ຂໍຂອບໃຈສຳລັບການເຂົ້າເບິ່ງ Nature.com. ເວີຊັນຂອງບຣາວເຊີທີ່ທ່ານກຳລັງໃຊ້ຢູ່ມີການຮອງຮັບ CSS. ສໍາລັບປະສົບການທີ່ດີທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາແນະນຳໃຫ້ທ່ານໃຊ້ໂປຣແກຣມທ່ອງເວັບທີ່ອັບເດດແລ້ວ (ຫຼືປິດໂໝດເຂົ້າກັນໄດ້ໃນ Internet Explorer). ໃນລະຫວ່າງນີ້, ເພື່ອຮັບປະກັນ ສືບຕໍ່ສະຫນັບສະຫນູນ, ພວກເຮົາຈະສະແດງເວັບໄຊທ໌ໂດຍບໍ່ມີຮູບແບບແລະ JavaScript.
ຄວາມສໍາຄັນຂອງການຕິດຕາມຕົວຢ່າງສິ່ງແວດລ້ອມໄດ້ຮັບການຍົກຍ້ອງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍນັບຕັ້ງແຕ່ການເລີ່ມຕົ້ນຂອງການແຜ່ລະບາດຂອງ COVID-19, ແລະບາງຄວາມພະຍາຍາມໃນການຕິດຕາມໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ມາດຕະຖານຄໍາ, ເຖິງແມ່ນວ່າເຕັກນິກທີ່ອີງໃສ່ qPCR ແມ່ນລາຄາແພງ. ຊີວະພາບ DNA ໄຟຟ້າສາມາດສະຫນອງຄ່າໃຊ້ຈ່າຍທີ່ມີປະສິດທິພາບ. ການແກ້ໄຂສໍາລັບການຕິດຕາມຕົວຢ່າງນ້ໍາສິ່ງແວດລ້ອມໃນປະເທດທີ່ມີລາຍໄດ້ຕ່ໍາແລະປານກາງ. ໃນວຽກງານນີ້, ພວກເຮົາສະແດງໃຫ້ເຫັນການກວດພົບທາງເຄມີຂອງ amplicons ທີ່ໄດ້ຮັບຈາກ Phi6 phage ທີ່ໂດດດ່ຽວຈາກຕົວຢ່າງນ້ໍາທະເລສາບທີ່ມີ spiked (ຕົວແທນທີ່ນິຍົມສໍາລັບ SARS-CoV-2), ໂດຍໃຊ້ ENIG ເພື່ອເຮັດສໍາເລັດ electrodes PCB ໂດຍບໍ່ມີການດັດແປງພື້ນຜິວ.sex. ການຕອບສະໜອງຂອງເຊັນເຊີໄຟຟ້າເຄມີແມ່ນມີລັກສະນະຢ່າງລະອຽດສໍາລັບສອງຊິ້ນ DNA ທີ່ມີຄວາມຍາວແຕກຕ່າງກັນ (\({117}\,\hbox {bp}\) ແລະ \({503}\,\hbox {bp}\)), ແລະ ຜົນກະທົບຂອງເກືອໃນ PCR ແມ່ບົດປະສົມກ່ຽວກັບ methylene blue (MB)-DNA interactions. ຜົນຂອງການຂອງພວກເຮົາສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຄວາມຍາວຂອງຊິ້ນ DNA ໄດ້ກໍານົດຄວາມອ່ອນໄຫວດ້ານໄຟເຄມີຢ່າງຫຼວງຫຼາຍແລະສະແດງໃຫ້ເຫັນໃນວຽກງານນີ້ວ່າຄວາມສາມາດໃນການກວດສອບ amplicons ຍາວໂດຍບໍ່ມີການ gel purification ຂອງຜະລິດຕະພັນ PCR ແມ່ນ. ສໍາຄັນສໍາລັບການວັດແທກສະຖານທີ່ຂອງຕົວຢ່າງນ້ໍາ.ການແກ້ໄຂອັດຕະໂນມັດຢ່າງເຕັມສ່ວນສໍາລັບການໂຫຼດໄວຣັສໄດ້ດີ.
ການແຜ່ເຊື້ອໄວຣັດທາງນ້ຳໄດ້ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກວ່າເປັນໄພອັນຕະລາຍຕໍ່ສຸຂະພາບຂອງປະຊາຊົນຕັ້ງແຕ່ຊຸມປີ 1940 ເປັນຕົ້ນມາ ໂດຍມີຫຼັກຖານທຳອິດຂອງການຕິດຕໍ່ທາງນ້ຳຂອງພະຍາດໂປລິໂອ ແລະ ຕັບອັກເສບ E1. ອົງການອະນາໄມໂລກ (WHO) ໄດ້ຈັດປະເພດເຊື້ອໄວຣັດທາງນ້ຳຫຼາຍຊະນິດທີ່ມີຄວາມສຳຄັນຕໍ່ສຸຂະພາບລະດັບປານກາງເຖິງສູງ2. ໄວຣັສພື້ນເມືອງ ວິທີການກວດຫາແມ່ນອີງໃສ່ເຕັກນິກທີ່ອີງໃສ່ qPCR ມາດຕະຖານທອງ, ເຊິ່ງມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ ແລະ ສະເພາະ, ແຕ່ຕ້ອງການບຸກຄະລາກອນທີ່ມີຄວາມຊໍານິຊໍານານເພື່ອທົດສອບໃນຫ້ອງທົດລອງໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງມືລາຄາແພງ. ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ໃນປະເທດທີ່ມີລາຍໄດ້ຕໍ່າ ແລະ ປານກາງ (LMICs) ທີ່ມີຊັບພະຍາກອນຈໍາກັດ, ມະນຸດ. ການທົດສອບຕົວຢ່າງມີແນວໂນ້ມທີ່ຈະເປັນອັນດັບຕົ້ນຂອງການຕິດຕາມຕົວຢ່າງນ້ໍາສິ່ງແວດລ້ອມ. ດັ່ງນັ້ນ, ທາງເລືອກທີ່ມີຄ່າໃຊ້ຈ່າຍຕ່ໍາແມ່ນຈໍາເປັນສໍາລັບການຕິດຕາມກວດກາແບບຍືນຍົງ, ໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງຂອງນ້ໍາແລະນ້ໍາເສຍໃນປະເທດທີ່ມີລາຍໄດ້ຕ່ໍາແລະປານກາງ, ເປັນຄໍາເຕືອນເບື້ອງຕົ້ນຂອງການລະບາດຂອງພະຍາດ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງປົກປ້ອງພວກເຂົາຈາກຜົນກະທົບທາງເສດຖະກິດສັງຄົມທີ່ຮ້າຍແຮງຂອງການແຜ່ລະບາດຂອງເຊື້ອໄວຣັສ. ເຄື່ອງກວດຈັບທາງເຄມີ electrochemical ທີ່ມີລາຄາຖືກສໍາລັບອາຊິດນິວຄລີອິກສາມາດສະຫນອງການແກ້ໄຂທີ່ມີທ່າແຮງສໍາລັບຄວາມຕ້ອງການທີ່ບໍ່ມີປະໂຫຍດນີ້. ຊີວະວິທະຍາ DNA ຈໍານວນຫຼາຍເຫຼົ່ານີ້ເຮັດວຽກໂດຍຄວາມຈິງທີ່ວ່າສາຍ DNA ເສີມແມ່ນ immobilized ໃນ electrode. ພື້ນຜິວ ແລະປະສົມກັນເມື່ອມີລໍາດັບທີ່ກົງກັນຢູ່ໃນຕົວຢ່າງ. ນີ້ສາມາດຖືກປ່ຽນເປັນສັນຍານໂດຍເຕັກນິກໄຟຟ້າເຄມີຕ່າງໆໂດຍໃຊ້ຕົວໄກ່ເກ່ຍ redox ເຊັ່ນ: ທາດເຫຼັກໂພແທດຊຽມ/ferrocyanide.Methylene blue (MB) ແມ່ນໜຶ່ງໃນໂມເລກຸນ redox-active, ເຊິ່ງມີ. ໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າ intercalate ເຂົ້າໄປໃນ DNA ຄູ່ (dsDNA) ນອກເຫນືອໄປຈາກການຜູກມັດທີ່ບໍ່ສະເພາະຂອງມັນກັບ DNA5,6. ລັກສະນະ intercalating ຂອງ MBs ເພື່ອສ້າງສະລັບສັບຊ້ອນ MB-DNA ເຮັດໃຫ້ພວກເຂົາເປັນທາງເລືອກທີ່ນິຍົມເປັນຜູ້ໄກ່ເກ່ຍ redox ໃນ DNA electrochemical ຫຼາຍ. ການຕັ້ງຄ່າເຊັນເຊີ 5,6,7,8,9.ເຖິງແມ່ນວ່າການເຊື່ອມໂຍງຂອງ MB ກັບ DNA ແມ່ນບໍ່ສະເພາະ, ແລະຄວາມສະເພາະຂອງເຊັນເຊີໄຟຟ້ານີ້ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນຂຶ້ນກັບຄວາມບໍລິສຸດຂອງ primers ທີ່ໃຊ້ສໍາລັບການຂະຫຍາຍ PCR ຫຼື isothermal, ມັນ ເໝາະ ສົມທີ່ສຸດ ສຳ ລັບການປະຕິບັດຕົວຈິງ. -time electrochemical-based qPCR ຫຼື fluorescence isothermal amplification ເປັນທາງເລືອກໃນການວັດແທກຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ DNA 9 .ໃນການປະຕິບັດດັ່ງກ່າວ, Won et al. ດ້ານຂອງ electrodes ຄໍາໄດ້ຖືກດັດແກ້ດ້ວຍ 6-mercapto-1-hexanol (MCH) ໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງ. ການວັດແທກ PCR amplicons ກັບ MB ໂດຍໃຊ້ differential pulse voltammetry (DPV)9.In other case, Ramirez et al.Detection of SARS-CoV-2 in wastewater by RT-LAMP reaction using MB with screen-printed electrodes.Platinum electrodes ຍັງໄດ້ ໃຊ້ເປັນອົງປະກອບ electrodes ໃນແພລະຕະຟອມ microfluidic PCR ທີ່ຖືກອອກແບບມາເພື່ອກວດຫາທາງເຄມີຂອງ amplicons ໃນລະຫວ່າງການຕິກິຣິຍາ 8 .ການສຶກສາທັງຫມົດເຫຼົ່ານີ້ຕ້ອງການການດັດແປງດ້ານຂອງ electrodes, ເຊິ່ງຫມາຍເຖິງການຜະລິດແລະຄ່າໃຊ້ຈ່າຍໃນການດໍາເນີນງານທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນເນື່ອງຈາກຄວາມຕ້ອງການເກັບຮັກສາພິເສດສໍາລັບຄວາມຫມັ້ນຄົງຂອງ electrodes ທີ່ເຮັດວຽກເຫຼົ່ານີ້.
Schematic ຂອງຂະບວນການເຮັດວຽກສໍາລັບການກວດພົບ electrochemical ຂອງ amplicons ທີ່ໄດ້ຮັບຈາກອະນຸພາກໄວຣັສທີ່ເຂັ້ມຂຸ້ນໃນຕົວຢ່າງນ້ໍາທະເລສາບ.
ພວກເຮົາບໍ່ດົນມານີ້ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຮັບຮູ້ທາງເຄມີຂອງ SARS-CoV-2 amplicons ກັບແຜ່ນວົງຈອນພິມທີ່ມີລາຄາຖືກ (PCB) electrodes ໂດຍອີງໃສ່ DPV ແລະ voltammetry ວົງຈອນ (CV) induced ດ້ວຍການດູດຊຶມຂອງສະລັບສັບຊ້ອນ MB-DNA ຢູ່ດ້ານຂອງ electrodes ທີ່ບໍ່ມີການແກ້ໄຂ ) ການປ່ຽນແປງໃນຈຸດສູງສຸດ. ປະຈຸບັນ 11.ພວກເຮົາລາຍງານວ່າຊິ້ນ DNA ທີ່ຍາວກວ່າ (N1-N2, \({943}\, \hbox)) ສ້າງຂຶ້ນໂດຍໃຊ້ N1 forward ແລະ N2 reverse primers ທີ່ CDC ແນະນໍາເມື່ອປຽບທຽບກັບ fragments ສັ້ນກວ່າ {bp}\)) ສະແດງໃຫ້ເຫັນ linearity ທີ່ດີກວ່າໃນການຕອບສະຫນອງຂອງເຊັນເຊີ. ( N1, \(72\,\hbox {bp}\))) ສ້າງຂຶ້ນໂດຍໃຊ້ N1 forward ແລະ N1 reverse primer sets. ການສຶກສາເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກລາຍງານໂດຍໃຊ້ການເຈືອຈາງຂອງ DNA ທີ່ກຽມໄວ້ໃນນ້ໍາທີ່ບໍ່ມີນິວເຄລຍ. ເວທີດັ່ງກ່າວຍັງຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກວດຫາ SARS-CoV. -2 ແອມພິຄອນໃນຕົວຢ່າງນ້ຳເສຍທີ່ຈຳລອງ (ໄດ້ມາຈາກການຂະຫຍາຍຕົວຢ່າງ RNA ທັງໝົດດ້ວຍ SARS-CoV-2 RNA). ເນື່ອງຈາກ RNA ມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ກັບການແຕກແຍກໃນລະຫວ່າງການແຍກຕົວ ແລະ ການປະມວນຜົນທາງລຸ່ມ, 12,13 ມັນຍາກທີ່ຈະຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວກວ່າດ້ວຍຕົວຢ່າງທີ່ຫຼາກຫຼາຍຊະນິດນີ້. ດັ່ງນັ້ນ, ການສາທິດການຮັບຮູ້ທາງເຄມີຂອງ SARS-CoV-2 amplicon ໃນນ້ໍາເສຍແມ່ນຈໍາກັດພຽງແຕ່ fragment \(72\,\hbox {bp}\) N1 ທີ່ສັ້ນກວ່າ.
ໃນການເຮັດວຽກນີ້, ພວກເຮົາໄດ້ສືບສວນຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການຮັບຮູ້ທາງເຄມີທີ່ອີງໃສ່ ENIG PCB ຂອງ phage Phi6 ເຂັ້ມຂຸ້ນແລະແຍກອອກຈາກຕົວຢ່າງນ້ໍາໃນທະເລສາບ (ຮູບ 1).Phages Phi6 ແມ່ນທຽບເທົ່າກັບຂະຫນາດ (80-100 nm) ກັບ SARS-CoV-2 ແລະ. ຍັງມີເຍື່ອ lipid ແລະທາດໂປຼຕີນຈາກຮວງຕັ້ງແຈບ. ສໍາລັບເຫດຜົນເຫຼົ່ານີ້, bacteriophage Phi6 ເປັນຕົວແທນທີ່ນິຍົມສໍາລັບ SARS-CoV-2 ແລະເຊື້ອໄວຣັດ RNA ທີ່ຫຸ້ມຫໍ່ອື່ນໆທີ່ແຍກອອກຈາກ particles phage ຖືກໃຊ້ເປັນແມ່ແບບສໍາລັບການສັງເຄາະ cDNA ຕາມດ້ວຍ. PCR ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຊິ້ນ DNA ສອງສ່ວນຂອງ 117 ແລະ 503 ຄູ່ພື້ນຖານໃນຄວາມຍາວ. ເນື່ອງຈາກຄວາມທ້າທາຍຂອງການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນ \(943\,\hbox {bp}\) N1-N2 fragments ໃນວຽກງານທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ, ພວກເຮົາເປົ້າຫມາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ມີຄວາມຍາວປານກາງ (\(117. \,\hbox {bp}\) ແລະ \(503 \,\hbox {bp}\)), ໂດຍອີງໃສ່ primers ທີ່ມີຢູ່. ການຕອບສະໜອງຂອງເຊັນເຊີໄຟຟ້າເຄມີໄດ້ຖືກສຶກສາຢ່າງເປັນລະບົບໃນໄລຍະຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນກວ້າງ (\({10}\,{ \hbox {pg}/{\upmu \hbox {l}}}\) ເຖິງ \({20}\, {\hbox {ng}/\upmu \hbox {l}}}\)) ສໍາລັບທັງສອງຊິ້ນໃນ ການປະກົດຕົວຂອງ MB, ຜົນກະທົບຂອງເກືອຕໍ່ການຕອບສະຫນອງຂອງເຊັນເຊີໄດ້ມີລັກສະນະແລະການກວດສອບຂ້າມໂດຍການວັດແທກ spectrophotometric. ການປະກອບສ່ວນຕົ້ນຕໍຂອງວຽກງານນີ້ແມ່ນມີດັ່ງນີ້:
ຄວາມຍາວຂອງຊິ້ນ DNA ແລະການປະກົດຕົວຂອງເກືອໃນຕົວຢ່າງມີຜົນກະທົບຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຕໍ່ຄວາມອ່ອນໄຫວ.ຜົນໄດ້ຮັບຂອງພວກເຮົາສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າກິດຈະກໍາທາງເຄມີແມ່ນຂຶ້ນກັບກົນໄກທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງປະຕິສໍາພັນຂອງ MB, DNA, ແລະເຊັນເຊີໃນການຕອບສະຫນອງ voltammetric, ຂຶ້ນກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ DNA ແລະຄວາມຍາວ, ມີ Fragments ຍາວສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ, ເຖິງແມ່ນວ່າເກືອມີຜົນກະທົບທາງລົບຕໍ່ປະຕິສໍາພັນ electrostatic ລະຫວ່າງ. MB ແລະ DNA.
ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DNA ກໍານົດກົນໄກຂອງປະຕິສໍາພັນ MB-DNA ໃນ electrodes ທີ່ບໍ່ໄດ້ດັດແປງ ພວກເຮົາສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າກົນໄກທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງປະຕິສໍາພັນ MB-DNA ແມ່ນຂຶ້ນກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ DNA. ຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ DNA ຕ່ໍາກວ່າຈໍານວນຂະຫນາດນ້ອຍຂອງ \({\hbox {ng}/{\upmu \hbox. {l}}}\), ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນວ່າການຕອບໂຕ້ກະແສໄຟຟ້າທາງເຄມີສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນຖືກກໍານົດໂດຍການດູດຊຶມຂອງ MB-DNA ໃນ electrode, ໃນຂະນະທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕ່ໍາຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ DNA ສູງ, ການຕອບສະຫນອງຂອງໄຟຟ້າເຄມີແມ່ນຖືກກໍານົດໂດຍການຍັບຍັ້ງ steric ຂອງ redox. ການເຄື່ອນໄຫວເນື່ອງຈາກການແຊກ MB ລະຫວ່າງຄູ່ DNA.
ENIG PCB-Based Electrochemical Sensing of Viral Nucleic Acids in Lake Water Samples ການສັງເກດການໄດ້ຖືກກວດສອບໂດຍການກວດສອບທາງເຄມີໄຟຟ້າຂອງ Phi6-added \(503\,\hbox {bp}\) ຊິ້ນ DNA ທີ່ມາຈາກຕົວຢ່າງນ້ໍາຈາກ Powai Lake, IIT Mumbai Campus ຜົນໄດ້ຮັບ.
ຄ່າໃຊ້ຈ່າຍຕ່ໍາຂອງການປະຕິບັດແລະຄວາມສາມາດສໍາລັບການເຊື່ອມໂຍງເຂົ້າໄປໃນລະບົບການຕິດຕາມອັດຕະໂນມັດຢ່າງເຕັມທີ່, oligonucleotides ຫຼື aptamers ກ່ຽວກັບ electrodes ທີ່ມີຊີວິດທີ່ຍາວກວ່າ.
Phage Phi6 ແມ່ນເຊື້ອໄວຣັສ dsRNA ຫຸ້ມຫໍ່ຂອງຄອບຄົວ Cytoviridae ທີ່ຕິດເຊື້ອ Pseudomonas syringae. genome ຂອງ Phi6 phage ມີຢູ່ໃນຮູບແບບຂອງ 3 fragments: S (\(2.95\,\hbox {Kb}\)), M (\(4.07). \,\hbox {Kb}\)) ແລະ L (\ (6.37\ ,\hbox{Kb}\))16,17.ນັບຕັ້ງແຕ່ Phi6 phage ຕິດເຊື້ອສາຍພັນ BSL-1 Pseudomonas ທີ່ບໍ່ແມ່ນເຊື້ອພະຍາດ, ມັນປອດໄພທີ່ຈະໃຊ້ ແລະສາມາດປູກໄດ້ງ່າຍໃນຫ້ອງທົດລອງ.Phage Phi6 ແລະ Pseudomonas syringae ເຈົ້າພາບແມ່ນໄດ້ຊື້ຈາກສູນອ້າງອິງ Felix d'Herelle ສໍາລັບເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ, ມະຫາວິທະຍາໄລ Laval, ການາດາ (ຕົວເລກສູນອ້າງອີງແມ່ນ HER-102 ແລະ HER-1102, ຕາມລໍາດັບ) .Phi6 phage ແລະເຈົ້າພາບຂອງມັນຖືກຟື້ນຟູຕາມການຊີ້ນໍາຂອງສູນອ້າງອີງ.Phage Phi6 ໄດ້ຖືກຊໍາລະໂດຍ plate lysis ແລະ elution ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ titers ສຸດທ້າຍດ້ວຍ \(\ ປະມານ 10^{12}\, \hbox {PFU}/\hbox { ml}}\) (ຫນ່ວຍປະກອບເປັນແຜ່ນ/ມິນລີລິດ).RNA ໄດ້ຖືກແຍກອອກຈາກອະນຸພາກ phage ບໍລິສຸດໂດຍໃຊ້ GenElute™ Universal Total RNA Purification Kit (Sigma-Aldrich) ຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ.ໂດຍຫຍໍ້, ເປັນ phage suspension Phi6 ບໍລິສຸດ\({ 100}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) ຖືກ lysed ແລະ lysate ໄດ້ຖືກໂຫລດໃສ່ຖັນ spin ເພື່ອໃຫ້ RNA ຜູກມັດກັບຖັນ resin . RNA ໄດ້ຖືກ eluted ໃນການແກ້ໄຂ elution \({ 50}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) ສະໜອງໃຫ້ໂດຍຊຸດ.ຄາດຄະເນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ RNA ໂດຍການດູດຊຶມຢູ່ທີ່ \(260\,\hbox {nm}\).RNA ຖືກເກັບໄວ້ໃນ aliquots ໃນ \ ({-80}\,{^{\circ }\hbox {C}}\) ຈົນກວ່າຈະນຳໃຊ້ຕໍ່ໄປ.\({2}\,\upmu \hbox {g}}\) ຊຸດການສັງເຄາະ iScript cDNA (Bio -Rad Laboratories) ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນແມ່ແບບສໍາລັບການສັງເຄາະ cDNA ຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ. ໂດຍຫຍໍ້, ປະຕິກິລິຍາການສັງເຄາະ cDNA ປະກອບດ້ວຍ 3 ຂັ້ນຕອນ: priming ຢູ່ \({25}\,{^{\circ }\hbox {C}}\ )\({5}\,\hbox {min} }\) , reverse transcription of \({20}\,{\hbox {min}}\) at \({46}\,{^{\circ }\hbox {C}}\), ແລະ reverse ເຄື່ອງບັນທຶກແມ່ນຢູ່ໃນ \({95}\,{^{\circ }\hbox {C}}\) ສໍາລັບ \({1}\,{\hbox {ນາທີ ) ການນໍາໃຊ້ cDNA ເປັນແມ່ແບບສໍາລັບ PCR ໃນ miniPCR® mini8 cycler ຄວາມຮ້ອນ:
primers ສໍາລັບ \(117\,\hbox {bp}\) ແລະ \(503\,\hbox {bp}\) ກົງກັນກັບ 1476-1575 nucleotides ຂອງ M segment ແລະ 458-943 nucleotides ຂອງ L segment, ຕາມລໍາດັບ. .ທຸກຜະລິດຕະພັນ PCR ຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນໄດ້ຖືກ electrophoresed ໃນ 1% agarose gels, ແລະ amplified DNA ເປົ້າຫມາຍໄດ້ຖືກ purified ໂດຍໃຊ້ຊຸດ GeneJET Gel Extraction (Thermo Fisher Scientific).
ທະເລສາບຢູ່ວິທະຍາເຂດ IIT Mumbai (ທະເລສາບ Powai, Powai, Mumbai) ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອເພີ່ມ particles phage. ນ້ໍາໃນທະເລສາບໄດ້ຖືກກັ່ນຕອງຜ່ານເຍື່ອ \({5}\,{\upmu \hbox {m}}\) ເພື່ອເອົາອອກ. ອະນຸພາກທີ່ລະງັບໄວ້, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ Phi6 phage ໄດ້ຖືກເພີ່ມ. ຕື່ມ \({1}\,\hbox {ml}}\) ຂອງ \(10^{6}\,{\hbox {PFU}/\hbox {ml}} \) ເຖິງ \( {100}\ ,{\hbox {ml}}\) ການກັ່ນຕອງນ້ໍາທະເລສາບ, ໃນ \({4}\,{^{\circle}\hbox {C}}\).A aliquot ຂະຫນາດນ້ອຍແມ່ນ ສະຫງວນໄວ້ສໍາລັບການວັດແທກການໂຫຼດໄວຣັສໂດຍ plaque assay. ພວກເຮົາໄດ້ທົດສອບສອງວິທີທີ່ແຕກຕ່າງກັນເພື່ອສຸມໃສ່ອະນຸພາກເຊື້ອໄວຣັສ Phi6 ທີ່ມີຮວງຕັ້ງແຈບ: (1) ວິທີການດູດຊຶມອາລູມິນຽມ hydroxide adsorption-precipitation, 19 ທີ່ໄດ້ຮັບການກວດສອບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງໄວຣັສ RNA ຫຼາຍຊອງຈາກຕົວຢ່າງສິ່ງແວດລ້ອມ, ແລະ. (2) ) ວິທີການຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເຊື້ອໄວຣັສທີ່ອີງໃສ່ polyethylene glycol (PEG) ໄດ້ຖືກດັດແປງມາຈາກ Flood et al.20 .ນັບຕັ້ງແຕ່ປະສິດທິພາບການຟື້ນຕົວຂອງວິທີການທີ່ອີງໃສ່ PEG ໄດ້ຖືກພົບເຫັນວ່າດີກວ່າວິທີການຂອງອາລູມິນຽມ hydroxide, ວິທີການທີ່ໃຊ້ PEG ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສຸມໃສ່ອະນຸພາກ Phi6 ຈາກຕົວຢ່າງນ້ໍາທະເລສາບ.
ວິທີການ PEG ທີ່ໃຊ້ມີດັ່ງນີ້: PEG 8000 ແລະ \(\hbox {NaCl}\) ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ຕົວຢ່າງນ້ໍາທະເລສາບ Phi6-spiked ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ 8% PEG 8000 ແລະ \(0.2\,\hbox {M} \) \( \ hbox {NaCl}\).ຕົວຢ່າງຖືກອົບໃສ່ເຄື່ອງສັ່ນ\({4}\,{^{\circ }\hbox {C}}\)\({4}\,\hbox {h}}\ ), ຫຼັງຈາກນັ້ນ, centrifuged ທີ່ \(4700 \,\hbox {g}\) ແມ່ນ \({45}\, \hbox {min}}\).ໃຫ້ຖິ້ມ supernatant ແລະຢຸດ pellet ໃນ \({1}\, {\hbox {ml}}\) ໃນ supernatant ດຽວກັນ. ການທົດລອງຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ spiking ແລະເຊື້ອໄວຣັສທັງຫມົດແມ່ນດໍາເນີນໃນ triplicate. ຫຼັງຈາກຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ, aliquot ຂະຫນາດນ້ອຍໄດ້ຖືກສະຫງວນໄວ້ສໍາລັບການວັດແທກປະສິດທິພາບການຟື້ນຟູໂດຍ plaque assay.RNA ຖືກແຍກອອກຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍກ່ອນຫນ້ານີ້ແລະ eluted. ໃນ kit-supplied elution buffer\({40}\,{\upmu \hbox {l}}\).ເນື່ອງຈາກຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ RNA ຈະແຕກຕ່າງກັນຈາກຕົວຢ່າງໄປຫາຕົວຢ່າງໃນ triplicate, \({2}\,{\upmu \ hbox {l}}\) ຂອງ RNA ຖືກໃຊ້ສໍາລັບທັງສາມໂດຍບໍ່ຄໍານຶງເຖິງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ cDNA ການສັງເຄາະຂອງ samples.cDNA ການສັງເຄາະໄດ້ຖືກປະຕິບັດຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້.\({1}\,{\upmu \hbox {l}}\) cDNA ຖືກໃຊ້ເປັນແມ່ແບບສໍາລັບ \({20}\, \upmu \hbox {l}}\) PCR ສໍາລັບ 35 ຮອບເພື່ອຂະຫຍາຍ \ (117\,\hbox {bp}\) ແລະ \(503\,\hbox { bp}\) fragments.ຕົວຢ່າງເຫຼົ່ານີ້ຖືກສະແດງເປັນ “1:1″, ie ໂດຍບໍ່ມີການ dilution. ການຄວບຄຸມທີ່ບໍ່ມີແມ່ແບບ (NTC) ຖືກຕັ້ງເປັນການຄວບຄຸມທາງລົບ, ໃນຂະນະທີ່ cDNA ສັງເຄາະໂດຍໃຊ້ RNA ທີ່ແຍກອອກຈາກ phage ບໍລິສຸດໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ. ເປັນແມ່ແບບສໍາລັບການຄວບຄຸມທາງບວກ (PC).Quantitative PCR (qPCR) ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນເຄື່ອງມື Stratagene Mx3000P RT-PCR ໂດຍໃຊ້ Brilliant III Ultra-Fast SYBR Green QPCR Master Mix (Agilent Technologies).ປະຕິກິລິຍາຖືກຕັ້ງຄ່າເປັນ triplicate ຕາມທີ່ເຄີຍເຮັດ. ອະທິບາຍ. ຂອບເຂດຮອບວຽນ (Ct) ໄດ້ຖືກບັນທຶກໄວ້ສໍາລັບທຸກຕົວຢ່າງ. ນອກຈາກນັ້ນ, ຕົວຢ່າງທີ່ເສື່ອມໄດ້ແມ່ນ \({1}\,{\upmu \hbox {l}}\) ໂດຍໃຊ້ cDNA ເຈືອຈາງ 1:100 ໃນນ້ໍາທະເລສາບທີ່ຖືກກັ່ນຕອງເປັນ. \({20}\,{\upmu \hbox {l}}\) PCR ສໍາລັບ 35 ຮອບວຽນ. ຕົວຢ່າງເຫຼົ່ານີ້ຖືກສະແດງເປັນ “1:100″.
electrodes PCB ແມ່ນ fabricated ໂດຍໃຊ້ຂະບວນການ Electroless Nickel Immersion Gold (ENIG) ທີ່ມີລາຄາຖືກທີ່ມີການຄ້າໃນການຄ້າໂດຍບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງມີແຜ່ນທອງຄໍາເພີ່ມເຕີມ. ENIG PCB electrode specifications ແມ່ນມີລາຍລະອຽດໃນ work11.For ຂອງພວກເຮົາກ່ອນຫນ້ານີ້ electrodes PCB, ວິທີການທໍາຄວາມສະອາດ electrode ແບບດັ້ງເດີມເຊັ່ນ: ການແກ້ໄຂ piranha ຫຼືອາຊິດຊູນຟູຣິກ voltammetry cyclic voltammetry ແມ່ນບໍ່ແນະນໍາຍ້ອນວ່າພວກມັນອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການປອກເປືອກຂອງຊັ້ນຄໍາບາງໆ (ຄວາມຫນາ \(\ approx\) \(100\,\hbox {nm }\)) ແລະເຮັດໃຫ້ຊັ້ນທອງແດງທີ່ຕິດພັນແມ່ນມີຄວາມສ່ຽງ. ຕໍ່ກັບການກັດກ່ອນ 21, 22, 23, 24, 25. ດັ່ງນັ້ນ, ເຮັດຄວາມສະອາດ electrodes ດ້ວຍຜ້າທີ່ບໍ່ມີເສັ້ນດ່າງທີ່ຊຸ່ມດ້ວຍ IPA. ຕົວຢ່າງທີ່ຈະທົດສອບໄດ້ຖືກອົບດ້ວຍ \({50}\,{\upmu \hbox {M}). }\) MB ໃນ \({4}\,{^{\circ }\hbox {C}}\)\({ 1}\,\hbox {h}}\) ເພື່ອງ່າຍໃນການແຊກ.ໃນວຽກງານທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ , ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນວ່າຄວາມອ່ອນໄຫວແລະເສັ້ນຊື່ຂອງເຊັນເຊີໄດ້ຖືກປັບປຸງໂດຍການເພີ່ມຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ MB 11 .ອີງໃສ່ການເພີ່ມປະສິດທິພາບທີ່ລາຍງານໃນວຽກກ່ອນຫນ້າຂອງພວກເຮົາ, ພວກເຮົາໃຊ້ \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໃນການຝັງ DNA ໃນການສຶກສານີ້. ການກວດຫາທາງເຄມີຂອງ DNA ເສັ້ນຄູ່ (ds-DNA) ສາມາດເຮັດໄດ້ໂດຍໃຊ້ anionic ຫຼື cationic intercalators. ເຖິງແມ່ນວ່າ intercalators anionic ກວດພົບ DNA ທີ່ມີການຄັດເລືອກທີ່ດີກວ່າ, ພວກມັນຕ້ອງການການຟອກຄືນ, ເຮັດໃຫ້ເວລາກວດຫາຍາວກວ່າ. ອີກດ້ານ ໜຶ່ງ, ເຄື່ອງປະສົມທາດຊີຊີລິກເຊັ່ນ MB ຕ້ອງການເວລາການອົບທີ່ສັ້ນກວ່າ, ປະມານ \({1}\,\hbox {h}}\) ສໍາລັບການກວດຫາທາງເຄມີຂອງ ds-DNA6. ແຕ່ລະການວັດແທກກ່ຽວຂ້ອງກັບການແຈກຢາຍຕົວຢ່າງເພື່ອທົດສອບ. electrode\({5}\,{{\upmu \hbox {l}}}\), ຈາກນັ້ນທຳຄວາມສະອາດດ້ວຍຜ້າປຽກຊຸ່ມ IPA, ກ່ອນທີ່ຈະດຳເນີນການກັບຕົວຢ່າງອື່ນ.ການວັດແທກອັນໜຶ່ງ. ແຕ່ລະຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກທົດສອບໃນ 5 electrodes ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ ເວັ້ນເສຍແຕ່ໄດ້ລະບຸໄວ້ເປັນຢ່າງອື່ນ.DPV ແລະ CV ການວັດແທກແມ່ນດໍາເນີນການໂດຍໃຊ້ PalmSens Sensit Smart potentiostat, ແລະຊອບແວ PSTrace ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການຕັ້ງຄ່າ potentiostat ແລະການເກັບຂໍ້ມູນ, ລວມທັງການຄິດໄລ່ສູງສຸດໃນປະຈຸບັນ. ການຕັ້ງຄ່າຕໍ່ໄປນີ້ແມ່ນຖືກນໍາໃຊ້. ສໍາລັບການວັດແທກ DPV ແລະ CV:
DPV: ເວລາສົມດຸນ = \(8\,\hbox {s}\), ຂັ້ນຕອນແຮງດັນ = \(3\,\hbox {mV}\), Pulse Voltage = \(25\,\hbox {mV}\), ໄລຍະເວລາຂອງກໍາມະຈອນ = \(50\,\hbox {ms}\), ອັດຕາການສະແກນ = \({20}\,\hbox {mV/s}\)
CV: ເວລາສົມດຸນ = \(8\,\hbox {s}\), ຂັ້ນຕອນແຮງດັນ = \(3\,\hbox {mV}\), ອັດຕາການກວາດ = \({300}\,\hbox {mV/s }\)
ກະແສໄຟຟ້າສູງສຸດທີ່ໄດ້ມາຈາກ voltammograms ຂອງ DNA ສະລັບສັບຊ້ອນດ້ວຍ \({50}\, \upmu \hbox {M}}\) MB: (a) \(503\,\hbox {bp}\) DPV , (b) \ (503\,\hbox {bp}\) CV, (c) \(117\,\hbox {bp}\) DPV, (d) \(117\,\hbox {bp}\) CV.
DPV ແລະ CV voltammograms ໄດ້ຮັບໃນ electrodes ENIG PCB \({50}\,\upmu \hbox {M}}\) MB ສະລັບສັບຊ້ອນດ້ວຍ DNA (ຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ 10–\({20}\, hbox {ng }/{\upmu \hbox {l}}}\) ie 0.13–\({0.26}\, \upmu \hbox {M}}\) ສໍາລັບ \(117\,\hbox {bp}\ ) ແລະ 0.03 –\({0.06}\,{\upmu \hbox {M}}\) ສໍາລັບ \(503\,\hbox {bp}\)). voltammograms ຕົວແທນແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ S1 ໃນຂໍ້ມູນເສີມ. ຮູບ 2 ສະແດງຜົນໄດ້ຮັບ ຂອງການວັດແທກ DPV ແລະ CV (ປັດຈຸບັນສູງສຸດ) ໂດຍໃຊ້ຜະລິດຕະພັນ PCR ທີ່ບໍລິສຸດ gel. ເມື່ອປຽບທຽບກັບການວັດແທກ CV, ການວັດແທກ DPV ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມອ່ອນໄຫວສູງກວ່າ (ປັດຈຸບັນເປັນຫນ້າທີ່ຂອງຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ DNA) ເພາະວ່າກະແສ capacitive ພື້ນຖານໃນການວັດແທກ CV ເຊື່ອງກະແສ Faradaic 26 .ຂໍ້ມູນ ສໍາລັບແຕ່ລະກ່ອງໃນ boxplot ປະກອບດ້ວຍການວັດແທກຈາກ 5 electrodes. ການວັດແທກທັງຫມົດໃຊ້ຊຸດ electrodes ດຽວກັນເພື່ອຫຼີກເວັ້ນຄວາມຜິດພາດການວັດແທກເນື່ອງຈາກ electrode-to-electrode ມີການປ່ຽນແປງ. ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນແນວໂນ້ມທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນໃນ DPV ແລະ CV ທີ່ວັດແທກກະແສໄຟຟ້າສູງສຸດສໍາລັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕ່ໍາຂອງ DNA. , ຍາວກວ່າ (\(503\,\hbox {bp}\)) \,\hbox {bp}\ ເມື່ອປຽບທຽບກັບ \(117) ) fragment. ນີ້ແມ່ນສອດຄ່ອງກັບແນວໂນ້ມທີ່ຄາດວ່າຈະມີການດູດຊຶມ electrode ລາຍງານໃນວຽກງານທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ. adsorption ຂອງ MB-DNA complex ອໍານວຍຄວາມສະດວກໃນການໂອນຄ່າໃຊ້ຈ່າຍໃນ electrode ໄດ້, ເຊິ່ງປະກອບສ່ວນກັບການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງຈຸດສູງສຸດໃນປະຈຸບັນ. -cytosine (GC) ເນື້ອໃນຂອງສອງ amplicons (\(117\,\hbox {bp}\) ແລະ \(503\,\hbox {bp}\)) ແມ່ນປະມານ 50%, ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການສັງເກດຄວາມແຕກຕ່າງແມ່ນເນື່ອງມາຈາກ. ເຖິງຄວາມຍາວ amplicon. ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ສໍາລັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DNA ທີ່ສູງຂຶ້ນ (\(>{2}\, \hbox {ng}/\upmu \hbox {l}}}\), ສໍາລັບ \(503\,\hbox {bp}) \) ແລະ \(>{10}\,{\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) ສໍາລັບ \(117\,\hbox {bp}\)), ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນສອງການຂະຫຍາຍ ກະແສໄຟຟ້າສູງສຸດຂອງ subs ແມ່ນຫຼຸດລົງໃນທັງ DPV ແລະ CV ການວັດແທກ. ນີ້ແມ່ນຍ້ອນວ່າ MB ອີ່ມຕົວແລະ intercalates ລະຫວ່າງຄູ່ພື້ນຖານຂອງ DNA, ເຊິ່ງກໍ່ໃຫ້ເກີດການຍັບຍັ້ງ steric ຂອງກິດຈະກໍາ redox ຂອງກຸ່ມທີ່ຫຼຸດລົງໃນ MB31,32.
在存在 \(2\,\hbox {mM}\) \({\hbox {MgCl }_2}\): (a) \(503\,\hbox {bp}\) DPV, (b) \(503 \,\hbox {bp}\) CV, (c) \(117\,\hbox {bp}\) DPV,(d) \(117\,\hbox {bp}\) CV.
ເກືອທີ່ມີຢູ່ໃນ PCR master mixs ລົບກວນປະຕິສໍາພັນ electrostatic ລະຫວ່າງ MB ແລະ DNA, ດັ່ງນັ້ນໂດຍການເພີ່ມ \(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl }_2\) ກັບ \({50} \,{\ upmu \hbox {M}}\) MB gel-purified ຜະລິດຕະພັນເພື່ອສຶກສາຜົນກະທົບຂອງເກືອຕໍ່ປະຕິສໍາພັນ MB-DNA. ດັ່ງທີ່ສະແດງໃນຮູບທີ 3, ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນວ່າສໍາລັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ DNA ທີ່ສູງຂຶ້ນ (\(>{2}\,{\ hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) (503\,\hbox {bp }\) ແລະ \(>{10}\, \hbox {ng}/\upmu \hbox { l}}}\) ສໍາລັບ \(117\,\hbox {bp} \)), ໃນ DPV ແລະ CV ການເພີ່ມເກືອບໍ່ມີຜົນກະທົບຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຕໍ່ການວັດແທກ (ເບິ່ງຮູບ S2 ໃນຂໍ້ມູນເສີມສໍາລັບ voltammograms ຕົວແທນ).ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຢູ່ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DNA ຕ່ໍາ, ການເພີ່ມເກືອຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ, ເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ບໍ່ມີການປ່ຽນແປງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນປະຈຸບັນກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ DNA. ຜົນກະທົບທາງລົບທີ່ຄ້າຍຄືກັນຂອງເກືອຕໍ່ການໂຕ້ຕອບ MB-DNA ແລະ intercalation ໄດ້ຖືກລາຍງານກ່ອນຫນ້ານີ້ໂດຍນັກຄົ້ນຄວ້າອື່ນໆ33,34.\(\hbox { Mg}^{2+}\) cations ຜູກມັດກັບກະດູກສັນຫຼັງຟອສເຟດລົບຂອງ DNA, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຂັດຂວາງປະຕິສໍາພັນ electrostatic ລະຫວ່າງ MB ແລະ DNA. ເມື່ອຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DNA ທີ່ສູງຂຶ້ນ, ການຍັບຍັ້ງ steric ຂອງ redox-active MBs ສົ່ງຜົນໃຫ້ກະແສໄຟຟ້າສູງສຸດຕ່ໍາ, ດັ່ງນັ້ນປະຕິສໍາພັນ electrostatic. ບໍ່ມີຜົນກະທົບຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຕໍ່ການຕອບສະຫນອງຂອງເຊັນເຊີ. ຈຸດສໍາຄັນແມ່ນວ່າ biosensor ນີ້ດີກວ່າທີ່ຈະກວດພົບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ DNA ທີ່ສູງຂຶ້ນ (ບໍ່ຄ່ອຍ \({\hbox {ng}/{\upmu \hbox {l}}}\) ຫຼືສູງກວ່າ), ສໍາລັບການຢ່າງເຕັມທີ່ - ການປຸງແຕ່ງອັດຕະໂນມັດຂອງຕົວຢ່າງນ້ໍາສິ່ງແວດລ້ອມ, ບ່ອນທີ່ການເຮັດໃຫ້ບໍລິເຈນຂອງຜະລິດຕະພັນ PCR ອາດຈະບໍ່ເປັນໄປໄດ້.
ພື້ນທີ່ພາຍໃຕ້ເສັ້ນໂຄ້ງການດູດຊຶມສໍາລັບໄລຍະຄວາມຍາວຄື່ນ 600–700 \(\hbox {nm}\) ສໍາລັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕ່າງໆຂອງ DNA ທີ່ຊັບຊ້ອນດ້ວຍ \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB: ( a ) \(503\,\hbox {bp}\) ມີ ແລະບໍ່ມີເກືອ (\(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl}_2\)), (b) \( 117\, \hbox {bp}\) ມີ ແລະບໍ່ມີເກືອ (\(2\,\hbox {mM}\) \(\hbox {MgCl}_2\)).\({0}\,\hbox {pg}/ {\upmu \hbox {l}}}\) ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DNA ທີ່ສອດຄ້ອງກັບ \({50}\,{\upmu \hbox {M}}\) MB ຕົວຢ່າງບໍ່ມີ DNA.
ເພື່ອຢັ້ງຢືນຜົນໄດ້ຮັບຂ້າງເທິງ, ພວກເຮົາໄດ້ເຮັດການວັດແທກທາງ optical ໂດຍໃຊ້ UV/Vis spectrophotometer (Thermo Scientific Multiskan GO), ຕົວຢ່າງ \({50}\,{{\upmu \hbox {l}}}\) ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບແຕ່ລະອັນ. ການວັດແທກ.ລາຍເຊັນການດູດຊຶມຫຼຸດລົງດ້ວຍການເພີ່ມຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DNA, ດັ່ງທີ່ເຫັນໄດ້ຈາກທ່າອ່ຽງຂອງພື້ນທີ່ພາຍໃຕ້ເສັ້ນໂຄ້ງການດູດຊຶມສໍາລັບຊ່ວງຄວາມຍາວຄື່ນ \(600\,\hbox {nm}\) ຫາ \(700\,\hbox { nm}\), ດັ່ງທີ່ສະແດງໃນຮູບທີ 4 (ສະເປກການດູດຊຶມສະແດງໃນຮູບ S3 ໃນຂໍ້ມູນເສີມ).ສຳລັບຕົວຢ່າງທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DNA ໜ້ອຍກວ່າ \({1}\,{\hbox {ng}/\upmu \hbox {l}}}\), ບໍ່ມີຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນໃນການດູດເອົາລະຫວ່າງຕົວຢ່າງທີ່ມີ DNA ແລະ MB ເທົ່ານັ້ນ (ສໍາລັບ \(503\,\hbox {bp}\) ແລະ \(117\,\hbox {bp}\ ) fragments ຄວາມຍາວ), ຊີ້ໃຫ້ເຫັນເຖິງການຂາດ steric inhibition ຂອງ redox-active MB. ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DNA ທີ່ສູງຂຶ້ນ, ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນການຫຼຸດລົງເທື່ອລະກ້າວຂອງສັນຍານການດູດຊຶມແລະສັງເກດເຫັນການຫຼຸດລົງຫນ້ອຍຂອງການດູດຊຶມໃນທີ່ປະທັບຂອງເກືອ. ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນໄດ້ມາຈາກໂມເລກຸນ. ປະຕິສໍາພັນແລະການຍັບຍັ້ງ steric ກັບ stacking ພື້ນຖານໃນປະສົມ DNA. ຜົນໄດ້ຮັບຂອງພວກເຮົາແມ່ນສອດຄ່ອງກັບບົດລາຍງານໃນວັນນະຄະດີກ່ຽວກັບການສຶກສາ spectroscopic ຂອງ intercalation MB-DNA ທີ່ເຊື່ອມໂຍງ hypochromaticity ກັບລະດັບພະລັງງານຫຼຸດລົງໃນ \(\pi\)–\(\pi ^*\ ) ການຫັນປ່ຽນທາງອີເລັກໂທຣນິກອັນເນື່ອງມາຈາກ intercalation Layers 36, 37, 38.
Agarose gel electrophoresis ຂອງ phage Phi6: ຜະລິດຕະພັນ PCR ຂອງຄວາມຍາວ \(117\,\hbox {bp}\) ແລະ \(503\,\hbox {bp}\) ຈາກຕົວຢ່າງນ້ໍາທະເລສາບ.M-DNA marker;ການຄວບຄຸມ NTC-no-template, primers ປະກອບດ້ວຍ amplicons ທີ່ສອດຄ້ອງກັນ;ການຄວບຄຸມທາງບວກ PC;1, 2, 3- undiluted (1:1) ຕົວຢ່າງນ້ໍາໃນທະເລສາບເປັນ triplicate.A ແຖບແມ່ນເຫັນໄດ້ໃນ \(\ ປະມານ 50\,\hbox {bp}\) ເນື່ອງຈາກ oligonucleotides ບໍ່ໄດ້ໃຊ້ໃນ \(503\,\ hbox {bp}\) ເລນ.
ພວກເຮົາໄດ້ປະເມີນຜົນປະໂຫຍດຂອງເຊັນເຊີໂດຍໃຊ້ຕົວຢ່າງນ້ໍາ Powai Lake ເພີ່ມຂຶ້ນດ້ວຍ Phi6 phage. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ RNA ທີ່ແຍກອອກຈາກຕົວຢ່າງນ້ໍາ phage ຕັ້ງແຕ່ 15.8–\({19.4}\,{\upmu \hbox {g}/\hbox { ml}}\), ໃນຂະນະທີ່ພວກມັນແຍກອອກຈາກ phage suspensions ບໍລິສຸດ RNA ຄາດວ່າຈະເປັນ \({1945}\,{\upmu \hbox {g}/\hbox {ml}}\) ທີ່ມີປະສິດຕິພາບການຟື້ນຕົວປະມານ 1. %.RNA ໄດ້ຖືກຖອດຖອນຄືນເປັນ cDNA ແລະໃຊ້ເປັນແມ່ແບບສໍາລັບ PCR ແລະ qPCR. ຂະຫນາດຂອງຜະລິດຕະພັນໄດ້ຮັບການຢືນຢັນໂດຍ agarose gel electrophoresis (ຮູບ 5) ກ່ອນທີ່ຈະທົດສອບກັບເຊັນເຊີ. ຕົວຢ່າງເຫຼົ່ານີ້ບໍ່ໄດ້ຖືກ gel purified ແລະດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງມີອົງປະກອບທັງຫມົດຂອງ PCR ເປັນ. ເຊັ່ນດຽວກັນກັບ amplicons ທີ່ມີຄວາມສົນໃຈ. ຄ່າ Ct ທີ່ບັນທຶກໄວ້ໃນລະຫວ່າງ qPCR (ຕາຕະລາງ 1) ໄດ້ຖືກສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງຄວາມກ່ຽວຂ້ອງຂອງຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ RNA ທີ່ໂດດດ່ຽວຈາກຕົວຢ່າງນ້ໍາ spiked ທີ່ສອດຄ້ອງກັນ. ຄ່າ Ct ສະແດງໃຫ້ເຫັນຈໍານວນຂອງຮອບວຽນທີ່ຕ້ອງການສໍາລັບສັນຍານ fluorescent ກັບ. ເກີນຂອບເຂດ ຫຼືສັນຍານພື້ນຫຼັງ. ຄ່າ Ct ສູງກວ່າສະແດງເຖິງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງແມ່ແບບຕໍ່າກວ່າ ແລະໃນທາງກັບກັນ. ຄ່າ Ct ຂອງຕົວຢ່າງ NTC ແມ່ນສູງຕາມທີ່ຄາດໄວ້. ຄວາມແຕກຕ່າງໃນ \(\ປະມານ 3\) ຄ່າ Ct ໃນລະຫວ່າງ ການຄວບຄຸມໃນທາງບວກແລະຕົວຢ່າງການທົດສອບຊີ້ໃຫ້ເຫັນຕື່ມອີກວ່າແຕ່ລະຕົວຢ່າງການທົດສອບມີປະມານ 1% template ເມື່ອທຽບກັບການຄວບຄຸມໃນທາງບວກ. ພວກເຮົາໄດ້ປຶກສາຫາລືກ່ອນຫນ້ານີ້ວ່າ amplicons ທີ່ຍາວກວ່ານໍາໄປສູ່ຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ດີກວ່າ. ການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວກວ່າທີ່ແຍກອອກຈາກຕົວຢ່າງສິ່ງແວດລ້ອມ heterogeneous ແມ່ນສິ່ງທ້າທາຍເນື່ອງຈາກຂໍ້ເສຍ. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງໄວຣັດຕໍ່າແລະການເຊື່ອມໂຊມຂອງ RNA. ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ດ້ວຍໂປຣໂຕຄໍຂະຫຍາຍໄວຣັດ ແລະ PCR ຂອງພວກເຮົາ, ພວກເຮົາສາມາດຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນ \(503\,\hbox {bp}\) ສຳລັບການຮັບຮູ້ທາງເຄມີໄດ້ຢ່າງສຳເລັດຜົນ.
ຮູບທີ່ 6 ສະແດງຜົນຂອງເຊັນເຊີໄຟຟ້າເຄມີຂອງ \(503\,\hbox {bp}\) fragment amplicon, ທັງໃຊ້ cDNA ທີ່ບໍ່ເຈືອຈາງເປັນແມ່ແບບ (1:1) ແລະ 100-fold cDNA ເຈືອຈາງເປັນແມ່ແບບ (1:100) ປະຕິບັດ PCR , ເມື່ອປຽບທຽບກັບ NTC ແລະ PC (ເບິ່ງຮູບ S4 ໃນຂໍ້ມູນເສີມສໍາລັບ voltammograms ຕົວແທນ).ແຕ່ລະກ່ອງໃນ boxplot ໃນຮູບ 6 ປະກອບດ້ວຍການວັດແທກຈາກສາມຕົວຢ່າງຢູ່ທີ່ 5 electrodes. ໄຟຟ້າດຽວກັນໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອວັດແທກຕົວຢ່າງທັງຫມົດເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຜິດພາດເນື່ອງຈາກ electrode. -to-electrode variation. ເມື່ອປຽບທຽບກັບການວັດແທກ CV, ການວັດແທກ DPV ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມລະອຽດທີ່ດີກວ່າໃນການຈໍາແນກການທົດສອບແລະຕົວຢ່າງ PC ຈາກ NTCs ເພາະວ່າ, ດັ່ງທີ່ໄດ້ກ່າວມາກ່ອນຫນ້ານີ້, ກະແສ Faradaic ຖືກເຊື່ອງໄວ້ເນື່ອງຈາກກະແສ capacitive ພື້ນຖານໃນຍຸກສຸດທ້າຍ. ສໍາລັບ amplicons ທີ່ຍາວກວ່າ, ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນວ່າ ການຄວບຄຸມທາງລົບ (NTC) ສົ່ງຜົນໃຫ້ກະແສໄຟຟ້າສູງສຸດຂອງ CV ແລະ DPV ສູງຂື້ນໂດຍສົມທຽບກັບການຄວບຄຸມໃນທາງບວກ, ໃນຂະນະທີ່ຕົວຢ່າງການທົດສອບໃນທາງບວກແລະບໍ່ໄດ້ເຈືອຈາງໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມສູງຂອງຈຸດສູງສຸດຂອງ DPV ໃນປະຈຸບັນ. ຄ່າສະເລ່ຍທີ່ວັດແທກໄດ້ແລະຄ່າປານກາງສໍາລັບແຕ່ລະ undiluted (1: 1. ) ຕົວຢ່າງການທົດສອບແລະ PC ສາມາດແກ້ໄຂໄດ້ຢ່າງຊັດເຈນຈາກຜົນຜະລິດຂອງເຊັນເຊີສໍາລັບຕົວຢ່າງ NTC, ໃນຂະນະທີ່ຄວາມລະອຽດສໍາລັບຕົວຢ່າງ 1:100 diluted ແມ່ນຫນ້ອຍ pronounced. ສໍາລັບ 100-fold dilution ຂອງ cDNA, ພວກເຮົາບໍ່ໄດ້ສັງເກດເຫັນແຖບໃດໃນລະຫວ່າງການ electrophoresis gel. (ເລນບໍ່ສະແດງໃນຮູບທີ 5), ແລະກະແສສູງສຸດຂອງ DPV ແລະ CV ທີ່ສອດຄ້ອງກັນແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບທີ່ຄາດໄວ້ສໍາລັບ NTC. ຜົນໄດ້ຮັບສໍາລັບຊິ້ນ \(117\,\hbox {bp}\) ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຂໍ້ມູນເສີມ. ດ້ານລົບ ການຄວບຄຸມ induced ການຕອບສະຫນອງ electrochemical ຈາກເຊັນເຊີ PCB ເນື່ອງຈາກການ adsorption ຂອງ MB ຟຣີໃນ electrode ແລະການປະຕິສໍາພັນຂອງ MB ກັບ primer oligonucleotide ສາຍດຽວ. ດັ່ງນັ້ນ, ແຕ່ລະຄັ້ງການທົດສອບຕົວຢ່າງ, ການຄວບຄຸມທາງລົບຕ້ອງໄດ້ຮັບການດໍາເນີນການແລະ. ກະແສໄຟຟ້າສູງສຸດຂອງຕົວຢ່າງການທົດສອບທຽບກັບກະແສໄຟຟ້າສູງສຸດທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍການຄວບຄຸມທາງລົບເພື່ອບັນລຸການວັດແທກຄວາມແຕກຕ່າງ (ພີ່ນ້ອງ) 39,40 ເພື່ອຈັດປະເພດຕົວຢ່າງການທົດສອບເປັນບວກຫຼືລົບ.
(a) DPV, ແລະ (b) ກະແສໄຟຟ້າສູງສຸດຂອງ CV ສໍາລັບການກວດສອບທາງເຄມີຂອງຊິ້ນ \(503\,\hbox {bp}\) ໃນຕົວຢ່າງນ້ໍາທະເລສາບ. ຕົວຢ່າງການທົດສອບໄດ້ຖືກວັດແທກເປັນ triplicate ແລະປຽບທຽບກັບບໍ່ມີຕົວຄວບຄຸມແມ່ແບບ (NTC) ແລະ ການຄວບຄຸມທາງບວກ (PC).
ການຄົ້ນພົບຂອງພວກເຮົາສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງກົນໄກທີ່ແຕກຕ່າງກັນທີ່ສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການປະຕິບັດຂອງເຊັນເຊີໄຟຟ້າເຄມີສໍາລັບ amplicons ທີ່ມີຄວາມຍາວທີ່ແຕກຕ່າງກັນສໍາລັບ DNAs ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ກວດສອບໂດຍການວັດແທກທາງ optical ໂດຍໃຊ້ UV / Vis spectrophotometer. ການສັງເກດການຂອງພວກເຮົາຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມເຂົ້າໃຈວ່າຊິ້ນສ່ວນ DNA ຍາວເຖິງ \(\ approx\) \(500\,\hbox {bp}\) ສາມາດກວດພົບໄດ້ດ້ວຍຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ສູງກວ່າ ແລະການມີເກືອໃນຕົວຢ່າງບໍ່ໄດ້ຮັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DNA ທີ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ສູງຂຶ້ນ (ບໍ່ຄ່ອຍ \(\hbox {ng}/\upmu \hbox {l}}}\) ແລະຂ້າງເທິງ).ນອກຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ຄົ້ນຄວ້າຜົນກະທົບຂອງຕົວຢ່າງປະເພດຕ່າງໆ, ລວມທັງ gel-purified amplicons ທີ່ມີແລະບໍ່ມີເກືອ, ແລະການເພີ່ມຕົວຢ່າງນ້ໍາທະເລສາບໃນການວັດແທກ DPV ແລະ CV.ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນວ່າ DPV ສະຫນອງການແກ້ໄຂທີ່ດີກວ່າ, ນັບຕັ້ງແຕ່ກະແສ capacitive ພື້ນຖານຍັງມີຜົນກະທົບຕໍ່ການວັດແທກ CV, ເຮັດໃຫ້ມັນມີຄວາມອ່ອນໄຫວຫນ້ອຍ.
ການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວກວ່າແມ່ນຂຶ້ນກັບຄວາມສົມບູນຂອງ RNA ເຊື້ອໄວຣັດ. ການສຶກສາຫຼາຍໆຄັ້ງໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວກວ່າແມ່ນບໍ່ມີປະສິດທິພາບສະ ເໝີ ໄປຍ້ອນການເສື່ອມໂຊມຂອງ RNA ໃນສະພາບແວດລ້ອມແລະທ່າແຮງຂອງການແຕກແຍກໃນລະຫວ່າງການໂດດດ່ຽວ11,41,42,43,44. .ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນວ່າວິທີການຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເຊື້ອໄວຣັສທີ່ໃຊ້ PEG ແມ່ນມີປະສິດທິພາບຫຼາຍກວ່າໃນການສຸມໃສ່ phage Phi-6 ເພີ່ມຂຶ້ນໃນຕົວຢ່າງນ້ໍາໃນທະເລສາບຫຼາຍກ່ວາວິທີການຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງເຊື້ອໄວຣັດທີ່ອີງໃສ່ອາລູມິນຽມ hydroxide. ຄວາມສາມາດໃນການກວດພົບຊິ້ນ DNA ຍາວໄດ້ພິສູດວ່າເອົາຊະນະຄວາມຕ້ອງການຂອງ multiplex PCR. ເພື່ອຂະຫຍາຍແມ່ແບບຄວາມຍາວທີ່ສັ້ນກວ່າຫຼາຍອັນ ແລະຫຼຸດຜ່ອນຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງຄວາມສະເພາະຂ້າມ.
ຕົວຢ່າງທາງຊີວະພາບແມ່ນຂາດແຄນ, ສະນັ້ນມັນຈໍາເປັນຕ້ອງອອກແບບ biosensor ທີ່ຕ້ອງການຕົວຢ່າງຫນ້ອຍທີ່ສຸດສໍາລັບການທົດສອບ. ໄຟຟ້າ ENIG PCB ທີ່ໃຊ້ໃນການສຶກສານີ້ພຽງແຕ່ຕ້ອງການ \({5}\,{{\upmu \hbox {l}}}\ ) ຕົວຢ່າງສໍາລັບການທົດສອບເພື່ອກວມເອົາພື້ນທີ່ປະສິດທິພາບຂອງ electrodes. ນອກຈາກນັ້ນ, electrode ດຽວກັນສາມາດໄດ້ຮັບການນໍາໃຊ້ຄືນໃຫມ່ຫຼັງຈາກການທໍາຄວາມສະອາດກ່ອນທີ່ຈະ dispensing ຕົວຢ່າງຕໍ່ໄປ. ຕົວຢ່າງການຂະຫຍາຍບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງມີການເພີ່ມສານເຄມີໃດໆນອກຈາກ methylene ສີຟ້າ, ຊຶ່ງເປັນລາຄາບໍ່ແພງ. ແລະສານເຄມີທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປ. ເນື່ອງຈາກແຕ່ລະ electrode ມີລາຄາປະມານ $0.55 (ຫຼື INR 40) ໃນການຜະລິດ, biosensor ນີ້ສາມາດເປັນທາງເລືອກທີ່ຄຸ້ມຄ່າກັບເຕັກໂນໂລຊີການກວດສອບທີ່ມີຢູ່ແລ້ວ. ຕາຕະລາງ 2 ສະແດງໃຫ້ເຫັນການປຽບທຽບການເຮັດວຽກນີ້ກັບ sensors ອື່ນໆທີ່ລາຍງານໃນວັນນະຄະດີເປັນເວລາດົນ. ຊິ້ນ DNA ໃນຕົວຢ່າງທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.
ເນື່ອງຈາກໂປໂຕຄອນການກວດສອບທາງເຄມີທີ່ອີງໃສ່ MB ອີງໃສ່ຄວາມສະເພາະຂອງ PCR, ຂໍ້ຈໍາກັດທີ່ສໍາຄັນຂອງວິທີການນີ້ແມ່ນທ່າແຮງສໍາລັບການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ສະເພາະໃນຕົວຢ່າງທີ່ຫຼາກຫຼາຍເຊັ່ນ: ນ້ໍາເສຍແລະນ້ໍາທະເລສາບຫຼືການນໍາໃຊ້ primers ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດຕ່ໍາ. ເພື່ອປັບປຸງຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງ. ວິທີການກວດຫາທາງເຄມີເພື່ອກວດຫາ DNA ຂອງຜະລິດຕະພັນ PCR ທີ່ບໍ່ສະອາດໂດຍໃຊ້ electrodes ENIG PCB ທີ່ບໍ່ໄດ້ຮັບການປັບປຸງ, ມັນຈໍາເປັນຕ້ອງເຂົ້າໃຈຄວາມຜິດພາດທີ່ນໍາສະເຫນີໂດຍ dNTPs ແລະ primers ທີ່ບໍ່ໄດ້ໃຊ້, ແລະເພື່ອເພີ່ມປະສິດທິພາບເງື່ອນໄຂຕິກິຣິຍາແລະອະນຸສັນຍາການວິເຄາະ. ຕົວກໍານົດການ Physicochemical ເພີ່ມເຕີມເຊັ່ນ: pH, ອຸນຫະພູມ, ແລະທາງຊີວະພາບ. ຄວາມຕ້ອງການອົກຊີເຈນ (BOD) ຂອງຕົວຢ່າງນ້ໍາຍັງອາດຈະຕ້ອງໄດ້ຮັບການວັດແທກເພື່ອປັບປຸງຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງການວັດແທກ.
ສະຫຼຸບແລ້ວ, ພວກເຮົາສະເຫນີເຊັນເຊີ electrochemical ENIG PCB ທີ່ມີລາຄາຖືກສໍາລັບການກວດສອບເຊື້ອໄວຣັສໃນສະພາບແວດລ້ອມ (ນ້ໍາທະເລສາບ) ຕົວຢ່າງ. ບໍ່ເຫມືອນກັບ electrodes oligonucleotide immobilized ຫຼື substrates ທີ່ກໍາຫນົດເອງສໍາລັບການຮັບຮູ້ DNA ທີ່ຕ້ອງການການເກັບຮັກສາ cryogenic ເພື່ອຮັກສາຄວາມອ່ອນໄຫວ, 53,54 ເຕັກນິກຂອງພວກເຮົາໃຊ້ PCB ທີ່ບໍ່ດັດແປງ. ອິເລັກໂທຣດທີ່ມີອາຍຸການເກັບມ້ຽນທີ່ຍາວກວ່າ ແລະບໍ່ມີຄວາມຕ້ອງການການເກັບຮັກສາສະເພາະ ແລະດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງເໝາະສົມກັບການພັດທະນາການແກ້ໄຂການວັດແທກດ້ວຍການປະມວນຜົນຕົວຢ່າງອັດຕະໂນມັດທີ່ນຳໃຊ້ໃນ LMICs. The biosensor ນຳໃຊ້ສີຍ້ອມສີແດງ DNA-intercalating redox (MB) ລາຄາຖືກ (MB) ສໍາລັບການກວດຫາ amplicons ເປົ້າໝາຍຢ່າງໄວວາ. ການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ສະເພາະ. ທົ່ວໄປໃນຕົວຢ່າງສິ່ງແວດລ້ອມຫຼຸດຜ່ອນຄວາມສະເພາະຂອງວິທີການຮັບຮູ້ນີ້ເນື່ອງຈາກການຜູກມັດທີ່ບໍ່ສະເພາະຂອງ MBs ກັບ oligonucleotides ດຽວແລະສອງສາຍ. ດັ່ງນັ້ນ, ຄວາມສະເພາະຂອງການທົດສອບນີ້ແມ່ນຂຶ້ນກັບການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ primers ແລະເງື່ອນໄຂຕິກິຣິຍາ PCR. ນອກຈາກນັ້ນ, CV. ແລະກະແສໄຟຟ້າສູງສຸດ DPV ທີ່ໄດ້ຮັບຈາກຕົວຢ່າງທີ່ທົດສອບຄວນໄດ້ຮັບການຕີຄວາມກ່ຽວຂ້ອງກັບການຕອບສະຫນອງທີ່ໄດ້ຮັບຈາກການຄວບຄຸມທາງລົບ (NTC) ສໍາລັບແຕ່ລະການທົດສອບ. ການອອກແບບເຊັນເຊີ electrochemical ແລະວິທີການທີ່ນໍາສະເຫນີໃນວຽກງານນີ້ສາມາດປະສົມປະສານກັບ autosamplers ເພື່ອພັດທະນາອັດຕະໂນມັດຢ່າງເຕັມທີ່ແລະຕ່ໍາ. - ການແກ້ໄຂຄ່າໃຊ້ຈ່າຍທີ່ສາມາດເກັບກໍາແລະວິເຄາະຕົວຢ່າງແລະການສົ່ງຜົນໄດ້ຮັບແບບໄຮ້ສາຍກັບຄືນໄປບ່ອນຫ້ອງທົດລອງ.
Cashdollar, J. & Wymer, L. ວິທີການສໍາລັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນເບື້ອງຕົ້ນຂອງໄວຣັສຈາກຕົວຢ່າງນ້ໍາ: ການທົບທວນຄືນແລະການວິເຄາະ meta ຂອງການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາ.J.Application.microorganism.115, ໜ້າ 1-11 (2013).
Gall, AM, Mariñas, BJ, Lu, Y. & Shisler, JL Waterborne viruses: Barriers to safe drink water.PLoS Pathogens.11, E1004867 (2015).
Shrestha, S. et al. ການລະບາດຂອງນ້ຳເສຍສຳລັບການເຝົ້າລະວັງຂະໜາດໃຫຍ່ຂອງ COVID-19 ໃນປະເທດທີ່ມີລາຍໄດ້ຕ່ຳ ແລະ ປານກາງ: ສິ່ງທ້າທາຍ ແລະ ໂອກາດ. Water 13, 2897 (2021).
Palecek, E. & Bartosik, M. ອາຊິດນິວຄລີອິກ electrochemistry.Chemical.Rev.112, 3427–3481 (2012).
Tani, A., Thomson, AJ & Butt, JN Methylene blue as an electrochemical discriminator of single- and double-stranded oligonucleotides immobilized on gold substrates.Analyst 126, 1756-1759 (2001).
Wong, EL, Erohkin, P. & Gooding, JJ ການປຽບທຽບ Cation ແລະ Anion Intercalators ສໍາລັບການສົ່ງໄຟຟ້າທາງເຄມີຂອງ DNA Hybridization ໂດຍ Long-Range Electron Transfer.Electrochemistry.comminicate.6, 648–654 (2004).
Wong, EL & Gooding, JJ Charge ໂອນຜ່ານ DNA: ເປັນ electrochemical DNA biosensor.anus.Chemical.78, 2138–2144 (2006).
Fang, TH et al.Real-time PCR ອຸປະກອນ microfluidic ກັບ electrochemical detection.biological sensor.Bioelectronics.24, 2131–2136 (2009).
Win, BY et al.Signaling ການສຶກສາກົນໄກແລະການກວດສອບປະສິດທິພາບຂອງລະບົບ PCR ທີ່ໃຊ້ເວລາທີ່ແທ້ຈິງ electrochemical ໂດຍອີງໃສ່ປະຕິສໍາພັນຂອງ methylene blue ກັບ DNA.Analyst 136, 1573-1579 (2011).
Ramirez-Chavarria, RG et al.Loop-mediated isothermal amplification-based sensor electrochemical for detection of sars-cov-2 in wastewater samples.J.Environment.Chemical.Britain.10, 107488 (2022).
Kumar, M. et al.Electrochemical sensing of SARS-CoV-2 amplicons with PCB electrodes.The sensor is activated.B Chemistry.343, 130169 (2021).
Kitamura, K., Sadamasu, K., Muramatsu, M. & Yoshida, H. ການກວດຫາປະສິດທິພາບຂອງ SARS-CoV-2 RNA ໃນສ່ວນທີ່ແຂງຂອງ wastewater.science.general environment.763, 144587 (2021).
Alygizakis, N. et al.Analytical Methods for SARS-CoV-2 Detection in Wastewater: Protocol and Future Perspectives.TraC trending anal.Chemical.134, 116125 (2020).
Fedorenko, A., Grinberg, M., Orevi, T. & Kashtan, N. ການຢູ່ລອດຂອງ bacteriophage ຊອງ Phi6 (ຕົວແທນສໍາລັບ SARS-CoV-2) ໃນ droplets ນໍ້າລາຍ evaporated deposited on glass surfaces.science.Rep.10, 1–10 (2020).
Dey, R., Dlusskaya, E. & Ashbolt, NJ ຄວາມຄົງຕົວດ້ານສິ່ງແວດລ້ອມຂອງຕົວແທນ SARS-CoV-2 (Phi6) ໃນ amoeba.J.Water Health 20, 83 (2021).
Mindich, L. ການຫຸ້ມຫໍ່ທີ່ຊັດເຈນຂອງສາມຊິ້ນຂອງ genomic ຂອງ bacteriophage RNA ສອງສາຍ\(\varphi\)6.microorganism.Moore.biology.Rev.63, 149–160 (1999).
Pirttimaa, MJ & Bamford, ໂຄງສ້າງຮອງຂອງ DH RNA phage\(\varphi\)6 ຂົງເຂດການຫຸ້ມຫໍ່.RNA 6, 880–889 (2000).
Bonilla, N. et al.Phages on the Tap – ໂປຣໂຕຄໍໄວ ແລະ ມີປະສິດທິພາບໃນການກະກຽມຄັງເກັບ bacteriophages.PeerJ 4, e2261 (2016).
ເວລາປະກາດ: 27-05-2022