئىقتىدارىنىڭ بارلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. سۇ ئەۋرىشكىسىنى ئۆلچەشتە مۇھىم.ۋىرۇس قاچىلاشنىڭ تولۇق ئاپتوماتىك ھەل قىلىنىشى ياخشى.
سۇدىن يۇقۇملىنىش ۋىرۇسىنىڭ تارقىلىشى 1940-يىللاردىن باشلاپ ئاممىۋى ساغلاملىق خەۋىپى دەپ ئاتالغان ، E1 تىپلىق جىگەر ياللۇغى ۋە جىگەر ياللۇغىنىڭ سۇدىن تارقىلىشىنىڭ تۇنجى ئىسپاتى. دۇنيا سەھىيە تەشكىلاتى ساغلاملىق ۋە ساغلاملىق ئەھمىيىتى يۇقىرى بولغان بىر نەچچە سۇ ۋىرۇسى ۋىرۇسى كېسەللىكلىرىنى تۈرگە ئايرىدى. ئەنئەنىۋى ۋىرۇس بايقاش ئۇسۇلى ئىنتايىن سەزگۈر ۋە كونكرېت بولغان ئالتۇن ئۆلچەملىك qPCR نى ئاساس قىلغان تېخنىكىلارغا تايىنىدۇ ، ئەمما ماھارەتلىك خادىملارنىڭ قىممەت باھالىق ئەسۋابلارنى ئىشلىتىپ تەجرىبىخانىدا سىناق قىلىشىنى تەلەپ قىلىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن ، تۆۋەن ۋە ئوتتۇرا كىرىملىك ​​دۆلەتلەردە (LMIC) بايلىق مەنبەسى چەكلىك ئەۋرىشكە ئېلىپ تەكشۈرۈش بەلكىم مۇھىتتىكى سۇ ئەۋرىشكىسىنى نازارەت قىلىشتا ئالدىنقى ئورۇنغا قويۇلۇشى مۇمكىن. شۇڭلاشقا ، تۆۋەن كىرىملىك ​​ۋە ئوتتۇرا كىرىملىك ​​دۆلەتلەردىكى سۇ ۋە پاسكىنا سۇ ئەۋرىشكىسىنى سىجىل ، دەل ۋاقتىدا نازارەت قىلىش ئۈچۈن يېڭىدىن ئەرزان باھالىق ئۇسۇللار قوللىنىلىشى مۇمكىن ، يېڭىدىن گۈللىنىۋاتقان كېسەللىكلەرنىڭ دەسلەپكى ئاگاھلاندۇرۇشى ، بۇ ئارقىلىق ئۇلارنى ۋىرۇسنىڭ تارقىلىشىنىڭ ئېغىر ئىجتىمائىي ئىقتىسادىي تەسىرىدىن قوغدايدۇ. يادرو كىسلاتاسىنىڭ تۆۋەن تەننەرخلىق ئېلېكتىرو خىمىيىلىك بىئولوگىيىلىك سېنزورى بۇ تولۇقلانمىغان ئېھتىياجنى ئۈمىد قىلىدىغان يوشۇرۇن ھەل قىلىش چارىسى بىلەن تەمىنلىيەلەيدۇ. ئەۋرىشكىدە ماس تەرتىپ بار بولغاندا يەر يۈزى ۋە بىرىكتۈرۈلىدۇ. بۇنىڭدىن كېيىن كالىي تۆمۈر / فېرروسىئانىد قاتارلىق قىزىل نۇر ۋاسىتىچىلىرى ئارقىلىق ھەر خىل ئېلېكتر خىمىيىلىك تېخنىكىلىرى ئارقىلىق سىگنالغا ئايلاندۇرالايدۇ. مېتىلېن كۆك (MB) مانا مۇشۇنداق قىزىل نۇر ئاكتىپ مولېكۇلانىڭ بىرى. دوكلاتتا دېيىلىشىچە ، قوش لىنىيىلىك DNA (dsDNA) غا ئۆز-ئارا مۇناسىۋەتلىك بولۇپ ، ئۇنىڭ تاق بەلۋاغلىق DNA بىلەن تېخىمۇ ئەھمىيەتسىز باغلىنىشىدىن باشقا ، 56. MB MB نىڭ ئۆز-ئارا گىرەلىشىپ كەتكەن MB-DNA قۇرۇلمىسىنى شەكىللەندۈرۈشى ئۇلارنى بىر نەچچە ئېلېكتر-خىمىيىلىك DNA دىكى قىزىل نۇر مۇرەسسەچىسى سۈپىتىدە ئالقىشقا ئېرىشكەن. سېنزور سەپلىمىسى 5،6،7،8،9. گەرچە MB نىڭ DNA بىلەن ئۆز-ئارا باغلىنىشى ئەھمىيەتسىز بولسىمۇ ، ئەمما بۇ ئېلېكتر خىمىيىلىك سېنزورنىڭ ئالاھىدىلىكى كۆپىنچە PCR ياكى ئىسسىقلىق بىلەن كۈچەيتىشتە ئىشلىتىلىدىغان پىرىمېرلارنىڭ ساپلىقىغا باغلىق ، ئۇ ھەقىقىي ئەمەلىيلەشتۈرۈشكە ماس كېلىدۇ. -ئۆزلۈك ئېلېكتىرو خىمىيىلىك ئاساس قىلىنغان qPCR ياكى فلۇئورېسسېنسىيە ئىسسىقلىق ئىسسىقلىق كۈچەيتىلىشى DNA قويۇقلۇقىنى ئۆلچەشنىڭ ئورنىغا 9 .بۇ خىل يولغا قويۇشنىڭ بىرىدە ، ۋون قاتارلىقلار. پەرقلىق تومۇر ۋولتاممىتىرى (DPV) ئارقىلىق MB بىلەن PCR ئامپىكوننى ئۆلچەش 9. باشقا ئەھۋاللاردا ، Ramirez قاتارلىقلار. ئېكراندا بېسىلغان ئېلېكترود بىلەن MB ئارقىلىق RT-LAMP رېئاكسىيەسى ئارقىلىق SARS-CoV-2 نى پاسكىنا سۇدا بايقاش. پىلاتىنا ئېلېكترودلىرىمۇ بار. مىكرو ئېلېكتر سۇيۇقلۇقى PCR سۇپىسىدىكى نەق مەيدان ئېلېكترودىغا ئوخشاش ئىشلىتىلىدۇ. رېئاكسىيە جەريانىدا ئامپلوننى ئېلېكتىرو خىمىيىلىك بايقاش ئۈچۈن لايىھىلەنگەن 8 .بۇ تەتقىقاتلارنىڭ ھەممىسى ئېلېكتر قۇتۇبىنى يەر يۈزىگە ئۆزگەرتىشنى تەلەپ قىلىدۇ ، بۇ ئىقتىدارلاشقان ئېلېكترودنىڭ مۇقىملىقىغا بولغان ئالاھىدە ساقلاش تەلىپى سەۋەبىدىن ئىشلەپچىقىرىش ۋە مەشغۇلات تەننەرخىنى ئاشۇرۇشنى كۆرسىتىدۇ.
كۆل سۈيى ئەۋرىشكىسىدىكى قويۇق ۋىرۇس زەررىچىلىرىدىن ئېلىنغان ئامپلوننى ئېلېكتىرو خىمىيىلىك تەكشۈرۈش خىزمىتىنىڭ سىخېمىسى.
بىز يېقىندا SARS-CoV-2 ئامپلوننىڭ تۆۋەن باھالىق باسما توك يولى تاختىسى (PCB) ئېلېكترود بىلەن DPV ۋە دەۋرىيلىك ۋولتاممېتىرىيە (CV) نى ئاساس قىلغان ئېلېكتر خىمىيىلىك سېزىمچانلىقىنى يۇقىرى پەللىدىكى MB-DNA مۇرەككەپ ماددىلىرىنىڭ سۈمۈرۈلۈشى كەلتۈرۈپ چىقارغان ئۆزگىرىشلەرنى كۆرسەتتۇق. current11.دوكلاتتا دېيىلىشىچە ، CDC تەۋسىيە قىلغان N1 ئالدى ۋە N2 تەتۈر پىرىسلانغان قىسقا پارچىلار {bp} \) ئارقىلىق شەكىللەنگەن ئۇزۇنراق DNA پارچىلىرى (N1-N2, \ ({943} \, \ hbox)) سېنزورنىڭ ئىنكاسىدا تېخىمۇ ياخشى سىزىقنى كۆرسىتىپ بەرگەن. (N1, \ (\ تەقلىدىي يۇندى ئەۋرىشكىسىدىكى 2 ئامپلون (ئومۇمىي RNA ئەۋرىشكىسىنى SARS-CoV-2 RNA بىلەن ئۇرۇپ ئېرىشىش ئارقىلىق ئېرىشىلگەن). RNA يەككە ۋە تۆۋەن ئېقىندا پىششىقلاپ ئىشلەش جەريانىدا ئاسانلا قىرقىلىدۇ ، 12،13 بۇ خىل ئوخشىمىغان ئەۋرىشكە بىلەن ئۇزۇن پارچىلارنى كېڭەيتىش تەس. شۇڭلاشقا ، كېرەكسىز سۇدا SARS-CoV-2 ئامپلوننىڭ ئېلېكترو خىمىيىلىك سېزىمىنىڭ نامايەندىسى قىسقا \ (72 \, \ hbox {bp} \) N1 پارچىسى بىلەنلا چەكلىنىدۇ.
بۇ ئەسەردە بىز ENIG PCB ئاساسىدىكى ئېلېكتىرو خىمىيىلىك سېزىمنىڭ Phi6 نىڭ قويۇقلۇقى ۋە كۆل سۈيىنىڭ ئەۋرىشكىسىدىن ئايرىۋېتىلگەنلىكىنى تەكشۈردۇق (1-رەسىم). ئۇنىڭدىن باشقا يەنە ياغ ئاقسىلى ۋە تاياقچە ئاقسىل بار. بۇ سەۋەبلەر تۈپەيلىدىن ، Phi6 باكتېرىيەسى SARS-CoV-2 ۋە باشقا ئورالغان كېسەللىك قوزغاتقۇچى RNA ۋىرۇسىنىڭ مودا بولغان ۋاكالىتەن ئىشلەيدىغان ۋاستىسى بولۇپ ، 14.15. PCR ئۇزۇنلۇقى 117 ۋە 503 ئاساسى جۈپتىن ئىبارەت ئىككى DNA پارچىسىنى قولغا كەلتۈرىدۇ. ئالدىنقى خىزمىتىمىزدە \ (943 \, \ hbox {bp} \) N1-N2 پارچىلىرىنى كېڭەيتىش خىرىسىغا دۇچ كەلدۇق ، بىز ئارىلىق ئۇزۇنلۇقتىكى بۆلەكلەرنى نىشانلىدۇق (\ (117) \, \ hbox {bp} \) ۋە \ (503 \, \ hbox {bp} \)) ، بار بولغان پىرىمېرلارنى ئاساس قىلغان. ئېلېكتىرو خىمىيىلىك سېنزور ئىنكاسى كەڭ قويۇقلۇق دائىرىسىدە سىستېمىلىق تەتقىق قىلىنغان (\ ({10} \, { \ hbox {pg} / {\ upmu \ hbox {l}}} \) دىن \ ({20} \, {\ hbox {ng} / {\ upmu \ hbox {l}}} \)) ھەر ئىككى پارچە MB نىڭ مەۋجۇتلۇقى ، تۇزنىڭ سېنزورنىڭ ئىنكاسىغا كۆرسىتىدىغان تەسىرى سپېكترو فوتومېتىر ئۆلچەش ئارقىلىق ئۆز-ئارا دەلىللەنگەن. بۇ ئەسەرنىڭ ئاساسلىق تۆھپىسى تۆۋەندىكىچە:
DNA پارچىسىنىڭ ئۇزۇنلۇقى ۋە ئەۋرىشكە تەركىبىدە تۇزنىڭ بارلىقى سەزگۈرلۈككە كۈچلۈك تەسىر كۆرسىتىدۇ.نەتىجىمىز شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، ئېلېكتر خىمىيىلىك پائالىيىتى MB ، DNA ۋە سېنزورنىڭ ۋولتاممېتىرىك ئىنكاسىدىكى ئۆز-ئارا تەسىرنىڭ ئوخشىمىغان مېخانىزىمىغا باغلىق بولۇپ ، DNA قويۇقلۇقى ۋە ئۇزۇنلۇقىغا ئاساسەن ، ئۇزۇنراق بۆلەكلەر سەزگۈرلۈكنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ، گەرچە تۇز ئېلېكتر سىستىما ئۆز-ئارا تەسىرگە پاسسىپ تەسىر كۆرسىتىدۇ. MB ۋە DNA.
DNA قويۇقلۇقى ئۆزگەرتىلمىگەن ئېلېكترودتىكى MB-DNA ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىش مېخانىزمىنى بەلگىلەيدۇ بىز MB-DNA ئۆز-ئارا تەسىرنىڭ ئوخشىمىغان مېخانىزملىرىنىڭ DNA قويۇقلۇقىغا باغلىق ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىمىز. DNA قويۇقلۇقى ئاز مىقداردىكى \ ({\ hbox {ng} / {\ upmu \ hbox {l}}} \) ، بىز ئېلېكتىرو خىمىيىلىك توكنىڭ ئىنكاسىنىڭ ئاساسلىقى ئېلېكترودتا MB-DNA نىڭ سۈمۈرۈلۈشى تەرىپىدىن بەلگىلىنىدىغانلىقىنى ، تۆۋەن قويۇقلۇقتا بولسا يۇقىرى DNA قويۇقلۇقىدا ، ئېلېكتر خىمىيىلىك توكنىڭ ئىنكاسىنىڭ قىزىل نۇرنىڭ ستېرېئولۇق چەكلىنىشى تەرىپىدىن بەلگىلىنىدىغانلىقىنى بايقىدۇق. DNA ئاساسى جۈپلەر ئارىسىدا MB قىستۇرۇش سەۋەبىدىن پائالىيەت.
كۆل سۇ ئەۋرىشكىسىدىكى ۋىرۇس يادرو كىسلاتاسىنىڭ ENIG PCB نى ئاساس قىلغان ئېلېكترو خىمىيىلىك سېزىمى بۇ كۆزىتىشلەر بومباي كۆلى ، IIT بومباي مەكتەپ رايونىنىڭ پوۋاي كۆلىدىكى سۇ ئەۋرىشكىسىدىن ئېلىنغان Phi6 قوشۇلغان \ (503 \, \ hbox {bp} \) DNA پارچىلىرىنى ئېلېكتىرو خىمىيىلىك تەكشۈرۈش ئارقىلىق دەلىللەندى. نەتىجە باسقۇچى.
ئىجرا قىلىنىش تەننەرخى تۆۋەن ۋە ساقلاش مۇددىتى ئۇزۇن بولغان ئېلېكترودتىكى تولۇق ئاپتوماتىك نازارەت سىستېمىسى ، ئولىگونوكلېئوتىد ياكى ئاپتاپپەرەسلەرگە بىرلەشتۈرۈش يوشۇرۇن كۈچى.
Phi6 باسقۇچى Cytoviridae جەمەتىنىڭ ئورالغان dsRNA ۋىرۇسى بولۇپ ، ئۇ Pseudomonas syringae نى يۇقۇملاندۇرىدۇ. \, \ hbox {Kb} \)) ۋە L (\ (6.37 \, \ hbox {Kb} \)) 16،17. تەجرىبىخانىدا ئاسانلا ئۆستۈرگىلى بولىدۇ. Phi6 Phi6 ۋە ئۇنىڭ ساھىبى Pseudomonas syringae Felix d'Herelle باكتېرىيە ۋىرۇسى پايدىلىنىش مەركىزى ، كانادا لاۋال ئۇنۋېرسىتىتى (پايدىلىنىش مەركىزىنىڭ مۇندەرىجە نومۇرى ئايرىم-ئايرىم ھالدا HER-102 ۋە HER-1102) دىن سېتىۋېلىندى. .Phi6 باسقۇچى ۋە ئۇنىڭ ساھىبى پايدىلىنىش مەركىزىنىڭ كۆرسەتمىسى بىلەن ئەسلىگە كەلتۈرۈلدى. Phi6 Phi6 تەخسە لىمزىسى ۋە سۈزۈش ئارقىلىق ساپلاشتۇرۇلۇپ ، \ (\ تەخمىنەن 10 ^ {12} \, {\ hbox {PFU} / \ hbox {) ml}} \). 100}, { بۇ زاپچاس تەمىنلىگەن 50} \, {{\ upmu \ hbox {l}}} \). RNA نىڭ قويۇقلۇقىنى (260 \ ، \ hbox {nm} \) دە سۈمۈرۈڭ. ({-80} \, {^ {\ circ} \ hbox {C}} \) داۋاملىق ئىشلىتىلگۈچە. \ ({2} \, {\ upmu \ hbox {g}} \) iScript cDNA بىرىكمە زاپچاس (Bio) -Rad تەجرىبىخانىسى) ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كۆرسەتمىسى بويىچە cDNA بىرىكتۈرۈشنىڭ قېلىپى سۈپىتىدە ئىشلىتىلگەن. قىسقىچە قىلىپ ئېيتقاندا ، cDNA بىرىكتۈرۈش ئىنكاسى 3 باسقۇچنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ: \ ({25} \, {^ {\ circ} \ hbox {C}} \ ) \ ({5} \, {\ hbox {min}} \) ، \ ({20} \, {\ hbox {min}} \) نىڭ \ ({46} \ } \ hbox {C}} \) ، ۋە تەتۈر خاتىرىلىگۈچ \ ({95} \, {^ {\ circ} \ hbox {C}} \) ئۈچۈن \ ({1} \, {\ hbox {min %}). miniPCR® mini8 ئىسسىقلىق ۋېلىسىپىت مىنىش ماشىنىسىدا cDNA نى PCR ئۈچۈن قېلىپ قىلىپ ئىشلىتىش:
\ (117 \, \ hbox {bp} \) ۋە \ (503 \, \ hbox {bp} \) نىڭ دەسلەپكى كۆرسەتكۈچلىرى M بۆلەكنىڭ 1476-1575 يادروسى ۋە L بۆلىكىنىڭ 458-943 يادروغا ماس كېلىدۇ. . كۈچەيتىلگەن PCR مەھسۇلاتلىرىنىڭ ھەممىسى% 1 لىك ئاگاروزا گېلىدا ئېلېكترو فوردلانغان ، كۈچەيتىلگەن نىشان DNA GeneJET گېلى ئېلىش زاپچىسى (Thermo Fisher Scientific) ئارقىلىق ساپلاشتۇرۇلغان.
IIT بومباي مەكتەپ رايونىدىكى بىر كۆل (پوۋاي كۆلى ، پوۋاي ، بومباي) باسقۇچلۇق زەررىچىلەرنى قوشۇشقا ئىشلىتىلگەن. كۆل سۈيى \ ({5} \, {\ upmu \ hbox {m}} \) پەردىسى ئارقىلىق سۈزۈلۈپ چىقىرىۋېتىلدى. توختىتىلغان زەررىچىلەر ، ئاندىن Phi6 باسقۇچى قوشۇلدى. \ (10 ​​^ {6} \, {\ hbox {PFU} / \ hbox {ml}} نىڭ \ ({1} \, {\ hbox {ml}} \) \) دىن \ ({100} \, {\ hbox {ml}} \) سۈزۈلگەن كۆل سۈيى ، \ ({4} \, {^ {\ چەمبىرەك} \ hbox {C}} \). تاختاي ئارقىلىق ۋىرۇسنىڭ يۈكىنى ئۆلچەش ئۈچۈن ساقلانغان. بىز ئوخشىمىغان ئىككى خىل ئۇسۇلنى سىناق قىلىپ ، تاياقچە Phi6 ۋىرۇسى زەررىچىلىرىنى مەركەزلەشتۈردۇق: (1) ئاليۇمىن گىدروكسىدنىڭ سۈمۈرۈلۈش-ھۆل-يېغىن ئۇسۇلى ، 19 خىل مۇھىت ئەۋرىشكىسىدىن بىر نەچچە ئورالغان RNA ۋىرۇسىنىڭ قويۇقلۇقى دەلىللەنگەن. (2) پولىئېتىلېن گلىكول (PEG) ئاساس قىلىنغان ۋىرۇس قويۇقلۇقى ئۇسۇلى كەلكۈن قاتارلىقلاردىن ماسلاشتۇرۇلغان..
ئىشلىتىلگەن PEG ئۇسۇلى تۆۋەندىكىچە: PEG 8000 ۋە \ (\ hbox {NaCl} \) Phi6 شەكىللىك كۆل سۇ ئەۋرىشكىسىگە قوشۇلۇپ ،% 8 PEG 8000 ۋە \ (0.2 \, \ hbox {M} \) \ ( \ hbox {NaCl} \). ئەۋرىشكىلەر تەۋرىنىشكە قىستۇرۇلدى \ ) ، ئاندىن مەركەزلەشتۈرۈلگەن \ (4700 \, \ hbox {g} \) بولسا \ ({45} \, {\ hbox {min}} \). خاسىيەتلىك كېمىنى تاشلاپ ، \ ({1} \ ئوخشاش خاسىيەتلىك ماددا {\ hbox {ml}} \). بارلىق پۈركۈش ۋە ۋىرۇس قويۇقلۇقى تەجرىبىسى ئۈچ قېتىمدا ئېلىپ بېرىلدى. قويۇقلاشقاندىن كېيىن ، كىچىككىنە ئالكوك تاختاي ئارقىلىق ئەسلىگە كەلتۈرۈش ئۈنۈمىنى ئۆلچەش ئۈچۈن ساقلاپ قېلىندى. RNA ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەن ۋە چىقىرىۋېتىلگەن. يۈرۈشلۈك زاپچاسلار بىلەن تەمىنلەنگەن بۇففېر \ ({40} \, {\ upmu \ hbox {l}} \). RNA نىڭ hbox {l}} \) ئەۋرىشكىسىنىڭ قويۇقلۇقى cDNA بىرىكتۈرۈلۈشىدىن قەتئىينەزەر ئۈچى ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ. CDNA بىرىكتۈرۈش ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك ئېلىپ بېرىلدى. \ ({1} \, {\ upmu \ hbox {l}} \) cDNA \ ({20} \, {\ upmu \ hbox {l}} \) PCR نىڭ 35 دەۋرىيلىكى ئۈچۈن \ (117 \, \ hbox {bp} \) ۋە \ (503 \, \ hbox {) ئۈچۈن قېلىپ سۈپىتىدە ئىشلىتىلگەن. bp} \) پارچىلىرى. بۇ ئەۋرىشكەلەر «1: 1 as» ، يەنى سۇيۇلدۇرۇلماي ئىپادىلىنىدۇ. قېلىپسىز كونترول (NTC) سەلبىي كونترول قىلىپ قۇرۇلدى ، ساپلاشتۇرۇلغان باسقۇچتىن ئايرىپ RNA ئارقىلىق بىرىكتۈرۈلگەن cDNA قۇرۇلدى. ئاكتىپ كونترول (PC) نىڭ قېلىپى سۈپىتىدە. مىقدارلاشقان PCR (qPCR) Stratagene Mx3000P RT-PCR قورالىدا Brilliant III Ultra-Fast SYBR يېشىل QPCR Master Mix (Agilent Technologies) ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. ئىنكاسلار ئىلگىرىكىگە ئوخشاش ئۈچ خىل ھالەتتە قۇرۇلدى. تەسۋىرلەنگەن. بارلىق ئەۋرىشكە ئۈچۈن دەۋرىيلىك بوسۇغىسى (Ct) خاتىرىلەنگەن. بۇنىڭدىن باشقا ، سۇيۇقلاندۇرۇلغان ئەۋرىشكە سۈزۈلگەن كۆل سۈيىدە 1: 100 سۇيۇقلاندۇرۇلغان cDNA ئارقىلىق \ ({1} \, {\ upmu \ hbox {l}} \) \ ({20} \, {\ upmu \ hbox {l}} \) PCR 35 دەۋرىيلىك. بۇ ئەۋرىشكەلەر «1: 100 ″» شەكلىدە ئىپادىلىنىدۇ.
PCB ئېلېكترودلىرى سودىدا ئەرزان باھالىق ئېلېكتروسىز نىكېل چۆمۈلدۈرۈش ئالتۇن (ENIG) ئارقىلىق ياسالغان بولۇپ ، قوشۇمچە ئالتۇن يالىتىشنىڭ ھاجىتى يوق. پىرانخا ئېرىتمىسى ياكى گۈڭگۈرت كىسلاتاسى دەۋرىي ۋولتمېتىرىيىسى تەۋسىيە قىلىنمايدۇ ، چۈنكى ئۇلار نېپىز ئالتۇن قەۋىتىنىڭ (قېلىنلىقى \ (\ تەخمىنەن \) \ (100 \ چىرىشنىڭ 21 ، 22 ، 23 ، 24 ، 25. \ \) MB دىكى \ ({4} \, {^ {\ circ} \ hbox {C}} \) \ ({1} \, {\ hbox {h}} \) دىكى MB بىز MB نىڭ قويۇقلۇقى 11 نى ئاشۇرۇش ئارقىلىق سېنزورنىڭ سەزگۈرلۈكى ۋە تۈزلىكىنىڭ ياخشىلانغانلىقىنى كۆردۇق. ئالدىنقى خىزمىتىمىزدە دوكلات قىلىنغان ئەلالاشتۇرۇشنى ئاساس قىلىپ ، بىز \ ({50} \, {\ upmu \ hbox {M}} \) MB نى ئىشلەتتۇق. بۇ تەتقىقاتتا DNA نى سىڭدۈرۈشنىڭ قويۇقلۇقى. قوش يۆنىلىشلىك DNA (ds-DNA) نى ئېلېكتىرو خىمىيىلىك بايقاش ئارقىلىق ئانون ياكى كاتەكچە ئۆز-ئارا ماسلاشتۇرغۇچ ئارقىلىق ئېرىشكىلى بولىدۇ. يەنە بىر جەھەتتىن ، MB غا ئوخشاش ئۆز-ئارا ماسلاشتۇرغۇچ ds-DNA6 نىڭ ئېلېكتىرو خىمىيىلىك تەكشۈرۈشى ئۈچۈن تەخمىنەن \ ({1} \, {\ hbox {h}} \) يوشۇرۇن يوشۇرۇن ۋاقىتنى تەلەپ قىلىدۇ. ھەر بىر ئۆلچەش ئەۋرىشكىسى تارقىتىشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. ئېلېكترود \ ({5} \, {{\ upmu \ hbox {l}}} \) ، ئاندىن IPA نەملەنگەن لاتا بىلەن تازىلاپ ، باشقا ئەۋرىشكە ئېلىپ مېڭىشتىن بۇرۇن.بىر ئۆلچەش. ھەر بىر ئەۋرىشكە ئوخشىمىغان 5 خىل ئېلېكترودتا سىناق قىلىندى. باشقىچە دېيىلمىگەن بولسا .DPV ۋە CV ئۆلچەشلىرى PalmSens Sensit Smart potentiostat ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى ، PSTrace يۇمشاق دېتالى potentiostat سەپلىمىسى ۋە سانلىق مەلۇماتقا ئېرىشىش ئۈچۈن ئىشلىتىلدى ، نۆۋەتتىكى چوققا ھېسابلاشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. تۆۋەندىكى تەڭشەكلەر ئىشلىتىلىدۇ. DPV ۋە CV ئۆلچەش ئۈچۈن:
DPV: تەڭپۇڭلۇق ۋاقتى = \ (8 \, \ hbox {s} \) ، توك بېسىمى = \ (3 \, \ hbox {mV} \) ، تومۇر بېسىمى = \ (25 \ ، \ hbox {mV} \) ، تومۇرنىڭ داۋاملىشىش ۋاقتى = \ (50 \, \ hbox {ms} \) ، تەكشۈرۈش نىسبىتى = \ ({20} \, \ hbox {mV / s} \)
CV: تەڭپۇڭلۇق ۋاقتى = \ (8 \, \ hbox {s} \) ، توك بېسىمى باسقۇچى = \ (3 \, \ hbox {mV} \) ، سۈپۈرۈش نىسبىتى = \ ({300} \, \ hbox {mV / s } \)
\ ({50} \, {\ upmu \ hbox {M}} \) MB: (503 \, \ hbox {bp} \) CV, (c) \ (117 \, \ hbox {bp} \) DPV, (d) \ (117 \, \ hbox {bp} \) CV.
DPV ۋە CV ۋولتامگراممىلىرى ENIG PCB ئېلېكترودلىرى ({50} \, {\ upmu \ hbox {M}} \) MB دا DNA بىلەن مۇرەككەپلەشتۈرۈلگەن (10 - \ ({20} \, {\ hbox {ng) } / {\ upmu \ hbox {l}}} \) يەنى 0.13 - \ ({0.26} \, {\ upmu \ hbox {M}} \) ئۈچۈن \ (117 \, \ hbox {bp} \) ۋە 0.03 - \ ({0.06} \, {\ upmu \ hbox {M}} \) ئۈچۈن \ (503 \, \ hbox {bp} \)). گېلى ساپلاشتۇرۇلغان PCR مەھسۇلاتلىرىنى ئىشلىتىپ DPV ۋە CV ئۆلچەش (چوققا ئېقىمى). CV ئۆلچەش بىلەن سېلىشتۇرغاندا ، DPV ئۆلچەش تېخىمۇ يۇقىرى سەزگۈرلۈكنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (توك DNA قويۇقلۇقىنىڭ رولى سۈپىتىدە) ، چۈنكى CV ئۆلچەشتىكى تەگلىك توك ئېقىمى فاراداك ئېقىمىنى يوشۇرىدۇ. 26. سانلىق مەلۇمات بۇ ساندۇقتىكى ھەر بىر قۇتا 5 ئېلېكترودتىن كەلگەن ئۆلچەمنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. بارلىق ئۆلچەشلەر ئوخشاش بىر يۈرۈش ئېلېكترودنى ئىشلىتىپ ئېلېكتر قۇتۇبىدىن ئېلېكترودنىڭ ئۆزگىرىشى سەۋەبىدىن ئۆلچەش خاتالىقىدىن ساقلىنىدۇ. ، ئۇزۇنراق (\ (503 \, \ hbox {bp} \)) \, \ hbox {bp} \ \ (117)) پارچىسىغا سېلىشتۇرغاندا. بۇ ئالدىنقى خىزمىتىمىزدە دوكلات قىلىنغان ئېلېكترود سۈمۈرۈلۈش مۆلچەرىگە ماس كېلىدۇ. MB-DNA گۇرۇپپىسىنىڭ سۈمۈرۈلۈشى ئېلېكتر قۇتۇبىدا توك يۆتكەشنى ئاسانلاشتۇرىدۇ ، بۇ چوققا توكنىڭ ئېشىشىغا تۆھپە قوشىدۇ. باشقا تەتقىقاتلاردا ئولىگونۇكلېئوتىدنىڭ چوڭ-كىچىكلىكى ۋە تەرتىپىنىڭ MB-DNA ئۆز-ئارا تەسىرگە كۆرسەتكەن تەسىرى 27،28،29،30،30. -سوتوسىن (GC) ئىككى ئامپلوننىڭ (\ (117 \, \ hbox {bp} \) ۋە \ (503 \, \ hbox {bp} \) نىڭ مەزمۇنى تەخمىنەن% 50 بولۇپ ، كۆزىتىش پەرقىنىڭ مۇۋاپىق ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ئامپلوننىڭ ئۇزۇنلۇقىغا. قانداقلا بولمىسۇن ، تېخىمۇ يۇقىرى DNA قويۇقلۇقى ئۈچۈن (\ (> {2} \, {\ hbox {ng} / {\ upmu \ hbox {l}}} \) ، \ (503 \, \ hbox {bp}) \) ۋە \ (> {10} \, {\ hbox {ng} / {\ upmu \ hbox {l}}} \) ئۈچۈن \ (117 \, \ hbox {bp} \)) ، بىز ئىككى خىل كۈچەيتىلگەن DPV ۋە CV ئۆلچەشتە تارماق ئېقىننىڭ چوققا ئېقىمى تۆۋەنلەيدۇ. بۇنىڭ سەۋەبى MB ئاساسى جۈپ جۈپلەر ئارىسىدا تويۇنغان ۋە ئۆز-ئارا گىرەلىشىپ كەتكەنلىكتىن ، MB31،32 دىكى ئازايتقىلى بولىدىغان گۇرۇپپىنىڭ قايتا قوزغىلىش ھەرىكىتىنى قاتتىق چەكلىگەن.
在 存在 \ (2 \, \ hbox {mM} \) \ ({\ hbox {MgCl} _2} \): (a) \ (503 \, \ hbox {bp} \) DPV, (b) \ (503 \, \ hbox {bp} \) CV, (c) \ (117 \, \ hbox {bp} \) DPV ， (d) \ (117 \, \ hbox {bp} \) CV。
PCR ئۇستازىدا بار بولغان تۇزلار MB بىلەن DNA ئارىسىدىكى ئېلېكتر سىتاتىك ئۆز-ئارا تەسىرگە تەسىر كۆرسىتىدۇ ، شۇڭا \ (2 \, \ hbox {mM} \) \ (\ hbox {MgCl} _2 \) نى \ ({50} \, {\) بىلەن قوشۇش ئارقىلىق. upmu \ hbox {M}} \) MB گېلى ساپلاشتۇرۇلغان مەھسۇلات تۇزنىڭ MB-DNA ئۆز-ئارا تەسىرگە بولغان تەسىرىنى تەتقىق قىلىدۇ. 3-رەسىمدە كۆرسىتىلگەندەك ، بىز تېخىمۇ يۇقىرى DNA قويۇقلۇقى ئۈچۈن (\ (> {2} \, {\) hbox {ng} / {\ upmu \ hbox {l}}} \) (503 \, \ hbox {bp} \) ۋە \ (> {10} \, {\ hbox {ng} / {\ upmu \ hbox { l}}} \) ئۈچۈن \ (117 \, \ hbox {bp} \)) ، DPV ۋە CV دا تۇزنىڭ قوشۇلۇشى ئۆلچەشكە كۆرۈنەرلىك تەسىر كۆرسىتەلمىدى (ۋەكىللىك ۋولتامگراممىلارنىڭ قوشۇمچە ئۇچۇرلىرىدىكى S2 رەسىمگە قاراڭ). قانداقلا بولمىسۇن ، DNA نىڭ قويۇقلۇقى تۆۋەنرەك ، تۇزنىڭ قوشۇلۇشى سەزگۈرلۈكنى زور دەرىجىدە تۆۋەنلىتىدۇ ، نەتىجىدە DNA قويۇقلۇقى بىلەن توكتا كۆرۈنەرلىك ئۆزگىرىش بولمايدۇ. تۇزنىڭ MB-DNA ئۆز-ئارا تەسىر قىلىشى ۋە ئۆز-ئارا تەسىرگە ئوخشاش سەلبىي تەسىرى ئىلگىرى باشقا تەتقىقاتچىلار تەرىپىدىن دوكلات قىلىنغان .3،34. \ (\ hbox { Mg} ^ {2 +} \) كاتېگورىيىسى DNA نىڭ مەنپىي فوسفات ئومۇرتقىسى بىلەن تۇتىشىدۇ ، بۇ ئارقىلىق MB بىلەن DNA ئوتتۇرىسىدىكى ئېلېكترو سىتاتىك ئۆز-ئارا تەسىرگە توسالغۇ بولىدۇ. سېنزورنىڭ ئىنكاسىغا كۆرۈنەرلىك تەسىر كۆرسەتمەڭ. مۇھىم نۇقتا شۇكى ، بۇ بىئولوگىيىلىك سېنزور تېخىمۇ يۇقىرى DNA قويۇقلۇقىنى بايقاشقا تېخىمۇ ماس كېلىدۇ (ناھايىتى ئاز \ ({\ hbox {ng} / {\ upmu \ hbox {l}}} \) ياكى ئۇنىڭدىن يۇقىرى) ، مۇھىت سۇ ئەۋرىشكىسىنى تولۇق بىر تەرەپ قىلىش ئۈچۈن ، PCR مەھسۇلاتلىرىنى گېلى تازىلاش مۇمكىن ئەمەس.
دولقۇن ئۇزۇنلۇقى 600-700 \ (\ hbox {nm} \) نىڭ سۈمۈرۈلۈش ئەگرى سىزىقىدىكى رايون \ ({50} \, {\ upmu \ hbox {M}} \) MB: (a ) \ (503 \, \ hbox {bp} \) تۇزسىز ۋە (\ (2 \, \ hbox {mM} \) \ \ hbox {bp} \) تۇزسىز ۋە (\ (2 \, \ hbox {mM} \) \ (\ hbox {MgCl} _2 \)). \ ({0} \, {\ hbox {pg} / {\ upmu \ hbox {l}}} \) \ ({50} \, {\ upmu \ hbox {M}} \) ماس كېلىدىغان DNA قويۇقلۇقى DNA يوق.
يۇقارقى نەتىجىلەرنى تېخىمۇ ئېنىقلاش ئۈچۈن ، بىز UV / Vis سپېكترو فوتومېتىر (تېرمو ئىلمىي Multiskan GO) ئارقىلىق ئوپتىكىلىق ئۆلچەش ئېلىپ باردۇق ، ئەۋرىشكە \ ({50} \, {{\ upmu \ hbox {l}}} \) ئۆلچەش. DNA قويۇقلۇقىنىڭ ئېشىشىغا ئەگىشىپ سۈمۈرۈلۈش ئىمزاسى تۆۋەنلەيدۇ ، بۇ دولقۇن ئۇزۇنلۇقى دائىرىسى (600 \, \ hbox {nm} \) دىن \ (700 \, \ hbox {) نىڭ سۈمۈرۈلۈش ئەگرى سىزىقىدىكى رايوننىڭ يۈزلىنىشىدىن كۆرۈۋېلىشقا بولىدۇ. nm} \) ، 4-رەسىمدە كۆرسىتىلگەندەك (قوشۇمچە ئۇچۇردىكى S3 رەسىمدە كۆرسىتىلگەن سۈمۈرۈلۈش سپېكترى). DNA قويۇقلۇقى \ ({1} \, {\ hbox {ng} / {\ upmu \ hbox دىن تۆۋەن ئەۋرىشكە ئۈچۈن {l}}} \) ، DNA بار ۋە پەقەت MB ئەۋرىشكىسى (\ (503 \, \ hbox {bp} \) ۋە \ (117 \, \ hbox {bp} \ ) ئۇزۇنلۇقى پارچىلىرى) ، قىزىل نۇر ئاكتىپ MB نىڭ ستېرېئولۇق چەكلىنىشىنىڭ يوقلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. DNA قويۇقلۇقى يۇقىرى بولغاندا ، بىز سۈمۈرۈلۈش سىگنالىنىڭ تەدرىجىي تۆۋەنلىگەنلىكىنى بايقىدۇق ۋە تۇز بار ۋاقىتتا سۈمۈرۈلۈشنىڭ تۆۋەنلىگەنلىكىنى بايقىدۇق. بۇ نەتىجىلەر مولېكۇلا بىلەن مۇناسىۋەتلىك. DNA ئارىلاش ماتورلۇق ماددىلارنىڭ ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىشى ۋە ستېرېئولۇق چەكلىنىشى. بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز ئەدەبىياتتىكى MB-DNA ئۆز-ئارا تەسىرنىڭ سپېكتروسكوپ تەتقىقاتى توغرىسىدىكى دوكلات بىلەن بىردەك بولۇپ ، قاندىكى ماينىڭ تۆۋەنلىشى بىلەن \ (\ pi \) - \ (\ pi ^ * \ ) 36 ، 37 ، 38 قەۋەتلەر ئارا ئېلېكترونلۇق ئۆتۈشۈش.
Phi6 باسقۇچىدىكى ئاگاروزا گېلى ئېلېكتروفورىسى: PCR نىڭ ئۇزۇنلۇقى \ (117 \, \ hbox {bp} \) ۋە \ (503 \, \ hbox {bp} \) كۆل سۇ ئەۋرىشكىسىدىن. M-DNA بەلگىسىNTC- قېلىپنى كونترول قىلىش ، ماس كېلىدىغان ئامپلوننى ئۆز ئىچىگە ئالغان پىرىمېرلارPC ئاكتىپ كونترول1 ، 2 ، 3 سۇيۇلدۇرۇلمىغان (1: 1) ئۈچ ھەسسە ئۆرۈلگەن كۆل سۈيىنىڭ ئەۋرىشكىسى. \ (\ 503 \, \ hbox {bp} \) يولى.
بىز Powai Lake سۇ ئەۋرىشكىسىدىن پايدىلىنىپ ، سېنزورنىڭ ئىشلىتىلىشچانلىقىنى باھالىدۇق. باسقۇچلۇق سۇ ئەۋرىشكىسىدىن ئايرىلغان RNA قويۇقلۇقى 15.8 - \ ({19.4} \, {\ upmu \ hbox {g} / \ hbox {) ml}} \) ، ساپلاشتۇرۇلغان باسقۇچلۇق ئاسما جازادىن ئايرىۋېتىلگەنلەر RNA نىڭ ئەسلىگە كېلىش ئۈنۈمى تەخمىنەن 1 ({1945} \, {\ upmu \ hbox {g} / \ hbox {ml}} \) دەپ مۆلچەرلەندى . شۇنداقلا قىزىقىش ئامپلونلىرى. qPCR (1-جەدۋەل) دە خاتىرىلەنگەن Ct قىممىتى ماس ھالدىكى سۇ ئەۋرىشكىسىدىن ئايرىۋېتىلگەن RNA نىڭ قويۇقلۇقى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكى كۆرسىتىلدى. چەكتىن ئېشىپ كېتىش ياكى تەگلىك سىگنالىدىن ئېشىپ كېتىش. Higher Ct قىممىتى تۆۋەن قېلىپنىڭ قويۇقلۇقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. NTC ئەۋرىشكىسىنىڭ Ct قىممىتى مۆلچەردىكىدەك يۇقىرى بولدى. \ (\ تەخمىنەن 3 \) Ct قىممىتى ئوتتۇرىسىدىكى پەرق مۇسبەت كونترول قىلىش ۋە سىناق ئەۋرىشكىسى يەنە بىر سىناق ئەۋرىشكىسىنىڭ مۇسبەت كونترولغا سېلىشتۇرغاندا تەخمىنەن% 1 قېلىپنىڭ بارلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. بىز ئىلگىرى ئۇزۇن ئامپلوننىڭ تېخىمۇ ياخشى سەزگۈرلۈكنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغانلىقىنى مۇلاھىزە قىلغان ئىدۇق. ۋىرۇسنىڭ قويۇقلۇقى ۋە RNA نىڭ تۆۋەنلىشىنىڭ قانداق بولۇشىدىن قەتئىينەزەر ، قانداقلا بولمىسۇن ، ۋىرۇسنى بېيىتىش ۋە PCR كۈچەيتىش كېلىشىمنامىسى ئارقىلىق ، ئېلېكتر خىمىيىلىك سېزىش ئۈچۈن \ (503 \, \ hbox {bp} \) پارچىسىنى مۇۋەپپەقىيەتلىك ھالدا كۈچەيتتۇق.
6-رەسىمدە \ (503 \, \ hbox {bp} \) بۆلەك ئامپلوننىڭ ئېلېكتر خىمىيىلىك سېنزور نەتىجىسى كۆرسىتىلدى ، ھەر ئىككىسى سۈزۈلمىگەن cDNA نى قېلىپ قىلىپ (1: 1) ، 100 ھەسسە سۇيۇقلاندۇرۇلغان cDNA نى قېلىپ قىلىپ (1: 100) PCR قىلدى. ، NTC ۋە PC غا سېلىشتۇرغاندا (ۋەكىللىك ۋولتامگراممىنىڭ قوشۇمچە ئۇچۇرلىرىدىكى S4 رەسىمگە قاراڭ). 6-رەسىمدىكى ساندۇق ساندۇقىدىكى ھەر بىر قۇتا 5 ئېلېكترودتىكى ئۈچ ئەۋرىشكىنىڭ ئۆلچەش ئەسۋابىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. ئوخشاش ئېلېكترود ئېلېكترود سەۋەبىدىن خاتالىقنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن بارلىق ئەۋرىشكىلەرنى ئۆلچەشكە ئىشلىتىلگەن. ئېلېكتر قۇتۇبىنىڭ ئۆزگىرىشى. CV ئۆلچەش بىلەن سېلىشتۇرغاندا ، DPV ئۆلچەش سىنىقى ۋە PC ئەۋرىشكىسىنى NTC دىن پەرقلەندۈرۈشنىڭ تېخىمۇ ياخشى ئېنىقلىق دەرىجىسىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ، چۈنكى يۇقىرىدا دېيىلگەندەك ، فاراداك ئېقىمى كېيىنكى تەگلىك توك ئېقىمى سەۋەبىدىن يوشۇرۇنغان. مەنپىي كونترول (NTC) مۇسبەت كونترولغا سېلىشتۇرغاندا تېخىمۇ يۇقىرى CV ۋە DPV چوققا ئېقىمىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى ، ئەمما مۇسبەت ۋە لاياقەتسىز سىناق ئەۋرىشكىسى DPV چوققا ئېقىمىنىڭ چوققا ئېگىزلىكىنى كۆرسىتىپ بەردى. ) سىناق ئەۋرىشكىسى ۋە PC نى NTC ئەۋرىشكىسىدىكى سېنزور چىقىرىشتىن ئېنىق ھەل قىلغىلى بولىدۇ ، ھالبۇكى 1: 100 سۇيۇقلاندۇرۇلغان ئەۋرىشكىنىڭ ئېنىقلىق دەرىجىسى ئانچە كۆرۈنەرلىك ئەمەس. cDNA نىڭ 100 ھەسسىلىك سۇيۇلۇشى ئۈچۈن ، بىز گېلى ئېلېكترو فورمىسى جەريانىدا ھېچقانداق بەلۋاغنى بايقىمىدۇق. . كونترول PCB سېنزورىدىن ئېلېكترو خىمىيىلىك ئىنكاس پەيدا قىلدى ، ئېلېكتر قۇتۇبىدا ھەقسىز MB نىڭ سۈمۈرۈلۈشى ۋە MB نىڭ تاق يۆنىلىشلىك پرېسلانغان oligonucleotide بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر قىلىشى سەۋەبىدىن. شۇڭلاشقا ، ھەر قېتىم ئەۋرىشكە سىناق قىلىنغاندا چوقۇم پاسسىپ كونترول قىلىش ۋە ئىجرا قىلىش كېرەك. سىناق ئەۋرىشكىسىنىڭ چوققا ئېقىمى مەنپىي كونترول قىلىش ئارقىلىق ئېرىشكەن چوققا ئېقىمىغا سېلىشتۇرغاندا پەرقلىق (نىسپىي) ئۆلچەشنى ئەمەلگە ئاشۇرۇش ئۈچۈن 39،40 نى سىناق ئەۋرىشكىسىنى مۇسبەت ياكى مەنپىي دەپ تۈرگە ئايرىش.
(a) DPV ، ۋە (b) كۆل سۈيى ئەۋرىشكىسىدىكى \ (503 \, \ hbox {bp} \) پارچىلىرىنى ئېلېكتىرو خىمىيىلىك تەكشۈرۈشنىڭ CV چوققا ئېقىمى. سىناق ئەۋرىشكىسى ئۈچ ھەسسە ئۆلچەم قىلىنغان بولۇپ ، ھېچقانداق قېلىپ كونتروللۇقى (NTC) بىلەن سېلىشتۇرۇلمىغان. مۇسبەت كونترول (PC).
بىزنىڭ تەتقىقاتىمىز ئوخشىمىغان DNA نىڭ ئوخشىمىغان ئۇزۇنلۇقتىكى ئامپلوننىڭ ئېلېكتر خىمىيىلىك سېنزورىنىڭ ئىقتىدارىغا تەسىر كۆرسىتىدىغان ئوخشىمىغان مېخانىزملارنى تەسۋىرلەپ بەردى ، قويۇقلۇقى ئۇلترا بىنەپشە نۇر / Vis سپېكترو فوتومېتىر ئارقىلىق ئوپتىكىلىق ئۆلچەش ئارقىلىق دەلىللەندى. \ (500 \, \ hbox {bp} \) تېخىمۇ يۇقىرى سەزگۈرلۈك بىلەن بايقىغىلى بولىدۇ ھەمدە ئەۋرىشكە تەركىبىدە تۇزنىڭ بارلىقى سەزگۈرلۈكنىڭ DNA قويۇقلۇقىنىڭ يۇقىرى سەزگۈرلۈككە تەسىر كۆرسىتەلمەيدۇ (ناھايىتى ئاز \ ({\ hbox {ng} / {\ upmu) \ hbox {l}}} \) ۋە ئۇنىڭدىن يۇقىرى). بۇنىڭدىن باشقا ، بىز ئوخشىمىغان تۈردىكى ئەۋرىشكىلەرنىڭ تەسىرىنى تەكشۈردۇق ، مەسىلەن گېلى ساپلاشتۇرۇلغان ئامپلون تۇز قوشمىغان ۋە قوشۇلمىغان ، ھەمدە DPV ۋە CV ئۆلچەشتە كۆل سۇ ئەۋرىشكىسى قوشۇلغان.بىز DPV نىڭ تېخىمۇ ياخشى ئېنىقلىق بىلەن تەمىنلىگەنلىكىنى بايقىدۇق ، چۈنكى تەگلىك سىغىمچان توكمۇ CV ئۆلچەشكە تەسىر كۆرسىتىپ ، سەزگۈرلۈكنى تۆۋەنلىتىدۇ.
ئۇزۇن پارچىلارنى كېڭەيتىش ۋىرۇس گېن گۇرۇپپىسىنىڭ RNA نىڭ مۇكەممەللىكىگە باغلىق. بەزى تەتقىقاتلاردا ئىسپاتلىنىشىچە ، مۇھىتتىكى RNA نىڭ ناچارلىشىشى ۋە ئايرىلىش جەريانىدا چېچىش ئېھتىماللىقى سەۋەبىدىن ئۇزۇن پارچىلارنى كېڭەيتىش ھەمىشە ئۈنۈملۈك بولمايدىكەن. . بىز PEG نى ئاساس قىلغان ۋىرۇس قويۇقلۇقى ئۇسۇلىنىڭ ئاليۇمىن گىدروكسىدنى ئاساس قىلغان ۋىرۇس قويۇقلۇقىغا قارىغاندا كۆل سۈيىنىڭ ئەۋرىشكىسىدە پۈركەنگەن Phi-6 باسقۇچىنى مەركەزلەشتۈرۈشتە تېخىمۇ ئۈنۈملۈك ئىكەنلىكىنى بايقىدۇق. ئۇزۇن DNA پارچىلىرىنى بايقاش ئىقتىدارى كۆپ ئىقتىدارلىق PCR تەلىپىنى يېڭىدىغانلىقىنى ئىسپاتلىدى. كۆپ قىسقا ئۇزۇنلۇقتىكى قېلىپلارنى كېڭەيتىپ ، ئۆز-ئارا ماسلىشىش ئېھتىماللىقىنى تۆۋەنلىتىش.
بىئولوگىيىلىك ئەۋرىشكە كەمچىل ، شۇڭا سىناق قىلىش ئۈچۈن ئەڭ ئاز ئەۋرىشكە تەلەپ قىلىدىغان بىئولوگىيىلىك سېنزور لايىھىلەشنىڭ ئېھتىياجى بار. بۇ تەتقىقاتتا ئىشلىتىلگەن ENIG PCB ئېلېكترود پەقەت \ ({5} \, {{\ upmu \ hbox {l}}} \) تەلەپ قىلىدۇ ) ئېلېكترودنىڭ ئۈنۈملۈك رايونىنى قاپلاش ئۈچۈن سىناق ئەۋرىشكىسى. بۇنىڭدىن باشقا ، كېيىنكى ئەۋرىشكىنى تارقىتىشتىن بۇرۇن ئوخشاش ئېلېكترودنى تازىلاپ بولغاندىن كېيىن قايتا ئىشلەتكىلى بولىدۇ. كۈچەيتىلگەن ئەۋرىشكەلەردە مېتىلېن كۆكتىن باشقا خىمىيىلىك ماددىلارنىڭ قوشۇلۇشى تەلەپ قىلىنمايدۇ ، بۇ ئەرزان. ھەمدە ئادەتتە ئىشلىتىلىدىغان خىمىيىلىك بۇيۇملار. ھەر بىر ئېلېكترودنىڭ ئىشلەپچىقىرىش ئۈچۈن تەخمىنەن 0.55 دوللار (ياكى INR 40) چىقىم قىلىدىغان بولغاچقا ، بۇ بىئولوگىيىلىك سېنزور ھازىرقى بايقاش تېخنىكىسىنىڭ تەننەرخى يۇقىرى ئۈنۈملۈك تاللاش بولالايدۇ. 2-جەدۋەلدە بۇ ئەسەرنىڭ ئەدەبىياتتا دوكلات قىلىنغان باشقا سېنزورلار بىلەن سېلىشتۇرۇلغانلىقى كۆرسىتىلدى. ئوخشىمىغان ئەۋرىشكىلەردىكى DNA پارچىلىرى.
MB نى ئاساس قىلغان ئېلېكتىرو خىمىيىلىك تەكشۈرۈش كېلىشىمنامىسىنىڭ PCR نىڭ ئالاھىدىلىكىگە تايىنىدىغانلىقىنى نەزەردە تۇتقاندا ، بۇ ئۇسۇلنىڭ ئاساسلىق چەكلىمىسى يۇندى ۋە كۆل سۈيى قاتارلىق ئوخشىمىغان ئەۋرىشكەلەردە ياكى تۆۋەن ساپلىقتىكى پىرىمېرلارنى ئىشلىتىشتە ئالاھىدە كۈچەيتمەسلىك يوشۇرۇن كۈچىدۇر. سەزگۈرلۈكنى ئاشۇرۇش. ئۆزگەرتىلمىگەن ENIG PCB ئېلېكترود ئارقىلىق DNA تەكشۈرۈلمىگەن PCR مەھسۇلاتلىرىنى ئېلېكتىرو خىمىيىلىك تەكشۈرۈش ئۇسۇللىرى ، ئىشلىتىلمىگەن DNTP ۋە پىرىمېرلار كەلتۈرۈپ چىقارغان خاتالىقنى تېخىمۇ ياخشى چۈشىنىش ، ھەمدە ئىنكاس شارائىتىنى ئەلالاشتۇرۇش ۋە كېلىشىمنامىنى تەھلىل قىلىش كېرەك. PH ، تېمپېراتۇرا ۋە بىئولوگىيىلىك قوشۇمچە فىزىكا-خىمىيىلىك پارامېتىرلار. ئۆلچەشنىڭ توغرىلىقىنى يۇقىرى كۆتۈرۈش ئۈچۈن سۇ ئەۋرىشكىسىدىكى ئوكسىگېن ئېھتىياجى (BOD) نىمۇ ئۆلچەشكە توغرا كېلىدۇ.
خۇلاسىلىگەندە ، بىز مۇھىت (كۆل سۈيى) ئەۋرىشكىسىدە ۋىرۇس بايقاش ئۈچۈن ئەرزان باھالىق ئېلېكترو خىمىيىلىك ENIG PCB سېنزورنى تەۋسىيە قىلىمىز. ئىشلىتىش مۇددىتى ئۇزۇن ، كونكىرىت ساقلاش تەلىپى بولمىغان ئېلېكترودلار LMIC غا ئورۇنلاشتۇرۇلغان ئاپتوماتىك ئەۋرىشكە پىششىقلاپ ئىشلەش ئارقىلىق ئۆلچەش ھەل قىلىش لايىھىسىنى تەرەققىي قىلدۇرۇشقا ماس كېلىدۇ. مۇھىت ئەۋرىشكىسىدە كۆپ ئۇچرايدىغان MBs نىڭ يەككە ۋە قوش لىنىيىلىك oligonucleotides بىلەن ئەھمىيەتسىز باغلىنىشى سەۋەبىدىن بۇ سېزىش ئۇسۇلىنىڭ خاسلىقىنى تۆۋەنلىتىدۇ. شۇڭلاشقا ، بۇ سىناقنىڭ كونكرېتلىقى پىرىمېرلارنىڭ ئەلالاشتۇرۇلۇشى ۋە PCR ئىنكاس شارائىتىغا باغلىق. بۇنىڭدىن باشقا ، CV سىناق قىلىنغان ئەۋرىشكىلەردىن ئېرىشكەن DPV چوققا ئېقىمىنى ھەر بىر سىناقتىكى پاسسىپ كونترول (NTC) دىن ئېرىشكەن جاۋابلارغا سېلىشتۇرغاندا ئىزاھلاش كېرەك. بۇ ئەسەردە ئوتتۇرىغا قويۇلغان ئېلېكتر خىمىيىلىك سېنزور لايىھىسى ۋە ئۇسۇللىرى ئاپتوماتىك ھەيدەش ماشىنىسى بىلەن بىرلەشتۈرۈلۈپ ، تولۇق ئاپتوماتىك ۋە تۆۋەن تەرەققىي قىلالايدۇ. - ئەۋرىشكە يىغىش ۋە ئانالىز قىلالايدىغان ، سىمسىز ھالدا تەجرىبىخانىغا يەتكۈزەلەيدىغان ھەل قىلىش چارىسى.
Cashdollar, J. & Wymer, L. سۇ ئەۋرىشكىسىدىكى ۋىرۇسلارنىڭ دەسلەپكى قويۇقلۇقىنىڭ ئۇسۇللىرى: يېقىنقى تەتقىقاتلارنىڭ تەكشۈرۈشى ۋە مېتا ئانالىزى. J.Application.microorganism.115, pp. 1-11 (2013).
Gall, AM, Mariñas, BJ, Lu, Y. & Shisler, JL Waterborne ۋىرۇسى: بىخەتەر ئىچىملىك ​​سۇنىڭ توساقلىرى.
Shrestha, S. et al.
Palecek, E. & Bartosik, M. Nucleic acid electrochemistry.Chemical.Rev.112 ، 3427–3481 (2012).
تانى ، ئا. ، تومسون ، AJ & Butt ، JN Methylene كۆك ، يەككە ۋە قوش يۆنىلىشلىك ئولىگونوكلېئودىدلارنىڭ ئېلېكترو خىمىيىلىك كەمسىتىش رولىنى ئوينايدۇ.
Wong, EL, Erohkin, P. & Gooding, JJ ئۇزۇن مۇساپىلىك ئېلېكترون يۆتكەش ئارقىلىق DNA ئارىلاشتۇرۇشنىڭ ئېلېكتىرو خىمىيىلىك يۆتكىلىشىدىكى كاتون ۋە ئانيون ئۆز-ئارا ماسلاشتۇرغۇچنى سېلىشتۇرۇش. ئېلېكتىرو خىمىيە تورى.
Wong, EL & Gooding, JJ توك قاچىلاش DNA ئارقىلىق يۆتكەش: تاللانغان ئېلېكترو خىمىيىلىك DNA biosensor.anus.Chemical.78, 2138-2144 (2006).
فاڭ ، TH قاتارلىقلار. بىرلا ۋاقىتتا ئېلېكترو خىمىيىلىك بايقاش بىلەن PCR مىكرو سۇيۇقلۇق ئۈسكۈنىسى. بىئولوگىيىلىك سېنزور. بىيو ئېلېكترون. 24 ، 2131-2136 (2009).
Win ، BY قاتارلىقلار. مېتىلېن كۆكنىڭ DNA بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىشىنى ئاساس قىلغان ئېلېكترو خىمىيىلىك رېئال ۋاقىتتىكى PCR سىستېمىسىنىڭ سىگنال بېرىش مېخانىزمى تەتقىقاتى ۋە ئىقتىدار دەلىللەش. ئانالىزچى 136 ، 1573-1579 (2011).
Ramirez-Chavarria, RG قاتارلىقلار. كېرەكسىز سۇ ئەۋرىشكىسىدە سارس-كوۋ -2 نى بايقاش ئۈچۈن ئايلانما ۋاسىتىلىك ئىسسىقلىق كۈچەيتكۈچنى ئاساس قىلغان ئېلېكترو خىمىيىلىك سېنزور. J.مۇھىت. خىمىيىلىك. ئەنگىلىيە .10 ، 107488 (2022).
كۇمار ، M. قاتارلىقلار. PCB ئېلېكترود بىلەن SARS-CoV-2 ئامپلوننىڭ ئېلېكتر خىمىيىلىك سېزىمى. سېنزور قوزغىتىلدى. B خىمىيە .343 ، 130169 (2021).
Kitamura, K., Sadamasu, K., Muramatsu, M. & Yoshida, H. پاسكىنا سۇنىڭ قاتتىق قىسمىدا SARS-CoV-2 RNA نى ئۈنۈملۈك بايقاش. ئىلىم-پەن. ئادەتتىكى مۇھىت .763 ، 144587 (2021).
Alygizakis, N. قاتارلىقلار. پاسكىنا سۇدىكى SARS-CoV-2 بايقاشنىڭ ئانالىز ئۇسۇلى: كېلىشىم ۋە كەلگۈسى كۆز قاراش. TraC يۈزلىنىش ئانالىزى. خىمىيىلىك. 134 ، 116125 (2020).
فېدورېنكو ، ئا. ، گىرىنبېرگ ، م. ، ئورېۋى ، ت. ۋە كاشتان ، ن.10 ، 1-10 (2020).
دەي ، ر.سۇ ساغلاملىقى 20 ، 83 (2021).
مىندىچ ، L. قوش لىنىيىلىك RNA باكتېرىيە توپىنىڭ ئۈچ خىل گېن گۇرۇپپىسىنىڭ توغرا ئورالمىسى \ (\ varphi \) 6. مىكرو ئورگانىزم. تېخىمۇ كۆپ. بىئولوگىيە. رېۋ.63 ، 149-160 (1999).
Pirttimaa, MJ & Bamford, DH RNA باسقۇچىنىڭ ئىككىنچى قۇرۇلمىسى \ (\ varphi \) 6 ئورالما رايونى. RNA 6 ، 880–889 (2000).
Bonilla, N. et al. Papes on Tapes - A fast and efficient protocol for preparation of laboratories stock of bacteriophages.PeerJ 4, e2261 (2016).