Nature.com сайтад зочилсонд баярлалаа. Таны ашиглаж буй хөтчийн хувилбар нь CSS-г хязгаарлагдмал дэмждэг. Хамгийн сайн ашиглахын тулд бид танд шинэчилсэн хөтөч ашиглахыг зөвлөж байна (эсвэл Internet Explorer-д нийцтэй байдлын горимыг унтраах). үргэлжлүүлэн дэмжлэг үзүүлбэл бид сайтыг хэв маяг, JavaScript-гүй харуулах болно.
Хүрээлэн буй орчны дээжийг хянахын ач холбогдлыг COVID-19 тахлын эхэн үеэс маш их үнэлж байгаа бөгөөд qPCR-д суурилсан арга техник нь өндөр өртөгтэй хэдий ч зарим хяналтын ажлыг алтны стандартыг ашиглан хийж байна. Цахилгаан химийн ДНХ-ийн биосенсорууд нь эдийн засгийн хувьд хэмнэлттэй байж болох юм. Бага, дунд орлоготой орнуудын хүрээлэн буй орчны усны дээжийг хянах шийдэл. Энэ ажилд бид ENIG ашиглан нуурын уснаас (SARS-CoV-2-ын алдартай орлуулагч) тусгаарлагдсан Phi6 фагаас гаргаж авсан ампликонуудыг цахилгаан химийн аргаар илрүүлж байгааг харуулж байна. гадаргуугийн өөрчлөлтгүйгээр ПХБ электродыг дуусгах.хүйс.Цахилгаан химийн мэдрэгчийн хариу урвалыг өөр өөр урттай хоёр ДНХ-ийн хэлтэрхийд (\({117}\,\hbox {bp}\) ба \({503}\,\hbox {bp}\)) нарийвчлан тодорхойлсон. ПГУ-ын мастер хольц дахь давсны метилен хөх (MB)-ДНХ-ийн харилцан үйлчлэлд үзүүлэх нөлөө. Бидний үр дүнгээс үзэхэд ДНХ-ийн фрагментийн урт нь цахилгаан химийн мэдрэмжийг ихээхэн тодорхойлдог бөгөөд ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг гель цэвэршүүлэхгүйгээр урт ампликонуудыг илрүүлэх чадварыг энэ ажилд харуулж байна. усны дээжийг газар дээр нь хэмжихэд чухал ач холбогдолтой.Вирусын ачааллын бүрэн автомат шийдэл нь сайн.
Усаар дамжих вирусын халдвар нь 1940-өөд оноос хойш хүн амын эрүүл мэндэд аюултай гэж мэдэгдэж байгаа бөгөөд энэ нь халдварт саа болон гепатит E1-ийн халдварын анхны нотолгоо юм.Дэлхийн эрүүл мэндийн байгууллага (ДЭМБ) эрүүл мэндийн дунд болон өндөр ач холбогдолтой хэд хэдэн усаар дамждаг вирусын эмгэг төрүүлэгчдийг ангилсан байдаг2.Уламжлалт вирус илрүүлэх аргууд нь алтны стандартад суурилсан qPCR-д суурилсан техникт тулгуурладаг бөгөөд тэдгээр нь өндөр мэдрэмжтэй, өвөрмөц онцлогтой боловч өндөр үнэтэй багаж ашиглан лабораторид шинжилгээ хийлгэхийн тулд чадварлаг боловсон хүчин шаарддаг.Гэвч бага, дунд орлоготой орнуудад (LMICs) нөөц багатай, хүн дээжийн шинжилгээ нь хүрээлэн буй орчны усны дээжийг хянахаас илүү чухал байх магадлалтай. Иймд шинээр гарч ирж буй өвчний дэгдэлтээс сэрэмжлүүлэх үүднээс бага, дунд орлоготой орнуудад ус, бохир усны дээжийг тогтвортой, бодит цагийн хяналтад байлгахад хямд өртөгтэй өөр аргууд хэрэгтэй. Ингэснээр тэднийг вирусын тахлын нийгэм, эдийн засгийн ноцтой нөлөөллөөс хамгаална. Нуклейн хүчлийн хямд өртөгтэй цахилгаан химийн биосенсорууд нь энэхүү хангагдаагүй хэрэгцээг хангах ирээдүйтэй боломжит шийдэл болж чадна. Эдгээр ДНХ-ийн биосенсоруудын ихэнх нь нэмэлт ДНХ-ийн хэлхээ электрод дээр хөдөлгөөнгүй байдаг тул ажилладаг. Дээжинд тохирох дараалал байгаа үед гадаргуу болон эрлийзжүүлнэ. Дараа нь калийн төмөр/ферроцианид зэрэг исэлдэлтийн зуучлагчдыг ашиглан янз бүрийн цахилгаан химийн техникээр үүнийг дохио болгон хувиргаж болно. Метилен хөх (MB) нь исэлдэлтийн идэвхит молекулуудын нэг юм. Нэг судалтай ДНХ-тай илүү өвөрмөц бус холбогддогоос гадна давхар судалтай ДНХ (dsDNA) болж хувирдаг гэж мэдээлсэн5,6. МБ-ийн харилцан үйлчлэлцэх шинж чанар нь МБ-ДНХ-ийн цогцолборыг үүсгэдэг нь тэдгээрийг хэд хэдэн цахилгаан химийн ДНХ-ийн редокс зуучлагчийн хувьд түгээмэл сонголт болгодог. мэдрэгчийн тохиргоо5,6,7,8,9. Хэдийгээр МБ-аас ДНХ-тэй харилцан үйлчлэлцэх нь өвөрмөц бус бөгөөд энэхүү цахилгаан химийн мэдрэгчийн өвөрмөц байдал нь ПГУ эсвэл изотерм олшруулалтад ашигласан праймеруудын цэвэршилтээс ихээхэн хамаардаг боловч энэ нь бодит туршилтыг хэрэгжүүлэхэд тохиромжтой. ДНХ-ийн концентрацийн хэмжилтийн өөр хувилбар болох цаг хугацааны цахилгаан химийн qPCR буюу флюресценцийн изотермийн олшруулалт Дифференциал импульсийн вольтметрийн (DPV) ашиглан MB-тай ПГУ-ын ампликоныг хэмжих 9. Бусад тохиолдолд Рамирез нар SARS-CoV-2-ийг дэлгэцэн дээр хэвлэсэн электрод бүхий MB ашиглан RT-LAMP урвалаар бохир уснаас илрүүлэх. Платинум электродуудыг мөн ашигласан. урвалын үед ампликонуудыг электрохимийн аргаар илрүүлэх зориулалттай микрофлюидик ПГУ-ын платформд газар дээрх электродууд болгон ашигладаг 8 .Эдгээр бүх судалгаа нь электродын гадаргуугийн өөрчлөлтийг шаарддаг бөгөөд энэ нь эдгээр функциональ электродуудын тогтвортой байдлыг хадгалах тусгай шаардлагын улмаас үйлдвэрлэлийн болон ашиглалтын зардлыг нэмэгдүүлдэг гэсэн үг юм.
Нуурын усны дээж дэх вирусын төвлөрсөн тоосонцороос гаргаж авсан ампликоныг цахилгаан химийн аргаар илрүүлэх ажлын схем.
Саяхан бид SARS-CoV-2 ампликонуудын цахилгаан химийн мэдрэгчийг DPV дээр суурилсан хямд хэвлэмэл хэлхээний хавтан (ПХБ) ба МБ-ДНХ-ийн цогцолборыг өөрчлөгдөөгүй электродын гадаргуу дээр шингээх замаар өдөөгдсөн цикл вольтметри (CV) -ийн өөрчлөлтийг харуулсан. одоогийн 11.Илүү урт ДНХ-ийн хэсгүүд (N1-N2, \({943}\, \hbox) CDC-ээс санал болгосон N1 урагш ба N2 урвуу праймерыг ашиглан үүссэн богино хэсгүүдтэй харьцуулахад {bp}\)) мэдрэгчийн хариу үйлдэлд илүү сайн шугаман байдлыг харуулсан гэж бид мэдээлж байна. ( N1, \(72\,\hbox {bp}\)) N1 урагш ба N1 урвуу праймер багц ашиглан үүсгэсэн. Эдгээр судалгааг нуклеазгүй усанд бэлтгэсэн ДНХ-ийн шингэрүүлэлтийг ашиглан мэдээлсэн. Уг платформыг мөн SARS-CoV илрүүлэхэд ашигласан. Загварласан бохир усны дээжинд -2 ампликон (SARS-CoV-2 РНХ-тай нийт РНХ дээжийг өсгөх замаар олж авсан). Тусгаарлах болон боловсруулах явцад РНХ нь зүслэгт өртөмтгий байдаг тул 12,13 нэг төрлийн бус дээжээр илүү урт хэсгүүдийг өсгөхөд хэцүү байдаг. Тиймээс бохир ус дахь SARS-CoV-2 ампликоны цахилгаан химийн мэдрэгчийг харуулах нь богино \(72\,\hbox {bp}\) N1 фрагментээр хязгаарлагддаг.
Энэ ажилд бид нуурын усны дээжээс төвлөрсөн болон тусгаарлагдсан Phi6 фагийн ENIG ПХБ-д суурилсан цахилгаан химийн мэдрэгчийг судлах боломжийн талаар судалсан (Зураг 1). Phi6 фагууд хэмжээ (80-100 нм) болон SARS-CoV-2 болон Мөн липидийн мембран, спик уураг байдаг. Эдгээр шалтгааны улмаас Phi6 бактериофаг нь SARS-CoV-2 болон бусад бүрхүүлтэй эмгэг төрүүлэгч РНХ вирусын түгээмэл орлуулагч юм14,15. Фагийн тоосонцороос тусгаарлагдсан РНХ-ийг дараа нь cDNA синтезийн загвар болгон ашигласан. 117 ба 503 суурь хос урттай хоёр ДНХ-ийн фрагментийг авахын тулд ПГУ. Өмнөх ажилд \(943\,\hbox {bp}\) N1-N2 хэлтэрхийг олшруулах сорилтыг харгалзан бид завсрын урттай фрагментуудыг (\(117) онилдог. \,\hbox {bp}\) болон \(503 \,\hbox {bp}\)), боломжтой праймерууд дээр үндэслэсэн. Цахилгаан химийн мэдрэгчийн хариу үйлдлийг концентрацийн өргөн хүрээнд системтэйгээр судалсан (\({10}\,{) \hbox {pg}/{\upmu \hbox {l}}}\) -аас \({20}\, {\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\)) доторх хоёр фрагментийн хувьд МБ байгаа эсэх, мэдрэгчийн хариу үйлдэлд давсны нөлөөг спектрофотометрийн хэмжилтээр тодорхойлж, хөндлөн баталгаажуулсан. Энэхүү ажлын гол хувь нэмэр нь дараах байдалтай байна.
ДНХ-ийн фрагментийн урт ба дээжинд давс байгаа эсэх нь мэдрэмжинд хүчтэй нөлөөлдөг.Бидний үр дүнгээс харахад электрохимийн идэвхжил нь ДНХ-ийн концентраци, уртаас хамааран вольтметрийн хариу үйлдэл дэх MB, ДНХ, мэдрэгчийн харилцан үйлчлэлийн янз бүрийн механизмаас хамаардаг бөгөөд урт хэсгүүд нь өндөр мэдрэмжтэй байдаг ч давс нь электростатик харилцан үйлчлэлд сөргөөр нөлөөлдөг. MB ба ДНХ.
ДНХ-ийн концентраци нь өөрчлөгдөөгүй электродууд дахь MB-ДНХ-ийн харилцан үйлчлэлийн механизмыг тодорхойлдог. Бид MB-ДНХ-ийн харилцан үйлчлэлийн янз бүрийн механизмууд нь ДНХ-ийн концентрацаас хамаардаг болохыг харуулж байна. ДНХ-ийн концентраци бага байх үед \({\hbox {ng}/{\upmu \hbox) {l}}}\), бид цахилгаан химийн гүйдлийн хариу урвалыг электрод дээрх MB-ДНХ-ийн шингээлтээр голчлон тодорхойлдог бол бага концентрацид ДНХ-ийн өндөр концентрацид цахилгаан химийн гүйдлийн хариу урвалыг исэлдэлтийн стерик дарангуйллаар тодорхойлсон болохыг бид ажигласан. ДНХ-ийн суурийн хосуудын хооронд МБ орсны улмаас үйл ажиллагаа.
Нуурын усны дээж дэх вирусын нуклейн хүчлийн ENIG ПХБ-д суурилсан цахилгаан химийн мэдрэгч Ажиглалт нь Мумбай дахь Повай нуурын усны дээжээс Phi6 нэмсэн \(503\,\hbox {bp}\) ДНХ-ийн хэлтэрхийг цахилгаан химийн аргаар илрүүлэх замаар баталгаажуулсан. Үр дүн фаг.
Хэрэгжүүлэх зардал бага, бүрэн автоматжуулсан хяналтын систем, олигонуклеотид эсвэл электродууд дээрх аптамеруудад удаан хугацаагаар хадгалах боломжтой.
Phage Phi6 нь Pseudomonas syringae-г халдварладаг Cytoviridae овгийн дугтуйтай dsRNA вирус юм. Phi6 фагийн геном нь 3 фрагмент хэлбэртэй байдаг: S (\(2.95\,\hbox {Kb}\)), M (\(4.07) \,\hbox {Kb}\)) ба L (\ (6.37\ ,\hbox{Kb}\))16,17. Phi6 фаг нь эмгэг төрүүлэгч бус BSL-1 Pseudomonas омгийг халдварладаг тул хэрэглэхэд аюулгүй. мөн лабораторид амархан ургуулж болно.Phage Phi6 болон түүний эзэн Pseudomonas syringae-г Канадын Лавалын их сургуулийн Феликс д'Херелл бактерийн вирусын лавлах төвөөс худалдаж авсан (лавлах төвийн каталогийн дугаар нь HER-102 ба HER-1102 тус тус байна) Лавлагааны төвийн зааврын дагуу .Phi6 фаг болон түүний хостыг сэргээсэн. Фаж Phi6-г ялтас задлах, шүүрүүлэх замаар цэвэршүүлж эцсийн титрүүдийг \(\10^{12}\,{\hbox {PFU}/\hbox { ml}}\) (товруу үүсгэгч нэгж/ миллилитр). Үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу GenElute™ Universal Total RNA Purification Kit (Sigma-Aldrich) ашиглан цэвэршүүлсэн фагийн тоосонцороос РНХ-г тусгаарласан. Товчхондоо, цэвэршүүлсэн фагийн Phi6 суспензийг\({ 100}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) задарсан ба лизатыг эргүүлэх баганад ачаалж, РНХ-ийг давирхайн баганатай холбоно. Дараа нь РНХ-г элюцийн уусмалд уусгана \({ 50}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) иж бүрдэлд өгсөн. РНХ-ийн концентрацийг \(260\,\hbox {nm}\-д шингээх чадвараар тооцоолно уу). ({-80}\,{^{\circ }\hbox {C}}\) цаашид ашиглах хүртэл.\({2}\,{\upmu \hbox {g}}\) iScript cDNA синтезийн хэрэгсэл (Bio) -Rad Laboratories)-ийг үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу cDNA синтезийн загвар болгон ашигласан. Товчхондоо, cDNA синтезийн урвал нь \({25}\,{^{\circ }\hbox {C}}\-д бэлтгэх 3 үе шатаас бүрдэнэ. )\({5}\,{\hbox {мин} }\) , \({20}\,{\hbox {мин}}\)-н урвуу орчуулга \({46}\,{^{\circ) }\hbox {C}}\), болон урвуу Бичигч нь \({95}\,{^{\circ }\hbox {C}}\) дотор \({1}\,{\hbox {мин) байна }}\).1%-ийн агароз гель дээр ажиллуулахад cDNA нь хүлээгдэж буй гурван РНХ фрагменттэй тохирох гурван туузыг харуулсан (өгөгдөл үзүүлээгүй). Дараах праймеруудыг 117 ба 503 bp урттай хоёр ДНХ фрагментийг олшруулахад ашигласан. miniPCR® mini8 дулааны мөчлөгт ПГУ-ын загвар болгон cDNA ашиглах:
\(117\,\hbox {bp}\) ба \(503\,\hbox {bp}\)-ийн праймерууд нь M сегментийн 1476-1575 нуклеотид ба L сегментийн 458-943 нуклеотид хүчилтэй тохирч байна. .Бүх олшруулсан ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг 1%-ийн агароз гель дээр электрофорезжуулж, олшруулсан зорилтот ДНХ-ийг GeneJET Gel Extraction Kit (Thermo Fisher Scientific) ашиглан цэвэршүүлсэн.
Мумбай дахь IIT кампус дахь нуурыг (Повэй нуур, Повай, Мумбай) фагийн тоосонцор нэмэхэд ашигласан. Нуурын усыг зайлуулахын тулд \({5}\,{\upmu \hbox {m}}\) мембранаар шүүсэн. түдгэлзүүлсэн тоосонцор, дараа нь Phi6 фаг нэмсэн. \({1}\,{\hbox {ml}}\)-аас \(10^{6}\,{\hbox {PFU}/\hbox {ml}} нэмнэ үү. \) нь \({100}\ ,{\hbox {ml}}\) шүүсэн нуурын усыг \({4}\,{^{\circle}\hbox {C}}\). товрууны шинжилгээгээр вирусын ачааллыг хэмжихэд зориулагдсан. Бид Phi6 вирүсийн тоосонцорыг баяжуулах хоёр өөр аргыг туршсан: (1) хөнгөн цагааны гидроксидын шингээх тунадасны арга,19 нь хүрээлэн буй орчны дээжээс хэд хэдэн бүрхүүлтэй РНХ вирусын концентрацийг баталгаажуулсан ба (2) ) Полиэтилен гликол (PEG) дээр суурилсан вирусын концентрацийн аргыг Flood et al.-аас тохируулсан.20 .ПЕГ-д суурилсан аргын нөхөн сэргээх үр ашиг нь хөнгөн цагааны гидроксидын аргынхаас илүү сайн болох нь тогтоогдсон тул нуурын усны дээжээс Phi6 тоосонцорыг баяжуулахад PEG-д суурилсан аргыг ашигласан.
Ашигласан PEG арга нь дараах байдалтай байсан: PEG 8000 ба \(\hbox {NaCl}\)-ийг Phi6-ийн үзүүртэй нуурын усны дээжинд нэмж 8% PEG 8000 ба \(0.2\,\hbox {M} \) \( \ hbox {NaCl}\).Дээжийг сэгсрэгч дээр өсгөвөрлөсөн\({4}\,{^{\circ }\hbox {C}}\)\({4}\,{\hbox {h}}\ ), дараа нь \(4700 \,\hbox {g}\)-д центрифуг хийхэд \({45}\,{\hbox {мин}}\ болно). Илүүдэл бодисыг хаяж, үрэлийг \({1}\, {\hbox {ml}}\) ижил супернатант дотор. Бүх спик болон вирусын концентраци туршилтыг 3 дахин хийсэн. Баяжуулсны дараа нөхөн сэргээх үр ашгийг хэмжихэд бага хэмжээний хэсгийг товрууны шинжилгээгээр нөөцөлсөн. РНХ-г өмнө нь тайлбарласны дагуу тусгаарлаж, шүүж авсан. иж бүрдэлд нийлүүлсэн элюцийн буфер\({40}\,{\upmu \hbox {l}}\). Гурав дахин давтагдсан дээжээс дээжинд РНХ-ийн концентраци харилцан адилгүй байх тул \({2}\,{\upmu \ РНХ-ийн hbox {l}}\ нь түүний концентрациас үл хамааран гурвууланд нь хэрэглэгддэг дээжүүдийн cDNA нийлэгжилт. cДНХ-ийн нийлэгжилтийг өмнө тайлбарласны дагуу гүйцэтгэсэн.\({1}\,{\upmu \hbox {l}}\) cDNA \({20}\,{\upmu \hbox {l}}\) \ (117\,\hbox {bp}\) болон \(503\,\hbox {-г нэмэгдүүлэхийн тулд 35 циклийн турш ПГУ-ын загвар болгон ашигласан. bp}\) хэсгүүд. Эдгээр дээжийг “1:1″, өөрөөр хэлбэл шингэлэхгүйгээр дүрсэлсэн байна. Загваргүй хяналтыг (NTC) сөрөг хяналт болгон тохируулсан бол цэвэршүүлсэн фагаас тусгаарлагдсан РНХ ашиглан нийлэгжүүлсэн cDNA-г суурилуулсан. эерэг хяналтын (PC) загвар болгон. Тоон ПГУ-ыг (qPCR) Brilliant III Хэт Хурдан SYBR Green QPCR Мастер Микс (Agilent Technologies) ашиглан Stratagene Mx3000P RT-PCR төхөөрөмжид хийсэн. Урвалын урвалыг өмнөх шиг гурав дахин тохируулсан. Бүх дээжийн мөчлөгийн босгыг (Ct) бүртгэсэн. Үүнээс гадна шингэрүүлсэн дээжийг 1:100 харьцаагаар шүүсэн нуурын усанд шингэрүүлсэн cDNA ашиглан \({1}\,{\upmu \hbox {l}}\) хийсэн. \({20}\,{\upmu \hbox {l}}\) 35 циклийн ПГУ. Эдгээр дээжийг “1:100″ гэж дүрсэлсэн.
ПХБ-ийн электродуудыг нэмэлт алтаар бүрэх шаардлагагүйгээр хямд үнэтэй цахилгаангүй никель алт (ENIG) аргаар үйлдвэрлэдэг. ENIG ПХБ электродын техникийн үзүүлэлтүүдийг бидний өмнөх ажил11-д дэлгэрэнгүй тайлбарласан болно. ENIG ПХБ электродын хувьд электродыг цэвэрлэх уламжлалт аргууд, тухайлбал Пиранхагийн уусмал эсвэл хүхрийн хүчлийн циклик вольтметрийг хэрэглэхийг зөвлөдөггүй, учир нь тэдгээр нь нимгэн алтан давхаргыг (зузаан \(\ойролцоогоор\) \(100\,\hbox {nm }\)) хуулж, зэсийн доод давхаргад өртөмтгий байдаг. 21, 22, 23, 24, 25 зэврэлтэнд өртөнө. Иймд электродыг IPA-аар чийгшүүлсэн хөвөнгүй даавуугаар цэвэрлэнэ. Туршилт хийх дээжийг \({50}\,{\upmu \hbox {M}-ээр өсгөвөрлөнө. }\) Хялбар оруулахын тулд \({4}\,{^{\circ }\hbox {C}}\)\({ 1}\,{\hbox {h}}\) доторх МБ. Бидний өмнөх ажилд , бид МБ концентрацийг нэмэгдүүлснээр мэдрэгчийн мэдрэмж, шугаман чанар сайжирсан болохыг бид ажиглав Энэ судалгаанд ДНХ-ийг оруулах концентраци. Давхар хэлхээтэй ДНХ (ds-ДНХ)-ийн цахилгаан химийн илрүүлэлтийг анионик эсвэл катион интеркалатор ашиглан хийж болно. Хэдийгээр анион интеркалаторууд ДНХ-ийг илүү сайн сонгомол байдлаар илрүүлдэг ч нэг шөнийн турш инкубаци шаарддаг тул илрүүлэх хугацааг уртасгадаг.On нөгөө талаас, MB зэрэг катион интеркалаторууд нь ds-DNA6-г электрохимийн аргаар илрүүлэхийн тулд ойролцоогоор \({1}\,{\hbox {h}}\) богино инкубацийн хугацаа шаарддаг. Хэмжилт бүрд туршилтын дээжийг сорьцонд оруулахыг хэлнэ. электрод\({5}\,{{\upmu \hbox {l}}}\), дараа нь өөр дээж авахын өмнө IPA-аар чийгшүүлсэн өөдөсөөр цэвэрлэнэ.нэг хэмжилт. Дээж бүрийг өөрөөр заагаагүй бол 5 өөр электрод дээр туршсан. DPV болон CV хэмжилтийг PalmSens Sensit Smart потенциостат ашиглан хийсэн ба PSTrace программ хангамжийг потенциостатын тохиргоо болон өгөгдөл цуглуулах, түүний дотор оргил гүйдлийн тооцооллыг ашигласан. Дараах тохиргоог ашигласан болно. DPV болон CV хэмжилтийн хувьд:
DPV: Тэнцвэрийн хугацаа = \(8\,\hbox {s}\), Хүчдэлийн алхам = \(3\,\hbox {mV}\), Импульсийн хүчдэл = \(25\,\hbox {mV}\), импульсийн үргэлжлэх хугацаа = \(50\,\hbox {ms}\), скан хийх хурд = \({20}\,\hbox {mV/s}\)
CV: Тэнцвэрийн хугацаа = \(8\,\hbox {s}\), Хүчдэлийн алхам = \(3\,\hbox {mV}\), Цэвэрлэх хурд = \({300}\,\hbox {mV/s }\)
\({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB-тай нэгтгэсэн ДНХ-ийн вольтаммограммуудаас олж авсан оргил гүйдэл: (a) \(503\, \hbox {bp}\) DPV , (b) \ (503\,\hbox {bp}\) CV, (c) \(117\,\hbox {bp}\) DPV, (d) \(117\,\hbox {bp}\) CV.
DPV болон CV вольтаммограммыг ENIG ПХБ электродууд \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) МБ-д ДНХ-тэй нийлмэл (10-\({20}\,{\ hbox {ng) концентрацид) авсан. }/{\upmu \hbox {l}}}\) өөрөөр хэлбэл \(117\,\hbox {bp}\ ) болон 0.03-д 0.13–\({0.26}\,{\upmu \hbox {M}}\) –\({0.06}\,{\upmu \hbox {M}}\) for \(503\,\hbox {bp}\)). Төлөөлөгч вольтаммограммыг нэмэлт мэдээллийн S1 зурагт үзүүлэв. Зураг 2-т үр дүнг харуулав. Гель-цэвэршүүлсэн ПГУ-ын бүтээгдэхүүн ашиглан DPV болон CV хэмжилтийн (оргил гүйдэл). CV хэмжилтүүдтэй харьцуулахад DPV хэмжилтүүд нь өндөр мэдрэмжтэй (ДНХ-ийн концентрацийн функцээр гүйдэл) харуулдаг, учир нь CV хэмжилтийн арын багтаамжийн гүйдэл нь Фарадай гүйдлийг нуудаг 26 .Өгөгдөл хайрцагны хайрцаг тус бүрийн хувьд 5 электродын хэмжилтийг агуулна. Бүх хэмжилтүүд электродоос электродын өөрчлөлтөөс шалтгаалж хэмжилтийн алдаа гарахаас зайлсхийхийн тулд ижил электродуудыг ашигладаг. Бид ДНХ-ийн бага концентрацид DPV болон CV хэмжсэн оргил гүйдлийн өсөлтийн хандлагыг ажиглав. , урт (\(503\,\hbox {bp}\)) \,\hbox {bp}\ \(117) )-тай харьцуулахад. Энэ нь бидний өмнөх ажилд мэдээлэгдсэн электродын шингээлтийн хүлээгдэж буй хандлагатай нийцэж байна. МБ-ДНХ-ийн цогцолборыг шингээх нь электрод дээрх цэнэгийн шилжилтийг хөнгөвчлөх бөгөөд энэ нь оргил гүйдлийг нэмэгдүүлэхэд хувь нэмэр оруулдаг. Бусад судалгаагаар олигонуклеотидын хэмжээ, дараалал нь MB-ДНХ-ийн харилцан үйлчлэлд үзүүлэх нөлөөг харуулсан27,28,29,30. Гуанин -Хоёр ампликоны (\(117\,\hbox {bp}\) ба \(503\,\hbox {bp}\)) -ийн цитозины (GC) агууламж ойролцоогоор 50% байсан нь ажиглалтын зөрүүг харуулж байна. ампликоны урт хүртэл. Гэсэн хэдий ч ДНХ-ийн өндөр концентрацийн хувьд (\(>{2}\,{\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\), \(503\,\hbox {bp}) \) ба \(>{10}\,{\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) нь \(117\,\hbox {bp}\)), бид хоёр өсгөлтийг ажиглаж байна. Дэд хэсгүүдийн оргил гүйдэл нь DPV болон CV хэмжилтийн аль алинд нь багасдаг. Энэ нь MB нь ДНХ-ийн үндсэн хосуудын хооронд ханаж, харилцан уялдаатай байдаг тул MB31,32 дахь бууруулж болох бүлгийн исэлдэлтийн идэвхийг стерик дарангуйлдаг.
在存在 \(2\,\hbox {mM}\) \({\hbox {MgCl }_2}\): (a) \(503\,\hbox {bp}\) DPV, (b) \(503) \,\hbox {bp}\) CV, (c) \(117\,\hbox {bp}\) DPV，(d) \(117\,\hbox {bp}\) CV。
ПГУ ба ДНХ-ийн хоорондох электростатик харилцан үйлчлэлд саад учруулдаг тул \(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl }_2\) -ийг \({50} \,{\ upmu \hbox {M}}\) MB-ДНХ-ийн харилцан үйлчлэлд давсны нөлөөг судлах зорилгоор MB гелээр цэвэршүүлсэн бүтээгдэхүүн. 3-р зурагт үзүүлснээр ДНХ-ийн өндөр концентраци (\(>{2}\,{\) байгааг ажиглав. hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) (503\,\hbox {bp }\) ба \(>{10}\,{\hbox {ng}/{\upmu \hbox { l}}}\) нь \(117\,\hbox {bp} \)), DPV болон CV-д Давс нэмсэн нь хэмжилтэд төдийлөн нөлөөлөөгүй (Төлөөллийн вотаммограммуудын нэмэлт мэдээлэл дэх Зураг S2-г үзнэ үү). ДНХ-ийн концентраци бага байвал давс нэмэх нь мэдрэмтгий байдлыг ихээхэн бууруулж, ДНХ-ийн концентрацитай гүйдэлд мэдэгдэхүйц өөрчлөлт гарахгүй. МБ-ДНХ-ийн харилцан үйлчлэл болон интеркалаци дахь давсны ижил төстэй сөрөг нөлөөг бусад судлаачид өмнө нь мэдээлсэн33,34.\(\hbox { Mg}^{2+}\) катионууд нь ДНХ-ийн сөрөг фосфатын нуруунд холбогдож, улмаар МБ ба ДНХ-ийн хоорондох электростатик харилцан үйлчлэлд саад учруулдаг. ДНХ-ийн өндөр концентрацид исэлдэлтийн идэвхит МБ-ийн стерик дарангуйлал нь оргил гүйдлийг бууруулдаг тул цахилгаан статик харилцан үйлчлэл үүсдэг. мэдрэгчийн хариу үйлдэлд төдийлөн нөлөөлөхгүй. Гол санаа нь энэ биосенсор нь ДНХ-ийн өндөр концентрацийг илрүүлэхэд илүү тохиромжтой байдаг (ховор \({\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) ба түүнээс дээш), ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг гельээр цэвэршүүлэх боломжгүй байж болзошгүй орчны усны дээжийг бүрэн автоматжуулсан боловсруулалтад зориулав.
\({50}\,{\upmu \hbox {M}}\)-тай нийлмэл ДНХ-ийн янз бүрийн концентрацийн 600–700 \(\hbox {nm}\) долгионы уртын муж дахь шингээлтийн муруй доорх талбай: ( a ) \(503\,\hbox {bp}\) давстай ба давсгүй (\(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl}_2\)), (b) \( 117\, \hbox {bp}\) давстай ба давсгүй (\(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl}_2\)).\({0}\,{\hbox {pg}/ {\upmu \hbox {l}}}\) \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB дээжид харгалзах ДНХ-ийн концентраци ДНХ байхгүй.
Дээрх үр дүнг баталгаажуулахын тулд бид хэт ягаан туяа/Vis спектрофотометр (Thermo Scientific Multiskan GO) ашиглан оптик хэмжилт хийсэн бөгөөд дээжийг \({50}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) тус бүрд ашигласан. Хэмжилт. ДНХ-ийн концентраци нэмэгдэхийн хэрээр шингээлтийн шинж тэмдэг буурдаг нь \(600\,\hbox {nm}\) хүртэлх \(700\,\hbox) долгионы уртын муж дахь шингээлтийн муруй доорх хэсгийн чиг хандлагаас харагдаж байна. nm}\) , Зураг 4-т үзүүлсний дагуу (нэмэлт мэдээллийн S3-р зурагт шингээлтийн спектрийг үзүүлэв). \({1}\,{\hbox {ng}/{\upmu \hbox-аас бага ДНХ-ийн концентрацитай дээжийн хувьд. {l}}}\), ДНХ агуулсан болон зөвхөн MB-тай дээжийн (\(503\,\hbox {bp}\) болон \(117\,\hbox {bp}\-н хувьд) шингээлтийн хувьд мэдэгдэхүйц ялгаа байгаагүй. ) уртын фрагментүүд), исэлдэлтийн идэвхит МБ-ийн стерик дарангуйлал байхгүйг харуулж байна. ДНХ-ийн өндөр концентрацитай үед бид шингээлтийн дохио аажмаар буурч байгааг ажиглаж, давс байгаа үед шингээлт бага буурч байгааг тэмдэглэв. Эдгээр үр дүн нь молекулын шинж чанартай холбоотой байв. ДНХ-ийн эрлийз дэх суурь давхаргын харилцан үйлчлэл ба стерик дарангуйлал. Бидний үр дүн нь \(\pi\)–\(\pi ^*\) дахь гипохроматик байдлыг эрчим хүчний түвшин буурсантай холбосон МБ-ДНХ-ийн интеркалацын спектроскопийн судалгааны талаархи уран зохиолын тайлантай нийцэж байна. ) интеркалацийн улмаас электрон шилжилтүүд 36, 37, 38 давхаргууд.
Phi6 фагийн агароз гель электрофорез: Нуурын усны дээжээс \(117\,\hbox {bp}\) ба \(503\,\hbox {bp}\) урттай ПГУ-ын бүтээгдэхүүн.М-ДНХ маркер;NTC-загваргүй хяналт, харгалзах ампликонуудыг агуулсан праймерууд;PC-ийн эерэг хяналт;1, 2, 3-шингэрүүлээгүй (1:1) нуурын усны дээжийг гурвалсан. \(503\,\-д ашиглагдаагүй олигонуклеотидын улмаас \(\50\,\hbox {bp}\) дээр зурвас харагдаж байна. hbox {bp}\) эгнээ.
Бид Phi6 фажаар баяжуулсан Повай нуурын усны дээжийг ашиглан мэдрэгчийн ашиг тусыг үнэлэв. Фажаар баяжуулсан усны дээжээс тусгаарлагдсан РНХ-ийн концентраци 15.8–\({19.4}\,{\upmu \hbox {g}/\hbox { мл}}\), харин цэвэршүүлсэн фагийн суспензээс тусгаарлагдсан РНХ нь ойролцоогоор 1-ийн нөхөн сэргээх үр ашигтай \({1945}\,{\upmu \hbox {g}/\hbox {ml}}\) гэж тооцоолсон. %.РНХ-г урвуугаар нь cDNA-д хөрвүүлж, ПГУ болон qPCR-д загвар болгон ашигласан. Бүтээгдэхүүний хэмжээг мэдрэгчээр туршихын өмнө агароз гель электрофорезоор баталгаажуулсан (Зураг 5). Эдгээр дээжийг гельээр цэвэршүүлээгүй тул ПГУ-ын бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг агуулна. түүнчлэн сонирхлын ампликонууд. QPCR-ийн үед бүртгэгдсэн Ct утгууд (Хүснэгт 1) нь харгалзах оргилсон усны дээжээс тусгаарлагдсан РНХ-ийн концентрацитай хамааралтай болохыг харуулсан. Ct утга нь флюресцент дохиог дамжуулахад шаардагдах циклийн тоог харуулдаг. босго буюу арын дохиог давах. Ct өндөр утгууд нь загварын бага концентрацийг илтгэнэ ба эсрэгээр. NTC дээжийн Ct утга нь хүлээгдэж байснаас өндөр байсан. эерэг хяналт ба туршилтын дээж нь туршилтын дээж бүр нь эерэг хяналттай харьцуулахад ойролцоогоор 1% загвартай болохыг харуулж байна. Урт ампликонууд нь илүү мэдрэмжтэй байдаг талаар бид өмнө нь ярилцсан. Байгаль орчны нэг төрлийн бус дээжээс тусгаарлагдсан урт хэсгүүдийг олшруулах нь сул талуудыг харгалзан үзэхэд хэцүү байдаг. вирусын бага концентраци ба РНХ-ийн задрал. Гэсэн хэдий ч манай вирус баяжуулах болон ПГУ-ын олшруулах протоколын тусламжтайгаар бид цахилгаан химийн мэдрэгч бүхий \(503\,\hbox {bp}\) фрагментийг амжилттай өсгөж чадсан.
Зураг 6-д шингэрүүлээгүй cDNA-г загвар (1:1) болон 100 дахин шингэрүүлсэн cDNA-г загвар (1:100) болгон ПГУ-ыг ашигласан \(503\,\hbox {bp}\) фрагмент ампликоны цахилгаан химийн мэдрэгчийн үр дүнг харуулав. , NTC болон PC-тэй харьцуулсан (Voltammograms-ийн нэмэлт мэдээлэл дэх Зураг S4-ийг үзнэ үү). 6-р зураг дээрх хайрцагны хайрцаг бүр нь 5 электрод дээрх гурван дээжийн хэмжилтийг агуулна. Электродын улмаас алдаа гаргахгүйн тулд бүх дээжийг хэмжихэд ижил электродыг ашигласан. -электродын хэлбэлзэл. CV хэмжилттэй харьцуулахад DPV хэмжилтүүд нь туршилтын болон компьютерийн дээжийг NTC-ээс ялгахад илүү сайн нягтаршилтай байгааг харуулж байна, учир нь өмнө дурьдсанчлан Фарадай гүйдэл нь сүүлийн үеийн арын багтаамжийн гүйдлийн улмаас далд байдаг. Урт ампликонуудын хувьд бид үүнийг ажигласан. Сөрөг хяналт (NTC) нь эерэг хяналттай харьцуулахад CV болон DPV оргил гүйдлийг ихэсгэсэн бол эерэг ба шингэрүүлээгүй туршилтын дээжүүд нь DPV оргил гүйдлийн оргил гүйдлийн ойролцоо өндөрийг харуулсан. Шингэрүүлээгүй (1:1) бүрийн хэмжсэн дундаж ба дундаж утгууд ) туршилтын дээж болон PC-ийг NTC дээжийн мэдрэгчийн гаралтаас тодорхой шийдэж болох бөгөөд 1:100 шингэрүүлсэн дээжийн нягтрал бага байна. cDNA-г 100 дахин шингэлэхийн тулд бид гель электрофорезийн явцад ямар ч тууз ажиглаагүй. (Зураг 5-д харуулаагүй эгнээ) ба харгалзах DPV болон CV оргил гүйдэл нь NTC-д хүлээгдэж буйтай төстэй байв. \(117\,\hbox {bp}\) фрагментийн үр дүнг Нэмэлт мэдээлэлд үзүүлэв. Сөрөг хяналт нь электрод дээрх чөлөөт МБ шингээлт ба нэг судалтай праймер олигонуклеотидтэй МБ-ийн харилцан үйлчлэлийн улмаас ПХБ мэдрэгчээс цахилгаан химийн урвал үүсгэсэн. Иймээс дээжийг турших бүрт сөрөг хяналтыг ажиллуулж, Туршилтын дээжийг эерэг ба сөрөг гэж ангилахын тулд дифференциал (харьцангуй) хэмжилтэнд хүрэхийн тулд сөрөг хяналтаар олж авсан оргил гүйдэлтэй харьцуулсан туршилтын дээжийн оргил гүйдэл39,40.
(a) DPV, (б) Нуурын усны дээж дэх \(503\,\hbox {bp}\) хэлтэрхийг цахилгаан химийн аргаар илрүүлэх CV оргил гүйдэл. Туршилтын дээжийг гурван удаа хэмжиж, загвар хяналтгүй (NTC) харьцуулсан ба эерэг удирдлага (PC).
Бидний олдворууд нь янз бүрийн ДНХ-д зориулсан өөр өөр урттай ампликонуудын цахилгаан химийн мэдрэгчийн гүйцэтгэлд нөлөөлж буй янз бүрийн механизмуудыг харуулж байгаа бөгөөд концентрацийг хэт ягаан туяа/Vis спектрофотометр ашиглан оптик хэмжилтээр баталгаажуулсан. Бидний ажиглалт ДНХ-ийн хэсгүүд \(\ойролцоогоор\) хүртэл урт байдаг гэсэн ойлголтыг онцолж байна. \(500\,\hbox {bp}\) өндөр мэдрэмжтэйгээр илрүүлж, дээжинд давс агуулаагүй нь мэдрэг чанар ДНХ-ийн концентраци нь өндөр мэдрэмжинд нөлөөлдөг (ховор \({\hbox {ng}/{\upmu) \hbox {l}}}\) ба түүнээс дээш).Үүнээс гадна бид давс нэмсэн болон нэмээгүй гелээр цэвэршүүлсэн ампликон, DPV болон CV хэмжилтэнд нуурын усны дээж нэмэх зэрэг янз бүрийн төрлийн дээжийн нөлөөг судалсан.Арын багтаамжийн гүйдэл нь CV хэмжилтэнд нөлөөлж, мэдрэг чанар багатай болгодог тул DPV нь илүү сайн нарийвчлалтай болохыг бид ажигласан.
Урт фрагментийн олшруулалт нь вирусын геномын РНХ-ийн бүрэн бүтэн байдлаас шалтгаална. Хэд хэдэн судалгаагаар урт фрагментуудыг олшруулах нь хүрээлэн буй орчинд РНХ-ийн доройтол, тусгаарлах явцад залгах боломжоос шалтгаалан үргэлж үр дүнтэй байдаггүй нь батлагдсан11,41,42,43,44 .Бид PEG-д суурилсан вирусын концентрацийн арга нь хөнгөн цагааны гидроксид дээр суурилсан вирусын концентрацийн аргыг бодвол нуурын усны дээж дэх Phi-6 фагыг баяжуулахад илүү үр дүнтэй болохыг ажигласан. ДНХ-ийн урт хэсгүүдийг илрүүлэх чадвар нь мультиплекс ПГУ-ын шаардлагыг даван туулж чадсан нь батлагдсан. олон богино урттай загваруудыг олшруулж, хөндлөн өвөрмөц байдлын боломжийг багасгах.
Биологийн дээж ховор тул туршилтанд хамгийн бага дээж шаардагдах биосенсорыг зохион бүтээх шаардлагатай байна. Энэ судалгаанд ашигласан ENIG ПХБ электродууд нь зөвхөн \({5}\,{{\upmu \hbox {l}}}\ шаардлагатай. ) электродын үр дүнтэй хэсгийг хамрах туршилтын дээж. Үүнээс гадна дараагийн дээжийг өгөхийн өмнө ижил электродыг цэвэрлэсний дараа дахин ашиглаж болно. Олшруулсан дээж нь метилен цэнхэрээс өөр химийн бодис нэмэх шаардлагагүй бөгөөд энэ нь хямд төсөр юм. болон түгээмэл хэрэглэгддэг химийн бодис. Электрод бүрийг үйлдвэрлэхэд ойролцоогоор $0.55 (эсвэл 40 INR) үнэтэй байдаг тул энэхүү биосенсор нь одоо байгаа илрүүлэх технологид өртөг багатай хувилбар байж болох юм. Хүснэгт 2-т энэ ажлыг уран зохиолд удаан хугацааны туршид мэдээлэгдсэн бусад мэдрэгчтэй харьцуулсан харьцуулалтыг харуулав. Гетероген дээж дэх ДНХ-ийн хэсгүүд.
МБ-д суурилсан цахилгаан химийн илрүүлэлтийн протоколууд нь ПГУ-ын өвөрмөц чанарт тулгуурладаг тул энэ аргын гол хязгаарлалт нь бохир ус, нуурын ус зэрэг янз бүрийн дээжинд өвөрмөц бус олшруулалт хийх, эсвэл бага цэвэршилттэй праймеруудыг ашиглах боломж юм. өөрчлөгдөөгүй ENIG ПХБ электродыг ашиглан цэвэршүүлээгүй ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг ДНХ илрүүлэх цахилгаан химийн илрүүлэх аргуудын хувьд ашиглагдаагүй dNTP болон праймеруудын алдааг илүү сайн ойлгох, урвалын нөхцөл, шинжилгээний протоколыг оновчтой болгох шаардлагатай. РН, температур, биологийн нэмэлт физик-химийн үзүүлэлтүүд Хэмжилтийн нарийвчлалыг сайжруулахын тулд усны дээжийн хүчилтөрөгчийн хэрэгцээг (BOD) мөн хэмжих шаардлагатай байж болно.
Дүгнэж хэлэхэд бид хүрээлэн буй орчны (нуурын ус) дээжээс вирус илрүүлэх хямд өртөгтэй цахилгаан химийн ENIG ПХБ мэдрэгчийг санал болгож байна. Мэдрэмжийг хадгалахын тулд криоген хадгалах шаардлагатай хөдөлгөөнгүй олигонуклеотидын электродууд эсвэл ДНХ-ийн мэдрэгчтэй тусгай субстратуудаас ялгаатай нь манай техник нь өөрчлөгдөөгүй ПХБ ашигладаг53,54 Хадгалах хугацаа урт, хадгалах тусгай шаардлага байхгүй электродууд нь LMIC-д суурилуулсан дээж боловсруулах автоматжуулсан хэмжилтийн шийдлийг боловсруулахад тохиромжтой. Биосенсор нь зорилтот ампликонуудыг хурдан илрүүлэхийн тулд хямд үнэтэй ДНХ-ийн харилцан үйлчлэлцэх исэлдүүлэгч будагч бодисыг (MB) ашигладаг. Өвөрмөц бус олшруулалт Байгаль орчны дээжинд нийтлэг байдаг нь МБ нь нэг ба хоёр судалтай олигонуклеотидуудтай өвөрмөц бус холбогддог тул энэхүү мэдрэгчийн аргын онцлогийг бууруулдаг.Тиймээс энэхүү туршилтын онцлог нь праймер болон ПГУ-ын урвалын нөхцлүүдийг оновчтой болгохоос хамаарна. Үүнээс гадна CV Туршилтанд хамрагдсан дээжээс олж авсан DPV оргил гүйдлийг туршилт бүрийн сөрөг хяналтаас (NTC) авсан хариутай харьцуулан тайлбарлах ёстой. Энэ ажилд үзүүлсэн цахилгаан химийн мэдрэгчийн загвар, аргуудыг автоматжуулсан, бага хэмжигдэхүүнийг боловсруулахын тулд автомат дээж авах төхөөрөмжтэй нэгтгэж болно. -Дээж цуглуулж, дүн шинжилгээ хийж, үр дүнг лабораторид утасгүй дамжуулах боломжтой зардлын шийдэл.
Cashdollar, J. & Wymer, L. Усны дээжээс вирусын анхны концентрацийн аргууд: сүүлийн үеийн судалгааны тойм ба мета-анализ.Ж.Хэрэглээ.бичил биетэн.115, 1-11 хуудас (2013).
Gall, AM, Mariñas, BJ, Lu, Y. & Shisler, JL Усаар дамждаг вирусууд: Аюулгүй ундны усны саад тотгорууд. PLoS эмгэг төрүүлэгчид.11, E1004867 (2015).
Shrestha, S. et al. Бага болон дунд орлоготой орнуудад COVID-19-ийн өртөг хэмнэлттэй том хэмжээний тандалт хийх бохир усны эпидемиологи: сорилт ба боломжууд. Ус 13, 2897 (2021).
Palecek, E. & Bartosik, M. Nucleic acid electrochemistry.Chemical.Rev.112, 3427–3481 (2012).
Tani, A., Thomson, AJ & Butt, JN Метилен хөх нь алтны субстрат дээр хөдөлгөөнгүй болсон нэг ба хоёр судалтай олигонуклеотидын цахилгаан химийн ялгаварлагч юм.Аналист 126, 1756–1759 (2001).
Wong, EL, Erohkin, P. & Gooding, JJ Comparison of Cation and Anion intercalators for electrochemical Transduction of DNA Hybridization by Long Range Electron Transfer.Electrochemistry.comminicate.6, 648–654 (2004).
Wong, EL & Gooding, JJ ДНХ-ээр дамжуулан цэнэгийн шилжүүлэг: сонгомол цахилгаан химийн ДНХ biosensor.anus.Chemical.78, 2138–2144 (2006).
Fang, TH et al. Бодит цагийн ПГУ-ын микрофлюидик төхөөрөмж зэрэгцээ цахилгаан химийн илрүүлэлт.биологийн мэдрэгч.Биоэлектроник.24, 2131–2136 (2009).
Win, BY et al. Метилен цэнхэрийн ДНХ-тэй харилцан үйлчлэлд суурилсан цахилгаан химийн бодит цагийн ПГУ-ын системийн дохиоллын механизмын судалгаа, гүйцэтгэлийн баталгаажуулалт. Аналист 136, 1573–1579 (2011).
Ramirez-Chavarria, RG et al. Бохир усны дээжинд sars-cov-2-г илрүүлэх гогцоонд зуучлагдсан изотерм олшруулалтад суурилсан цахилгаан химийн мэдрэгч.J.Байгаль орчин.Хими.Британи.10, 107488 (2022).
Кумар, М. нар. ПХБ электродууд бүхий SARS-CoV-2 ампликонуудын цахилгаан химийн мэдрэгч. Мэдрэгчийг идэвхжүүлсэн. B Chemistry.343, 130169 (2021).
Kitamura, K., Sadamasu, K., Muramatsu, M. & Yoshida, H. Хаягдал усны хатуу хэсэг дэх SARS-CoV-2 РНХ-ийг үр дүнтэй илрүүлэх.science.general environment.763, 144587 (2021).
Alygizakis, N. et al. Analytic Methods for SARS-CoV-2 Detection in Wastewater: Protocol and Future Perspectives. TraC trending anal. Chemical.134, 116125 (2020).
Федоренко, А., Гринберг, М., Ореви, Т. & Каштан, Н. Шилэн гадаргуу дээр хуримтлагдсан ууршсан шүлсний дуслууд дахь бүрхүүлтэй бактериофагийн Phi6 (SARS-CoV-2-ийн орлуулагч) амьд үлдэх нь.science.Rep.10, 1–10 (2020).
Dey, R., Dlusskaya, E. & Ashbolt, NJ. Чөлөөт амьдардаг амебба дахь SARS-CoV-2 орлуулагчийн (Phi6) хүрээлэн буй орчны тогтвортой байдал.Ж.Усны эрүүл мэнд 20, 83 (2021).
Mindich, L. Хоёр судалтай РНХ бактериофагийн геномын гурван фрагментийн нарийн савлагаа\(\varphi\)6.микроорганизм.Мур.биологи.Хян.63, 149–160 (1999).
Пирттимаа, MJ & Bamford, DH РНХ фагийн хоёрдогч бүтэц\(\varphi\)6 савлагааны бүс.RNA 6, 880–889 (2000).
Bonilla, N. et al. Phages on the Tap – Бактериофагийн лабораторийн нөөцийг бэлтгэх хурдан бөгөөд үр дүнтэй протокол. PeerJ 4, e2261 (2016).
Шуудангийн цаг: 2022 оны 5-р сарын 27-ны хооронд